艱難梭菌(Clostridium difficile,CD),是一種重要的人獸共患病原菌,該菌容易定植仔豬腸道導致仔豬腸炎。本研究旨在進行四川地區(qū)腹瀉仔豬艱難梭菌的分子分型調查。首先,證實四川地區(qū)腹瀉仔豬存在一定程度艱難梭菌感染。在四川地區(qū)6個養(yǎng)豬場共采集110份仔豬糞便標本,厭氧培養(yǎng)共分離艱難梭菌20株,其中用PCR擴增毒素基因tcdB鑒定了9株,用PCR擴增其16S rDNA鑒定了其余11株。四川地區(qū)腹瀉仔豬艱難梭菌總分離率為18.2%(20/110),調查豬場陽性檢出率為83.3%(5/6)。其次,發(fā)現(xiàn)四川地區(qū)腹瀉仔豬艱難梭菌存在有3種毒素基因型。毒素基因分型里A+B+CDT-型包含菌株B3、B4、B5和B19(廣安市鄰水縣),菌株LW3和LW6(南充市閬中市);A+B+CDT+型包含菌株C1和C2(成都市崇州市),菌株P1(眉山市彭山區(qū));A-B-CDT-型包含菌株Y1-Y10(宜賓市江安縣)、菌株P2(眉山市彭山區(qū))。最后,鑒定四川地區(qū)腹瀉仔豬有艱難梭菌5種多位點序列型。菌株B3、B4、B5和B19(廣安市鄰水縣)菌株屬ST36型;菌株C1、C2(成都市崇州市)和菌株P1(眉山市彭山區(qū))菌株均為ST11型;菌株P2(眉山市彭山區(qū))菌株屬ST3型;菌株LW3和LW6(南充市閬中市)菌株屬ST35型;菌株Y1-Y10(宜賓市江安縣)菌株屬ST109型。研究同時鑒定了3株ST11型艱難梭菌,揭示在四川地區(qū)腹瀉仔豬群有高毒力菌株流行的風險。
【學位單位】：四川農業(yè)大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2018
【中圖分類】：S852.61
【部分圖文】：

表 1-4 四川地區(qū)仔豬群糞便樣本和艱難梭菌菌株分離情況 1-4 Summary of fecal samples and isolates in different areas of Si地點 總樣本數 腹瀉樣本(＋)正常樣本(－)腹瀉樣本分離株正常樣分離安鄰水 43 26 17 4 0都崇州 4 4 0 2 0賓江安 12 8 4 8 2充閬中 6 6 0 2 0山彭山 5 5 0 2 0充蓬安 40 3 37 0 0總計 110 52 58 18 2

賓江安 12 8 4 8 2充閬中 6 6 0 2 0山彭山 5 5 0 2 0充蓬安 40 3 37 0 0總計 110 52 58 18 2圖 1-1 用艱難梭菌鑒別培養(yǎng)基分離出的艱難梭菌菌落形態(tài)Fig.1-1 Colony morphology of Clostridium difficile in ChromI

圖 1-3 艱難梭菌在 1000 ×油鏡下形態(tài)Morphology of Clostridium difficile in oil immersion ledB 的檢測結果 tcdB 是艱難梭菌特有基因，故可用于鑒定B，結果發(fā)現(xiàn)廣安市鄰水縣分離出的 4 株菌州市分離出的 2 株菌（C1 和 C2）、眉山市彭閬中市分離出的 2 株菌（LW3 和 LW6）都 11 株在 BHIA 培養(yǎng)基上菌落形態(tài)和氣味都 tcdB，這并不能說明這些沒有擴增出毒素基果圖示例如下：
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本文編號：2863026