青藏高原地區(qū)多發(fā)生以多殺性巴氏桿菌(Pasteurella multocida,Pm)為主要致病菌的牛出血性敗血癥等疾病,該病原菌造成牛羊大量死亡、生產(chǎn)性能下降,給畜牧業(yè)造成嚴(yán)重危害,且常規(guī)疫苗和化學(xué)藥物防治效果不理想。本人整理了從西藏牧區(qū)基層畜牧獸醫(yī)站收集到的藏藥復(fù)方,開展抗Pm的藏藥復(fù)方藥效和毒理學(xué)篩選研究,現(xiàn)將研究?jī)?nèi)容總結(jié)如下:(1)藏藥復(fù)方對(duì)多殺性巴氏桿菌的體外抑菌活性研究選取三個(gè)藏藥復(fù)方,分別制備提取物,采用牛津杯法和試管2倍稀釋法測(cè)定對(duì)Pm的抑菌圈直徑和最小抑菌濃度(MIC),篩選確定體外抑菌活性最佳藏藥復(fù)方。結(jié)果表明,藏藥復(fù)方一、二、三對(duì)該標(biāo)準(zhǔn)菌株均有抑菌作用;MIC值分別為15.63 mg/mL、3.9 mg/mL、15.63 mg/mL。藏藥復(fù)方二具有良好的體外抑菌活性。(2)藏藥復(fù)方對(duì)小鼠體內(nèi)感染多殺性巴氏桿菌的藥效學(xué)研究通過建立死亡率為75%的Pm體內(nèi)感染昆明小鼠模型,測(cè)定三個(gè)藏藥復(fù)方在3個(gè)不同給藥量以及感染前、后兩種給藥方式下的小鼠死亡率,評(píng)價(jià)藏藥復(fù)方對(duì)小鼠體內(nèi)感染防治作用。結(jié)果表明,經(jīng)病理解剖、細(xì)菌鏡檢、全自動(dòng)微生物鑒定及藥敏系統(tǒng)(VTEK2 COMPACT)細(xì)菌鑒定,該模型建立成功;復(fù)方一預(yù)防組和治療組小鼠死亡率分別為58.3%、41.7%、83.3%、66.7%、58.3%、91.7%;復(fù)方二小鼠死亡率分別為50%,41.7%,81.8%,66.7%,50%、75%;復(fù)方三小鼠死亡率分別為66.7%、66.7%、66.7%、75%、75%、50%。(3)藏藥復(fù)方翼草景香提取物急性毒性和亞急性毒性試驗(yàn)研究選用SPF級(jí)昆明小鼠,測(cè)定翼草景香提取物的半數(shù)致死量(LD_(50)),評(píng)價(jià)其急性毒性;選用80只SPF級(jí)SD大鼠隨機(jī)分為低(10000 mg/kg)、中(20000 mg/kg)、高(40000mg/kg)劑量組,空白對(duì)照組(灌服超純水40000 mg/kg),開展亞急性毒性試驗(yàn),每組雌雄各10只,大鼠連續(xù)給藥30 d,每天記錄大鼠狀態(tài),檢測(cè)分析各組大鼠體重、臟器指數(shù)、血常規(guī)、血生化指標(biāo)和組織病理學(xué)。結(jié)果表明,未檢測(cè)出翼草景香提取物的LD_(50),最大耐受量試驗(yàn)顯示,試驗(yàn)組小鼠體重與空白組無差異顯著性(P0.05);亞急性毒性試驗(yàn)中,各組大鼠給藥期間無明顯不良反應(yīng),精神狀態(tài)良好。與空白對(duì)照組相比,低劑量組大鼠各指標(biāo)無顯著性差異(P0.05);高劑量組體重、肝臟臟器指數(shù)、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶差異極顯著(P0.01),雌性大鼠的淋巴細(xì)胞、紅細(xì)胞、血紅蛋白、血小板等均差異極顯著(P0.01),單核細(xì)胞差異顯著(P0.05),雄性大鼠血清中葡萄糖差異極顯著(P0.01);中劑量組大鼠血常規(guī)、血生化指標(biāo)基本正常。病理學(xué)組織檢查結(jié)果表明,除高劑量組肝臟有輕微腫大外,其他試驗(yàn)各組臟器均無明顯病理學(xué)變化。(4)藏藥復(fù)方翼草景香提取物中紅景天苷含量測(cè)定采用HPLC測(cè)定翼草景香提取物中紅景天苷含量,結(jié)果表明,紅景天苷進(jìn)樣量在0.03509375~0.56150000 mg/mL之間線性關(guān)系良好,相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.17%~4.35%,回收率為90.99%,提取物中紅景天苷含量為2.7668 mg/g,該方法檢測(cè)靈敏度高、專屬性和重復(fù)性好,結(jié)果可靠。綜上所述,藏藥復(fù)方翼草景香提取物對(duì)Pm具有良好的體內(nèi)、外抑菌活性,急性毒性試驗(yàn)LD_(50)遠(yuǎn)高于5000 mg/kg,亞急性毒性試驗(yàn)結(jié)果表明,低、中劑量組血常規(guī)和血生化指標(biāo)基本正常,且病理組織無病變。因此,篩選獲得的藏藥復(fù)方翼草景香提取物在臨床應(yīng)用中安全可靠,該研究為以后臨床防治巴氏桿菌病提供了一定的理論依據(jù)。
【學(xué)位單位】：甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類】：S852.61;S859.79
【部分圖文】：

2-1 ～ 2-10、3-1 ～ 3-10，37℃恒溫PSS19.0 軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，數(shù)據(jù)采用進(jìn)行作圖。果液數(shù)目為 1×102，1×101個(gè)，則原菌液均勻平鋪一層的菌液濃度為 1×106CF

對(duì)多殺性巴氏桿菌的抑菌圈平均直徑為 13.5 mm，當(dāng)生藥濃度大于等于 62.5 時(shí)對(duì)多殺性巴氏桿菌有抑菌效果。表 2-1 抑菌圈直徑大小隨藥物濃度的變化Fg .2-1 The diameter of bacteriostatic circle vares with the drug concentration生藥濃度（mg/mL）Raw drug concentration抑菌圈直徑（mm）Antibacterial ring diameters500 12.67±1.53250 13.5±0.5125 11.0±162.5 7.67±0.5831.25 015.63 07.8 03.91 0劑二：翼草景香提取物對(duì)多殺性巴氏桿菌抑菌圈大小隨生藥濃度變化見圖 2-2。景香提取物濃度為 500 mg/mL 時(shí)，對(duì)多殺性巴氏桿菌的抑菌圈平均直徑為 28.5當(dāng)翼草景香提取物濃度大于等于 3.91 mg/mL 時(shí)對(duì)多殺性巴氏桿菌有抑菌效果。

125 18.3±1.5362.5 15.83± 0.7631.25 14.17±0.215.63 12.83±0.297.8 12.5±0.53.91 11.33±1.531.95 0管二倍稀釋法測(cè)定藏藥復(fù)方對(duì)多殺性巴氏桿菌的 MIC 值一：細(xì)菌培養(yǎng)試驗(yàn)結(jié)果，試管中生藥濃度為 250 ～ 15.63 mg/mL 的無菌生長(zhǎng)，7.8 ～ 0.49mg/mL 的培養(yǎng)物渾濁，有菌生長(zhǎng)，如圖 2-3 所養(yǎng)物，生藥濃度為 250 ～ 15.63 mg/mL 的培養(yǎng)皿中均無菌落，7的培養(yǎng)皿菌落平鋪一層，方劑一提取物對(duì)多殺性巴氏桿菌的 MIC 值
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本文編號(hào)：2865791