養(yǎng)豬業(yè)作為傳統(tǒng)養(yǎng)殖業(yè)中重要的一員,在我國(guó)肉食品市場(chǎng)中占有巨大的份額。隨著養(yǎng)豬業(yè)的規(guī)模化和集約化養(yǎng)殖,養(yǎng)豬業(yè)卻普遍存在著濫用抗生素及藥品的現(xiàn)象。為了篩選具有可靠動(dòng)物安全性、具有生物被膜形成能力及抑菌性能且生物學(xué)特性良好的乳酸菌菌株,以便適用于乳酸菌益生制劑的開(kāi)發(fā)與生產(chǎn),本研究從吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)養(yǎng)殖基地挑選健康仔豬糞樣篩選出119株革蘭氏陽(yáng)性疑似乳酸菌分離株。經(jīng)過(guò)生物被膜形成能力檢測(cè)與常見(jiàn)病原菌抑菌實(shí)驗(yàn),篩選出7株具有良好生物被膜形成能力及抑菌能力的分離株,分別命名為:Z-01、Z-02、Z-03、Z-04、Z-05、Z-06和Z-07。經(jīng)過(guò)分子生物學(xué)鑒定,確認(rèn)其中Z-01、Z-02、Z-03、Z-04和Z-05為屎腸球菌,Z-06為乳酸腸球菌,Z-07為嗜酸乳桿菌。為了篩選得到生物學(xué)特性良好的乳酸菌,通過(guò)進(jìn)行產(chǎn)酸能力檢測(cè)、耐膽鹽試驗(yàn)、耐高溫試驗(yàn)、耐胰蛋白酶試驗(yàn)、耐酸試驗(yàn)以及常見(jiàn)抗菌藥敏感試驗(yàn)等試驗(yàn),得出如下結(jié)論:7株乳酸菌分離株的產(chǎn)酸能力較為接近,上清液pH值3.44-4.25之間;在0.4%膽鹽濃度下,Z-07存活率為24%,Z-03存活率為19.1%,其余5株分離株存活率為10%-15%之間;50℃、55℃和60℃的分離株OD值與37℃相比無(wú)明顯變化,證明7株分離株對(duì)高溫環(huán)境具有一定耐受性;7株菌在最高濃度的1.4%胰蛋白酶影響下,存活率均維持在77%-94%之間;7株菌在pH值為2.0的環(huán)境中,Z-04存活率最高為44.6%;Z-03和Z-07對(duì)氨芐西林表現(xiàn)為中度敏感,而Z-01、Z-02、Z-04、Z-05和Z-06對(duì)氨芐西林表現(xiàn)為耐藥。從7株分離株選擇生物學(xué)特性優(yōu)良的Z-03和Z-07,進(jìn)行動(dòng)物安全性試驗(yàn)、沙門(mén)氏菌半數(shù)致死量實(shí)驗(yàn)和乳酸菌的抑菌實(shí)驗(yàn),結(jié)果如下:2株分離株Z-03和Z-07具有可靠的動(dòng)物安全性,具有較好的益生作用;對(duì)沙門(mén)氏菌CVCC-503,屎腸球菌Z-03和嗜酸乳桿菌Z-07具有一定抑菌保護(hù)作用。本研究成功篩選屎腸球菌Z-03和嗜酸乳桿菌Z-07,具有良好的抑菌能力和生物被膜形成能力,其優(yōu)良的生物學(xué)特性為其在益生菌制劑的開(kāi)發(fā)和利用中提供理論依據(jù)。
【學(xué)位單位】：吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類】：S852.61
【部分圖文】：

圖1.1分離株菌落形態(tài)

6 孔板法對(duì)目的乳酸菌菌株生物被膜形成能力進(jìn)成能力如圖 1.2 所示。Z-03 、Z-04、Z-05、Z-數(shù)值高 4 倍，具有較強(qiáng)生物被膜形成能力；而生于D595 數(shù)值處于空白對(duì)照組數(shù)值的 2-4 倍之間，力。

切膠回收后由上海生工完成進(jìn)行比對(duì)。參考相關(guān)菌株的 -Joining 法構(gòu)建所篩功能菌株、Z-04 和 Z-05 為屎腸球菌，圖 1.3 分離株 16s rDNA 序列擴(kuò)6SrDNAgene PCR amplification re1~7：分離株 Z-01、Z-02、Z-03、產(chǎn)物Z-01Z-04Z-03Enterococcus faecium straZ-02
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本文編號(hào)：2863128