本文關鍵詞：坦布蘇病毒對櫻桃谷育成鴨的致病性研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：自2010年4月以來,我國多個地區(qū)肉鴨、蛋鴨養(yǎng)殖區(qū)暴發(fā)了一種以蛋鴨產蛋量下降和雛鴨神經癥狀為特征的急性傳染病,研究表明該病是由一種新型黃病毒——坦布蘇病毒(Tembusu virus,簡稱TMUV)感染引起的。TMUV感染發(fā)病迅速、發(fā)病率和死亡率較高,傳播速度快、流行范圍廣,嚴重威脅我國水禽產業(yè)的健康發(fā)展,造成了巨大的經濟損失。本研究利用實驗室分離的鴨源坦布蘇病毒,人工感染不同周齡育成鴨,研究不同周齡育成鴨對TMUV的易感性,旨在為坦布蘇病毒的防控提供理論依據(jù)。本試驗將350只櫻桃谷后備鴨隨機分為14組,每組25只后備鴨,1~7組為試驗組,分別于7、10、12、14、16、18和21周齡人工靜脈接種TMUV AHQY株病毒液(1.265x105 ELD50),8~14組為對照組,分別于上述對應時間接種相同劑量的無菌磷酸鹽緩沖液(PBS)。攻毒后連續(xù)觀察20d,每天采集泄殖腔和咽喉棉拭子樣品,觀察并記錄發(fā)病情況,分別于攻毒后第2 5、8、12、16和20d隨機剖殺試驗組和對照組鴨各4只,觀察并記錄感染鴨的臨床癥狀和剖檢變化。無菌采集心臟、肝臟、脾臟、腎臟和腦等器官進行病理組織學、免疫組織化學研究,利用建立的熒光定量RT-PCR方法檢測感染鴨的排毒規(guī)律和各組織中病毒含量,血清中和試驗測定血清中特異性抗體水平,ELISA方法檢測血液中細胞因子含量。結果顯示,7周齡和21周齡鴨感染TMUV后,部分鴨出現(xiàn)明顯癥狀,而其它周齡組鴨感染TMUV后癥狀不明顯。剖檢變化顯示,7、18和21周齡組感染鴨呈現(xiàn)不同程度的腦膜充血、出血,心肌水腫、松軟,肝脾腫大、出血,病理組織學結果顯示,腦小膠質細胞增生,內臟器官細胞腫脹、變性和壞死并伴有炎性細胞浸潤,而14~16周齡感染鴨剖檢變化和組織微觀病變較輕微。免疫組化結果顯示,7周齡和21周齡組感染鴨組織中陽性細胞著色深且分布廣,14和16周齡組感染鴨組織中陽性細胞少。熒光定量結果顯示,7、10和21周齡組感染鴨腎臟、肝臟、腦和卵巢中檢測到的病毒拷貝數(shù)較多,而14和16周齡組感染鴨上述器官檢測到的病毒拷貝數(shù)較少;7和21周齡感染組泄殖腔和咽喉拭子樣品可以檢測到較多的病毒拷貝數(shù),而14和16周齡組感染鴨棉拭子樣品中檢測到病毒含量較少。感染后第8d所有存活鴨均可產生陽性抗體,14周齡感染鴨的血清中和抗體水平要顯著高于其它周齡感染鴨。人工感染第16和18周齡育成鴨的細胞因子含量與對照組相比差異不顯著。結論:TMUV對育成鴨的致病性與感染周齡存在部分相關性,7~10周齡、18~21周齡育成鴨對TMUV較易感,而14~16周齡育成鴨對TMUV的抵抗力較強。
【關鍵詞】：坦布蘇病毒 櫻桃谷育成鴨 周齡 致病性研究
【學位授予單位】：山東農業(yè)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：S858.32
【目錄】：

• 符號說明4-7
• 中文摘要7-9
• Abstract9-11
• 前言11-25
• 1.1 坦布蘇病毒的生物學特性11-15
• 1.1.1 病毒分類學地位11-12
• 1.1.2 形態(tài)結構12
• 1.1.3 病毒理化性質和培養(yǎng)特性12-13
• 1.1.4 TMUV基因組結構及編碼蛋白13-15
• 1.2 病毒流行病學研究15-16
• 1.3 病毒感染臨床癥狀及病理變化16-17
• 1.3.1 臨床癥狀16
• 1.3.2 病理變化16-17
• 1.4 病毒診斷方法進展17-20
• 1.4.1 臨床診斷17
• 1.4.2 實驗室診斷17-20
• 1.5 坦布蘇病毒感染的防制20-21
• 1.5.1 生物安全防治措施20
• 1.5.2 疫苗預防20-21
• 1.5.3 藥物治療21
• 1.6 免疫組織化學技術21-22
• 1.7 熒光定量PCR技術22-24
• 1.7.1 熒光定量PCR的原理22
• 1.7.2 熒光定量PCR的種類22-24
• 1.8 中和試驗24-25
• 1.9 本研究的目的和意義25
• 2 材料與方法25-32
• 2.1 材料25-27
• 2.1.1 病毒與試驗動物25-26
• 2.1.2 主要試劑26
• 2.1.3 主要儀器26-27
• 2.1.4 主要溶劑的配制27
• 2.2 方法27-32
• 2.2.1 病毒的增殖27
• 2.2.2 TMUV AHQY株ELD_(50)測定27
• 2.2.3 試驗方法27-28
• 2.2.4 病理組織學及免疫組化研究28-30
• 2.2.5 RNA的提取和熒光定量RT-PCR30-32
• 2.2.6 血清中和實驗32
• 2.2.7 細胞因子測定32
• 3 結果與分析32-43
• 3.1 TMUV AHQY株的分離與鑒定32-34
• 3.2 TMUV人工感染育成鴨的結果34-35
• 3.2.1 臨床癥狀34
• 3.2.2 剖檢變化34-35
• 3.3 組織病理學與免疫組化35-41
• 3.3.1 組織病理學變化35-40
• 3.3.2 免疫組化結果40-41
• 3.4 排毒規(guī)律及組織病毒載量檢測結果41
• 3.5 血清抗體水平檢測結果41-42
• 3.6 血清細胞因子結果42-43
• 4 討論43-46
• 5 結論46-47
• 參考文獻47-55
• 致謝55-56
• 攻讀碩士學位期間發(fā)表論文情況56

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