豬子宮內(nèi)膜炎是危害養(yǎng)豬業(yè)的重大疾病之一,主要引起母豬繁殖障礙、仔豬腹瀉等癥狀,嚴(yán)重地影響了豬場(chǎng)的經(jīng)濟(jì)效益。近年來,隨著抗生素的不合理使用,耐藥菌株持續(xù)增多,耐藥征象日益嚴(yán)重,豬子宮內(nèi)膜炎的防治越發(fā)困難。噬菌體是一種能特異性感染并殺死細(xì)菌的病毒,它能在細(xì)菌體內(nèi)快速繁殖,并跟隨細(xì)菌的改變而改變,以噬菌體作為新型抗生素替代劑診治細(xì)菌性疾病已被人們廣泛關(guān)注。本研究利用藥敏試驗(yàn)篩選出具有多重耐藥性的豬子宮內(nèi)膜炎病原菌肺炎克雷伯菌作為噬菌體宿主菌,采用雙層平板法從健康豬群糞便和牛群糞便中分離純化到相應(yīng)的裂解性噬菌體,分別命名為KP1和KP2,對(duì)二者的核酸類型、生理生化性質(zhì)及其抵抗感染的能力進(jìn)行初步應(yīng)用研究。生理生化試驗(yàn)結(jié)果表明,兩株肺炎克雷伯菌噬菌體KP1和KP2的宿主譜較窄,對(duì)宿主菌的特異性很強(qiáng);它們都以雙鏈DNA分子為遺傳物質(zhì);對(duì)氯仿和乙醚有抗性,說明兩株噬菌體沒有囊膜。透射電鏡觀察下可見KP1屬于肌尾病毒科噬菌體,它有一個(gè)二十面體立體對(duì)稱的頭部,直徑約為78±1.5 nm,尾長約為109±2 nm,在溫度為40~60℃或pH值為4~12的條件下有較高活性,最佳感染復(fù)數(shù)為0.1,一步生長曲線顯示其感染宿主菌的潛伏期約20 min,裂解期約60min,平均裂解量約為15.4 PFU/cell。噬菌體KP2亦有一個(gè)二十面體立體對(duì)稱的頭部,直徑74.67±1.43 nm,尾長95.87±1.67 nm,是肌尾病毒科的一員,在40~60℃溫度下或pH值3~11的環(huán)境中均可有效裂解宿主菌,最佳感染復(fù)數(shù)為0.01,一步生長曲線顯示潛伏期約30 min,裂解期約80 min,平均裂解量約10.75 PFU/cell。噬菌體KP1和KP2分別對(duì)耐藥豬子宮內(nèi)膜炎病原菌肺炎克雷伯菌具有很強(qiáng)的體外裂解活性,噬菌體安全性試驗(yàn)檢測(cè)顯示兩株噬菌體無毒副作用。二者的混合制劑對(duì)宿主菌引起的家兔子宮炎癥有一定的防治作用。
【學(xué)位單位】：吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：S858.28
【部分圖文】：

3.2 噬菌體的分離純化于長春市各個(gè)飼養(yǎng)場(chǎng)多次采集健康豬群的糞便樣品，與試驗(yàn)篩選的多重耐炎克雷伯菌混合培養(yǎng)，多次富集，最后用點(diǎn)滴法對(duì)培養(yǎng)結(jié)果進(jìn)行驗(yàn)證，結(jié)果，成功分離出一株肺炎克雷伯菌噬菌體。如圖 1.2 所示，陰性對(duì)照區(qū)域菌株情況正常，樣品區(qū)域長出無菌空斑。利用雙層平板法對(duì)所分離的噬菌體反復(fù) 4 次，方可得到大小均一、透亮的噬菌斑。如圖 1.3，命其命為 KP1。圖 1.1 肺炎克雷伯菌 414 菌株藥敏試驗(yàn)Fig.1.1 Antimicrobial susceptibility test of Klebsiella pneumoniae 414：1、諾氟沙星；2、多粘菌素 B；3、頭孢唑林；4、頭孢噻肟；5 阿米卡星；6、慶大霉素；7、卡素；8、鏈霉素；9、新霉素；10、四環(huán)素；11、多西環(huán)素；12、阿奇霉素ote: 1, norfloxacin 2, polymyxin 3, cefazolin 4, cefotaxime 5 amikacin 6, gentamicin 7, kanamycin 8,streptomycin 9, neomycin 10, tetracycline 11, doxycycline 12, azithromycin

3.2 噬菌體的分離純化于長春市各個(gè)飼養(yǎng)場(chǎng)多次采集健康豬群的糞便樣品，與試驗(yàn)篩選的多重耐炎克雷伯菌混合培養(yǎng)，多次富集，最后用點(diǎn)滴法對(duì)培養(yǎng)結(jié)果進(jìn)行驗(yàn)證，結(jié)果，成功分離出一株肺炎克雷伯菌噬菌體。如圖 1.2 所示，陰性對(duì)照區(qū)域菌株情況正常，樣品區(qū)域長出無菌空斑。利用雙層平板法對(duì)所分離的噬菌體反復(fù) 4 次，方可得到大小均一、透亮的噬菌斑。如圖 1.3，命其命為 KP1。圖 1.1 肺炎克雷伯菌 414 菌株藥敏試驗(yàn)Fig.1.1 Antimicrobial susceptibility test of Klebsiella pneumoniae 414：1、諾氟沙星；2、多粘菌素 B；3、頭孢唑林；4、頭孢噻肟；5 阿米卡星；6、慶大霉素；7、卡素；8、鏈霉素；9、新霉素；10、四環(huán)素；11、多西環(huán)素；12、阿奇霉素ote: 1, norfloxacin 2, polymyxin 3, cefazolin 4, cefotaxime 5 amikacin 6, gentamicin 7, kanamycin 8,streptomycin 9, neomycin 10, tetracycline 11, doxycycline 12, azithromycin

于長春市各個(gè)飼養(yǎng)場(chǎng)多次采集健康豬群的糞便樣品，與試驗(yàn)篩選的多重耐藥肺炎克雷伯菌混合培養(yǎng)，多次富集，最后用點(diǎn)滴法對(duì)培養(yǎng)結(jié)果進(jìn)行驗(yàn)證，結(jié)果顯示，成功分離出一株肺炎克雷伯菌噬菌體。如圖 1.2 所示，陰性對(duì)照區(qū)域菌株生長情況正常，樣品區(qū)域長出無菌空斑。利用雙層平板法對(duì)所分離的噬菌體反復(fù)純化 4 次，方可得到大小均一、透亮的噬菌斑。如圖 1.3，命其命為 KP1。圖 1.1 肺炎克雷伯菌 414 菌株藥敏試驗(yàn)Fig.1.1 Antimicrobial susceptibility test of Klebsiella pneumoniae 414注：1、諾氟沙星；2、多粘菌素 B；3、頭孢唑林；4、頭孢噻肟；5 阿米卡星；6、慶大霉素；7、卡那霉素；8、鏈霉素；9、新霉素；10、四環(huán)素；11、多西環(huán)素；12、阿奇霉素Note: 1, norfloxacin 2, polymyxin 3, cefazolin 4, cefotaxime 5 amikacin 6, gentamicin 7, kanamycin 8,streptomycin 9, neomycin 10, tetracycline 11, doxycycline 12, azithromycinKP1陰
【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2865109