沙門菌(Salmonella)是腸桿菌科中最常見的病菌原之一,常寄生于動物和人的腸道內(nèi),是引起人類食物中毒最主要的病原菌。本研究分離鑒定了徐州及周邊地區(qū)養(yǎng)殖場鴨、禽病門診病鴨、菜場和超市里鴨肉及副產(chǎn)品中沙門菌,通過血清型分型、ERIC-PCR分子分型方法分析沙門菌的分布情況;進一步對分離的鴨源沙門菌的耐藥性和耐藥表型進行研究;建立fimA-LAMP檢測方法,并在臨床上進行驗證;此外篩選了針對鴨源沙門菌的中藥復(fù)方制劑,希望可對鴨沙門菌病的防控提供理論和技術(shù)支持。1.鴨源沙門菌的分離培養(yǎng)、鑒定、血清型分型及ERIC-PCR分子分型本研究從徐州及周邊地區(qū)采集6個養(yǎng)鴨場的380份肉鴨泄殖腔肛拭子樣品、禽病門診50例臨床發(fā)病鴨的臟器組織、市場的300份鴨肉及副產(chǎn)品樣品,利用經(jīng)典分離方法,結(jié)合PCR驗證,共分離到56株沙門菌。從鴨場分離到26株沙門菌,分離率為6.84%;其中24株沙門菌屬于4個血清型,分別為鼠傷寒沙門菌2株(8.33%),印第安納沙門菌4株(16.67%),鴨沙門菌2株(8.33%);腸炎沙門菌16株(66.67%),優(yōu)勢血清型為腸炎沙門菌。臨床發(fā)病鴨分離到24株沙門菌,分離率為48%;分為6個血清型,鼠傷寒沙門菌3株(12.5%),阿貢納沙門菌2株(8.33%),波茨坦沙門菌2株(8.33%),印第安納沙門菌10株(41.67%),鴨沙門菌1株(4.17%);腸炎沙門菌6株(25.0%),其中優(yōu)勢血清型為印第安納沙門菌。市場共分離到6株沙門菌,分離率為2%;其中5株分為兩個血清型,腸炎沙門菌4株(80%)、1株為印第安納沙門菌(20%),優(yōu)勢血清型為腸炎沙門菌。對其中21株沙門菌進行ERIC-PCR分子分型,分成18個基因型,遺傳相似性在59%～100%之間,結(jié)果顯示出良好的多態(tài)性并獲得了較好的指紋圖譜數(shù)據(jù)。2.鴨源沙門菌耐藥性檢測及耐藥基因的分析用Kirby-Bauer(K-B)法測定分離的56株鴨沙門菌對20種抗菌藥物的耐藥性。合成19對引物,對6大類耐藥基因進行檢測。分離的沙門菌對20種抗生素具有不同的耐藥率和多重耐藥現(xiàn)象,對鏈霉素耐藥率最高(98.2%),其次是氨芐青霉素(94.6%),耐藥表型主要為AStAC、ANStOCSx和AAKDOCSx。檢測的19種耐藥基因中,blaTEM-1、aadA1、aadA2、aph(3')-Ⅱa、tetA、gyrA、Sul2、drfⅫ基因的檢出率超過50%以上,其中aadA1基因檢出率最高(91.1%),其次是blaTEM-1基因(83.9%),沒有檢測到tetC基因�？股啬退幓驒z測與耐藥表型基本相符。3.基于fimA基因的鴨源沙門菌LAMP快速檢測方法的建立與應(yīng)用以fimA菌毛基因為檢測靶基因,設(shè)計兩對特異性引物,建立快速檢測沙門菌的環(huán)介導(dǎo)等溫擴增方法。并對反應(yīng)條件進行一系列優(yōu)化,包括反應(yīng)溫度、檢測特異性和靈敏度等,并將LAMP與常規(guī)PCR進行比較,用建立的方法對臨床樣品進行檢測。結(jié)果顯示:LAMP方法最適反應(yīng)溫度為64℃,Mg2+濃度為8mmol/L、dNTPs濃度為0.8mmol/L、內(nèi)外引物濃度比為1:8。對6種相關(guān)腸道細菌進行LAMP擴增,僅沙門菌擴增陽性。對沙門菌檢測的靈敏度為8.6×l01cfu/mL,比PCR靈敏10倍。運用建立的方法對市場肉類產(chǎn)品進行檢測,與傳統(tǒng)方法比較,符合率100%。LAMP方法特異性強、靈敏度高、結(jié)果可視,且操作簡單,無需昂貴的儀器,適合基層實驗室應(yīng)用。4.篩選治療鴨源沙門菌感染的中藥復(fù)方制劑的篩選研究以白頭翁為主藥復(fù)方制劑的體外抑菌效果及對人工感染沙門菌雛鴨的治療效果。體外抑菌實驗中,復(fù)方制劑4的抑菌圈直徑最高,達到17.6mm,最低抑菌濃度為166.7mg/mL,明顯高于其它各組,說明沙門菌對復(fù)方制劑4高度敏感;體內(nèi)實驗結(jié)果顯示高劑量組的治療效果最好,保護率可以達到80%,與頭孢噻呋組接近。攻毒后,血液中的紅細胞數(shù)量顯著降低、白細胞數(shù)量顯著升高(P≤0.01),給予中藥治療后9～12d,紅細胞數(shù)量、白細胞數(shù)量恢復(fù)或接近正常水平,說明以白頭翁為君藥的復(fù)方制劑4對雛鴨沙門菌病有很好的治療效果。
【學(xué)位單位】：揚州大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：S858.32
【部分圖文】：

圖２部分分離菌株在不同培養(yǎng)基上的菌落形態(tài)。??Ａ．沙門菌在麥康凱上的形態(tài)Ｂ．印第安納株沙門菌在ＤＨＬ上的形態(tài)Ｃ．沙門菌在ＢＳ上的形態(tài)??Ｄ．沙門菌在ＨＥ上的形態(tài)?Ｅ．沙門菌在沙顯上的形態(tài)??Ｆｉｇ．２?Ｃｏｌｏｎｙ?ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ?ｏｆ?ｐａｒｔ?ｉｓｏｌａｔｅｓ?ｏｎ?ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ?ｍｅｄｉｕｍｓ；?Ａ．?Ｃｏｌｏｎｙ?Ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ?ｏｆ?Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ?ｏｎ??ＭｃＣｏｎｋａ．?Ｂ．?Ｃｏｌｏｎｙ?ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ?ｏｆ?５．?Ｉｎｄｉａｎａ?ｏｎ?ＤＨＬ．Ｃ．?Ｃｏｌｏｎｙ?ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ?Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ?ｏｎ?ＢＳ．?Ｄ．??Ｃｏｌｏｎｙ?ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ?ｏｆ?Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ?ｏｎ?ＨＥ．?Ｅ．?Ｃｏｌｏｎｙ?ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ?ｏｆ?Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ?ｏｎ?ｃｈｒｏｍｏｇｅｎｉｃ?ｍｅｄｉｕｍ．??

揚州大學(xué)博士學(xué)位論文：－＾．?Ｉ?－＾ｖ?４?＾?＾，?；?５１＇＾：?＾尊：錄鍵??黍礙霸｜沙門菌革蘭氏染色顯微鏡下形態(tài)??ａｌ?ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ?ｏｆ?Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ?ａｆｔｅｒ?

圖３沙門菌革蘭氏染色顯微鏡下形態(tài)??Ｆｉｇ．３?Ｂａｃｔｅｒｉａｌ?ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ?ｏｆ?Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ?ａｆｔｅｒ?Ｇｒａｍ?ｓｔａｉｎｉｎＭ３??Ｉ??ｍ??
【參考文獻】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 舒剛;馬馳;黃春;黃玲;鐘青卿;林居純;;4種中藥復(fù)方對大腸桿菌、沙門氏菌R質(zhì)粒的消除作用[J];河南農(nóng)業(yè)科學(xué);2013年11期

2 萬進;張璐;曹興元;;環(huán)介導(dǎo)等溫擴增技術(shù)對牛奶中沙門氏菌快速檢測的研究[J];農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量與安全;2012年S1期

3 饒寶;唐桂芬;劉玲玲;程亞樓;馬平;李文剛;;沙門氏菌、金黃色葡萄球菌和大腸桿菌的基因芯片檢測技術(shù)研究[J];鄭州牧業(yè)工程高等�？茖W(xué)校學(xué)報;2012年03期

4 林梅;李曉華;;沙門菌耐藥性現(xiàn)狀分析[J];醫(yī)學(xué)研究生學(xué)報;2012年04期

5 許龍巖;袁慕云;林文麗;張旺;焦紅;;DiversiLab系統(tǒng)沙門氏菌分子分型評價[J];食品科學(xué);2012年03期

6 張東方;袁飛;陳穎;葛毅強;楊海榮;暴書嬋;趙勇勝;;沙門菌分子分型方法研究進展[J];中國公共衛(wèi)生;2012年01期

7 肖劍;;分子生物學(xué)技術(shù)在食品微生物檢測中的應(yīng)用[J];廣西輕工業(yè);2011年03期

8 杜雄偉;李葉;王曉輝;;沙門氏菌耐藥機制的研究進展[J];江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué);2010年06期

9 劉雯靜;邱少富;劉雪林;宋宏彬;;沙門氏菌的分子分型方法[J];現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進展;2010年20期

10 劉志玲;陳茹;邱索平;馬靜云;曾碧健;周科;;牛流行熱病毒LUX~(TM)熒光RT-PCR檢測方法的建立[J];生物技術(shù)通報;2010年08期

本文編號：2863272