沙門氏菌(Salmonella)是國際公認(rèn)的食品衛(wèi)生和耐藥性監(jiān)測重要的指示菌,廣泛存在自然界,可以通過食物鏈傳播,并感染人和動物,導(dǎo)致腹瀉,感染致病性較強(qiáng)的血清型時還能致命。抗生素是預(yù)防和治療沙門氏菌等病原菌感染的重要手段,近年來由于抗生素的廣泛及不合理使用,食源性沙門氏菌對抗生素耐藥性增強(qiáng)。為了降低傳染的發(fā)生、阻止抗生素耐藥菌的進(jìn)一步危害,環(huán)境消毒控制成為控制病原菌傳播的主要措施,目前,季銨鹽類(Quaternary Ammonium Compounds, QACs)消毒劑已被廣泛用于養(yǎng)殖、食品加工等環(huán)境的消毒,然而消毒劑使用的增多是否會導(dǎo)致細(xì)菌對消毒劑的耐藥也成為眾多學(xué)者關(guān)心的問題,已有報道發(fā)現(xiàn)抗生素可以與季銨鹽類消毒劑共同耐藥,但目前國內(nèi)關(guān)于動物性食品源沙門氏菌對消毒劑耐藥及與抗生素共同耐藥的研究報道較少。本研究采集四川省肉類樣品,分離沙門氏菌,并利用形態(tài)學(xué)、生理生化及特異基因進(jìn)行鑒定。按照CLSI推薦方法及判斷標(biāo)準(zhǔn),應(yīng)用瓊脂稀釋法測定沙門氏菌對9種不同抗生素、兩種季銨鹽類消毒劑的MIC值,并應(yīng)用PCR方法檢測抗生素及消毒劑耐藥基因,分析沙門氏菌對消毒劑耐藥性與抗生素耐藥性之間的關(guān)系,并對沙門氏菌株進(jìn)行PFGE分型。本研究主要開展了以下研究：(1)動物性食品源沙門氏菌的分離、鑒定2013-2014年從四川省不同地區(qū)采集肉類樣品327份包括：豬肉137份,雞肉91份,牛肉99份,利用選擇性培養(yǎng)基分離,invA基因檢測,鑒定出沙門氏菌163株(49.84%)：豬肉78株(56.93%),雞肉46株(50.55%),牛肉39株(39.39%)。沙門氏菌血清型最多的是德爾卑沙門氏菌(Salmonella Derby),鼠傷寒沙門氏菌(S.Typhimurium),羅森沙門氏菌(S. Rissen),分別占分離菌株數(shù)的28.22%,14.11%及11.66%。(2)動物性食品源沙門氏菌對抗生素的耐藥性154株(94.48%)沙門氏菌對9種抗生素表現(xiàn)出不同程度的耐藥性,對土霉素和甲氧芐啶的耐藥率最高。多重耐藥分析結(jié)果顯示,163株沙門氏菌中,71株(43.56%)為多重耐藥菌株,多重耐藥嚴(yán)重。各種耐藥譜型中,1-2耐菌株所占比例最大,其次為3耐,優(yōu)勢耐藥譜型分別為OTC-TMP和TMP。(3)動物性食品源性沙門氏菌對消毒劑的耐藥性163株沙門氏菌對兩種季銨鹽消毒劑的MIC值較高,PCR擴(kuò)增5種季銨鹽類質(zhì)粒型消毒劑耐藥基因,分析其與沙門氏菌抗生素耐藥性之間的關(guān)系。結(jié)果表明各消毒劑MIC范圍是：BC,8-128 mg/L;CTPC,8-256 mg/L。QACs耐藥基因檢出率為:qacEΔ1(10.42%;17/163),qacF(17.17%;28/163),未檢出gacE、gacG、 sugE(p)。所有抗生素耐藥菌中qacEΔ1、qacF檢出率高于抗生素敏感菌(p0.05)。(4)動物性食品源沙門氏菌PFGE分型對163株沙門氏菌進(jìn)行PFGE分型。結(jié)果表明沙門氏菌可以分為41個基因型,沙門氏菌污染與肉類采集地點相關(guān),部分同源性較高的沙門氏菌菌株中,抗生素耐藥譜型相似。部分菌株消毒劑耐藥基因與PFGE譜型相關(guān)。本研究發(fā)現(xiàn)四川省動物性食品源沙門氏菌污染情況較嚴(yán)重,菌株對抗生素的耐藥率及多重耐藥率較高,沙門氏菌對季銨鹽類消毒劑具有較高M(jìn)IC值,消毒劑耐藥基因檢出率高,消毒劑耐藥基因qacEΔ1、qacF與抗生素耐藥具有顯著相關(guān)性。耐藥沙門氏菌來源與肉類采集地點相關(guān)。可見,應(yīng)加強(qiáng)對動物性食品源沙門氏菌污染及耐藥性監(jiān)測,并需注重動物性肉類食品銷售環(huán)節(jié)傳播與防控。
【學(xué)位單位】：四川農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2015
【中圖分類】：S852.61
【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
縮略詞表
前言
    1 動物性食品源沙門氏菌污染現(xiàn)狀
    2 沙門氏菌對抗生素的耐藥性
        2.1 細(xì)菌耐藥機(jī)制
        2.2 沙門氏菌對抗生素的耐藥表型
        2.3 沙門氏菌對抗生素的耐藥基因型
    3 沙門氏菌對消毒劑耐藥性
        3.1 耐藥表型
        3.2 耐藥基因型
    4 抗生素與消毒劑耐藥性的相互聯(lián)系
    5 食源性細(xì)菌的PFGE分型
    6 本研究目的意義
第—章 動物性食品沙門氏菌分離、鑒定
    1 材料
        1.1 培養(yǎng)基及試劑
        1.2 儀器
        1.3 引物
    2 方法
        2.1 樣品采集
        2.2 沙門氏菌分離鑒定
        2.3 血清型鑒定
    3 結(jié)果
        3.1 動物性食品源沙門氏菌分離率
        3.2 動物性食品源沙門氏菌血清型
    4 討論
        4.1 動物性食品源沙門氏菌污染情況
        4.2 動物性食品源沙門氏菌血清型流行情況
第二章 沙門氏菌對抗生素耐藥性
    1 材料
        1.1 菌株
        1.2 培養(yǎng)基及試劑
        1.3 抗生素
        1.4 質(zhì)控菌株
        1.5 儀器
        1.6 引物
    2 方法
        2.1 藥敏實驗
            2.1.1 菌懸液制備
            2.1.2 含抗生素平板制備
            2.1.3 接種培養(yǎng)
            2.1.4 觀察結(jié)果
        2.2 抗生素耐藥基因檢測
            2.2.1 DNA模板制備
            2.2.2 PCR擴(kuò)增
    3 結(jié)果
        3.1 動物性食品源沙門氏菌對抗生素的耐藥表型
            3.1.1 不同血清型沙門氏菌對抗生素耐藥性
            3.1.2 豬肉源沙門氏菌抗生素耐藥性
            3.1.3 雞肉肉源沙門氏菌抗生素耐藥性
            3.1.4 牛肉源沙門氏菌抗生素耐藥性
        3.2 不同動物性食品源沙門氏菌耐藥性比較
            3.2.1 不同動物性食品源沙門氏菌耐藥率
            3.2.2 不同動物性食品源沙門氏菌多重耐藥
        3.3 沙門氏菌抗生素耐藥基因流行情況
            3.3.1 不同血清型沙門氏菌耐藥基因流行情況
            3.3.2 不同肉源沙門氏菌β-內(nèi)酰胺類耐藥基因流行情況
            3.3.3 不同肉源沙門氏菌四環(huán)素類耐藥基因流行情況
            3.3.4 不同肉源沙門氏菌喹諾酮類耐藥基因流行情況
            3.3.5 不同肉源沙門氏菌磺胺類耐藥基因流行情況
            3.3.6 不同肉源沙門氏菌氨基糖苷類耐藥基因流行情況
    4 討論
        4.1 動物食品源沙門氏菌抗生素耐藥性
        4.2 動物食品源沙門氏菌抗生素耐藥基因流行情況
第三章 動物性食品源沙門氏菌對消毒劑耐藥性
    1 材料
        1.1 菌株
        1.2 培養(yǎng)基及試劑
        1.3 消毒劑
        1.4 質(zhì)控菌株
        1.5 儀器
        1.6 引物
    2 方法
        2.1 消毒劑MIC值測定消毒劑MIC的測定
            2.1.1 含消毒劑培養(yǎng)基的制備
            2.1.2 菌懸液的制備
            2.1.3 接種培養(yǎng)
            2.1.4 耐藥性判定
        2.2 消毒劑耐藥基因檢測
            2.2.1 DNA模板制備
            2.2.2 PCR擴(kuò)增
    3 結(jié)果
        3.1 動物性食品源沙門氏菌對消毒劑MIC值
            3.1.1 不同血清型沙門氏菌對消毒劑MIC值
            3.1.2 豬肉源沙門氏菌對消毒劑MIC值
            3.1.3 雞肉源沙門氏菌對消毒劑MIC值
            3.1.4 牛肉源沙門氏菌對消毒劑MIC值
        3.2 動物性食品源沙門氏菌消毒劑耐藥基因流行情況
        3.3 沙門氏菌消毒劑耐藥表型與基因型之間的相關(guān)性
        3.4 沙門氏菌對抗生素及消毒劑耐藥性之間的相關(guān)性
    4 討論
        4.1 沙門氏菌對消毒劑MIC
        4.2 沙門氏菌消毒劑耐藥基因流行情況
        4.3 消毒劑耐藥性與抗生素耐藥性關(guān)系
第四章 動物性食品源沙門氏菌PFGE分型
    1 材料
        1.1 菌株
        1.2 培養(yǎng)基及試劑
        1.3 儀器
    2 方法
        2.1 膠塊制作
        2.2 裂解細(xì)胞
        2.3 膠塊清洗
        2.4 DNA酶切
        2.5 制膠及加樣
        2.6 電泳、染色、成像
        2.7 數(shù)據(jù)分析
    3 結(jié)果
        3.1 PFGE與食品源沙門氏菌血清型的關(guān)系
        3.2 PFGE與食品源沙門氏菌來源關(guān)系
        3.3 PFGE與沙門氏菌耐藥性關(guān)系
            3.3.1 PFGE與抗生素耐藥性關(guān)系
            3.3.2 PFGE與消毒劑耐藥性關(guān)系
    4 討論
結(jié)論
展望
參考文獻(xiàn)
致謝
攻讀碩士學(xué)位期間獲得的成果

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本文編號：2860391