由于奶牛自身生理因素或外界條件性病原微生物刺激引發(fā)的奶牛乳腺炎,是一種奶牛乳腺綜合性疾病,也是導(dǎo)致奶牛養(yǎng)殖業(yè)經(jīng)濟(jì)損失最為慘重的一種疾病。奶牛乳腺炎嚴(yán)重影響牛奶的質(zhì)量和產(chǎn)量,并可導(dǎo)致乳腺泌乳機(jī)能受損甚至完全喪失。臨床上誘發(fā)奶牛乳腺炎最為常見的兩種細(xì)菌為大腸桿菌和金黃色葡萄球菌。大腸桿菌細(xì)胞壁關(guān)鍵組成成分為脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS),可誘發(fā)機(jī)體產(chǎn)生炎癥反應(yīng);脂磷壁酸(Lipoteichoic acid,LTA)是金黃色葡萄球菌細(xì)胞壁的關(guān)鍵組成成分,可導(dǎo)致宿主產(chǎn)生不同的免疫應(yīng)答。單核細(xì)胞趨化蛋白誘導(dǎo)蛋白1(Monocyte chemoattractant protein-induced protein 1,MCPIP1)作為一種轉(zhuǎn)錄因子在機(jī)體免疫應(yīng)答過程中發(fā)揮重要作用。然而,MCPIP1是否參與LPS和LTA誘導(dǎo)的奶牛乳腺上皮細(xì)胞炎性應(yīng)答過程尚未見報(bào)道。在本實(shí)驗(yàn)首先通過實(shí)時(shí)熒光定量PCR和蛋白免疫印跡檢測(cè)發(fā)現(xiàn)MCPIP1在奶牛炎性乳腺組織中基因和蛋白表達(dá)水平顯著高于奶牛正常乳腺組織。在LPS和LTA分別侵染永生化奶牛乳腺上皮細(xì)胞系(MAC-T)建立的體外奶牛乳腺炎細(xì)胞模型中,MCPIP1基因和蛋白表達(dá)水平明顯高于未處理的對(duì)照組細(xì)胞,與乳腺組織中表達(dá)結(jié)果一致,表明MCPIP1參與奶牛乳腺上皮細(xì)胞炎性應(yīng)答過程。為了進(jìn)一步研究MCPIP1在LPS和LTA誘導(dǎo)奶牛乳腺上皮細(xì)胞免疫應(yīng)答中發(fā)揮作用的機(jī)制,本實(shí)驗(yàn)通過插入含有MCPIP1序列的慢病毒載體建立穩(wěn)定過表達(dá)MCPIP1的MAC-T細(xì)胞,研究MCPIP1對(duì)MAC-T細(xì)胞在炎癥應(yīng)答過程中細(xì)胞炎性因子分泌、細(xì)胞增殖、凋亡、DNA損傷和氧化損傷等影響。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示MCPIP1抑制由LPS和LTA誘導(dǎo)的炎癥介質(zhì)TNF-α、IL-1β、IL-6和IL-8等分泌水平;增強(qiáng)LPS和LTA對(duì)MAC-T細(xì)胞增殖的抑制作用以及促進(jìn)LPS和LTA所誘導(dǎo)的氧化損傷和DNA損傷。綜上所述,MCPIP1參與LPS和LTA誘導(dǎo)的奶牛乳腺上皮細(xì)胞氧化損傷和炎性應(yīng)答過程,這一研究結(jié)果為奶牛乳腺炎病理機(jī)制研究提供了新研究思路。
【學(xué)位單位】：西北農(nóng)林科技大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類】：S858.23
【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1.1 奶牛乳腺炎研究進(jìn)展
        1.1.1 奶牛乳腺炎概述
        1.1.2 奶牛乳腺炎發(fā)病機(jī)理
        1.1.3 奶牛乳腺炎流行與危害
        1.1.4 奶牛乳腺炎治療
        1.1.5 奶牛乳腺炎預(yù)防
    1.2 奶牛乳腺上皮細(xì)胞免疫機(jī)理
    1.3 奶牛乳腺上皮細(xì)胞在乳腺免疫應(yīng)答中的作用
    1.4 MCPIP1 研究進(jìn)展
        1.4.1 MCPIP1 生物學(xué)特征
        1.4.2 MCPIP1 基因相關(guān)功能
        1.4.3 MCPIP1 基因表達(dá)調(diào)控
        1.4.4 MCPIP1 研究現(xiàn)狀
    1.5 研究目的和意義
第二章 MCPIP1在LPS和 LTA誘導(dǎo)的奶牛乳腺上皮細(xì)胞氧化損傷和炎性應(yīng)答中的作用研究
    2.1 材料
        2.1.1 奶牛乳腺組織和奶牛乳腺上皮細(xì)胞系
        2.1.2 主要試劑
        2.1.3 儀器設(shè)備
    2.2 方法
        2.2.1 主要溶液配制
        2.2.2 細(xì)胞培養(yǎng)
        2.2.3 炎性細(xì)胞模型建立
        2.2.4 實(shí)時(shí)熒光定量PCR
        2.2.5 蛋白免疫印跡技術(shù)
        2.2.6單細(xì)胞凝膠電泳彗星實(shí)驗(yàn)
        2.2.7 超氧化物歧化酶活性檢測(cè)
        2.2.8 細(xì)胞增殖
        2.2.9 質(zhì)粒轉(zhuǎn)染
        2.2.10 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    2.3 結(jié)果
        2.3.1 MCPIP1 在奶牛乳腺組織和乳腺上皮細(xì)胞中的表達(dá)水平
        2.3.2 穩(wěn)定高表達(dá)MCPIP1 的奶牛乳腺上皮細(xì)胞系建立
        2.3.3 MCPIP1 抑制LPS或 LTA誘導(dǎo)的炎性細(xì)胞因子表達(dá)
        2.3.4 MCPIP1 促進(jìn)LPS和 LTA所誘導(dǎo)乳腺上皮細(xì)胞的氧化損傷
        2.3.5 MCPIP1 增加LPS和 LTA所誘導(dǎo)乳腺上皮細(xì)胞的DNA損傷
        2.3.6 MCPIP1 增強(qiáng)LPS和 LTA對(duì) MAC-T細(xì)胞增殖的抑制作用
    2.4 討論
全文結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝
作者簡(jiǎn)介

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本文編號(hào)：2854300