野鳥是禽流感病毒(Avian Influence Virus,AIV)的自然宿主,在野鳥中可以監(jiān)測到幾乎所有亞型(H1-H16,N1-N9)的禽流感病毒。候鳥,特別是遷徙水禽,在遷徙過程中能夠攜帶并跨國境甚至跨大陸傳播禽流感病毒,并且其與遷徙路徑上的家禽接觸后能夠獲得家禽源禽流感病毒基因,這加速了禽流感病毒的傳播擴(kuò)散與重排、豐富了禽流感病毒的遺傳多樣性。在興凱湖地區(qū)開展野鳥禽流感病毒監(jiān)測研究,能夠深入了解候鳥中禽流感病毒基因庫的“豐度”,并探究候鳥攜帶禽流感病毒傳播的規(guī)律,對于做好禽流感病毒的防控有著十分重要的意義。本研究于2013年9月至2018年10月在黑龍江興凱湖地區(qū)進(jìn)行野鳥禽流感病毒的監(jiān)測研究,一方面調(diào)查了解了興凱湖地區(qū)野鳥攜帶禽流感病毒的亞型分布情況;另一方面對禽流感分離株進(jìn)行了遺傳進(jìn)化分析。2013年9月至2018年10月,在春季和秋季候鳥遷徙時(shí)間段內(nèi),在黑龍江興凱湖地區(qū)共采集野生水禽樣品3767份,其中新鮮糞便樣品3309份,咽肛拭子438份,臟器20份。通過SPF雞胚進(jìn)行AIV的分離,對收獲的尿囊液用血凝試驗(yàn)初步檢測AIV,最后用RT-PCR進(jìn)行病毒鑒定和亞型測定,檢測結(jié)果顯示有29份樣品呈AIV陽性,AIV總體分離率為0.77%。亞型鑒定結(jié)果顯示,共分離1株H3N3、1株H3N5、1株H3N8、2株 H4N6、1 株 H5N2、11 株 H5N6、1 株 H6N6、1 株 H5N8、1 株 H10N7 和 9 株H16N3。病毒分離結(jié)果顯示,秋季禽流感病毒的分離率高于春季;咽肛拭子樣品中AIV陽性率遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于糞便樣品和臟器樣品。23株分離株的HA裂解位點(diǎn)分析結(jié)果表明,11株H5N6分離株和1株H5N8分離株符合高致病性禽流感的典型分子特征:另外,3株H16N3分離株HA蛋白發(fā)生了G228S的氨基酸突變,這增強(qiáng)了病毒結(jié)合α-2,6受體(哺乳動(dòng)物)的能力,提示它們有感染人的潛質(zhì)。NA關(guān)鍵氨基酸位點(diǎn)比較分析結(jié)果表明,11株H5N6分離株出現(xiàn)了頸部氨基酸的缺失,這增強(qiáng)了對小鼠的致病性。外部基因的遺傳進(jìn)化結(jié)果顯示,興凱湖地區(qū)野生水禽中禽流感病毒不同亞型之間有著一定的基因重排現(xiàn)象。內(nèi)部基因的遺傳進(jìn)化結(jié)果顯示,黑龍江地區(qū)野生水禽中禽流感病毒內(nèi)部基因有著豐富的來源,與亞洲、歐洲甚至是北美洲的多個(gè)國家和地區(qū)間的禽流感病毒間有著廣泛而頻繁的基因交流。本研究分離株大部分基因片段與蒙古、韓國和日本地區(qū)的分離株有著十分相近的親緣關(guān)系,這說明在興凱湖、蒙古、韓國和日本之間的禽流感病毒存在著頻繁的基因交流與交換。BG/LX-97/14(H3N3)分離株從已獲得的7個(gè)基因片段看(未獲得NA基因序列),是多來源重組毒株,其PB2基因來源于日本/韓國的野生水禽源毒株,PB1、PA1和H3基因來源于日本/韓國家禽源毒株,而NP、M和NS基因來源于北美洲阿拉斯加野生水禽源毒株,由此推測野生水禽可以攜帶北美源禽流感病毒跨越白令海峽造成的地理隔離傳播至歐亞大陸,禽流感病毒跨大陸傳播的現(xiàn)象同樣在BG/JHM-133/15(H3N8)的N8基因、3株H16N3分離株的PB2基因上被監(jiān)測到,阿拉斯加和興凱湖很可能是北美大陸和歐亞大陸之間禽流感病毒傳播和基因擴(kuò)散的重要站點(diǎn)。遺傳進(jìn)化分析和系統(tǒng)地理發(fā)生學(xué)分析結(jié)果表明,2016-2017年中國興凱湖、韓國、日本地區(qū)監(jiān)測到的H5N6亞型禽流感病毒全基因組具有極為相近的親緣關(guān)系,具有相同的進(jìn)化來源。結(jié)合候鳥衛(wèi)星跟蹤數(shù)據(jù),推測興凱湖地區(qū)作為此次H5N6亞型禽流感病毒擴(kuò)散的起源,由野鳥攜帶傳播至韓國和日本。另外,2017-2018年冬季越南地區(qū)的家禽中同樣監(jiān)測到了 H5N6亞型禽流感病毒,其中有一部分毒株也是起源于興凱湖地區(qū)。
【學(xué)位單位】：東北林業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類】：S852.65
【部分圖文】：

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本文編號：2867596