內(nèi)阿米巴原蟲(Entamoeba)和芽囊原蟲(Blastocystis)是兩種常見的人獸共患腸道寄生性原蟲病的病原,均有廣泛的宿主范圍,并可在多個(gè)國家和地區(qū)造成大范圍的流行,威脅社會(huì)公共衛(wèi)生安全,一定程度上影響了畜牧業(yè)的正常發(fā)展。牦牛是一種罕見的可在高原地區(qū)冷酷環(huán)境中生存的動(dòng)物物種,是青海廣大農(nóng)牧民主要的經(jīng)濟(jì)來源,與當(dāng)?shù)鼐用竦囊�、食、住、行都有著密不可分的�?lián)系。因此,了解青海省牦牛源Entamoeba及Blastocystis的種類分布及種群結(jié)構(gòu),對青海省牦牛中這兩種病原的流行情況及針對性地防控有重要參考意義。利用普通PCR及套式PCR技術(shù)對青海省牦牛Entamoeba及Blastocystis的感染情況進(jìn)行調(diào)查,獲得測序結(jié)果后分別對這兩種病原進(jìn)行種系發(fā)育關(guān)系分析,得到以下結(jié)果:1.在對青海省7個(gè)市及自治州所采集的1 027份牦牛糞便樣品進(jìn)行Entamoeba的18S rRNA基因位點(diǎn)的擴(kuò)增與測序結(jié)果表明,在青海采樣地區(qū)的牦牛中檢出阿米巴原蟲的總感染率為36.32%(373/1027),其中,感染率最高的為果洛藏族自治州(56.58%),感染率最低的為海北藏族自治州(16.84%),這7個(gè)采樣點(diǎn)之間的感染率差異顯著(P0.05);在不同季節(jié),感染率最高為夏季(45.63%),最低為冬季(21.67%),四個(gè)季節(jié)之間的感染率差異顯著(P0.05);而在兩個(gè)不同年齡段的宿主之間,感染率分別為39.58%(6月齡的牦牛)和36.16%(6月齡的牦牛),差異不顯著(P0.05)。測序及種系發(fā)育關(guān)系分析結(jié)果顯示,在373份陽性樣品中,共有284份樣品為Entamoeba bovis陽性,79份為Entamoeba sp.MG107/BEL陽性,8份為Entamoeba sp.RL2陽性,及2份Entamoeba sp.RL9陽性。其中,E.bovis為青海省牦牛感染Entamoeba的優(yōu)勢蟲種。2.在對青海省7個(gè)市及自治州所采集的1 027份牦牛糞便樣品進(jìn)行Blastocystis的SSU rRNA基因位點(diǎn)的擴(kuò)增與測序結(jié)果表明,在青海采樣地區(qū)的牦牛中檢出芽囊原蟲的總感染率為27.07%(278/1027),其中,感染率最高的為海西藏族自治州(48.94%),最低的為海南藏族自治州(19.75%),這7個(gè)采樣點(diǎn)之間的感染率差異顯著(P0.05);在不同季節(jié),感染率最高為夏季(32.68%),最低為春季(22.33%),四個(gè)季節(jié)之間的感染率無顯著性差異(P0.05);而在兩個(gè)不同年齡段的宿主之間,感染率分別為27.08%(6月齡的牦牛)及27.07%(6月齡的牦牛),差異不顯著(P0.05)。測序及種系發(fā)育關(guān)系分析結(jié)果顯示,在278份陽性樣品中,共有170份樣品為Blastocystis sp.subtype ST10亞型陽性,70份為ST14亞型陽性,38份為ST12亞型陽性。其中,Blastocystis sp.subtype ST10亞型為青海牦牛感染Blastocystis的優(yōu)勢亞型。
【學(xué)位單位】：西北農(nóng)林科技大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類】：S852.7
【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
文獻(xiàn)綜述
    第一章 內(nèi)阿米巴原蟲和芽囊原蟲的研究進(jìn)展
        1.1 內(nèi)阿米巴原蟲的研究進(jìn)展
            1.1.1 內(nèi)阿米巴原蟲的分類學(xué)及形態(tài)學(xué)
            1.1.2 內(nèi)阿米巴原蟲的生活史
            1.1.3 內(nèi)阿米巴原蟲的感染情況
            1.1.4 實(shí)驗(yàn)室檢測阿米巴原蟲的方法
        1.2 芽囊原蟲的研究進(jìn)展
            1.2.1 芽囊原蟲的形態(tài)學(xué)及分類學(xué)
            1.2.2 芽囊原蟲的生活史
            1.2.3 芽囊原蟲的感染情況
            1.2.4 芽囊原蟲的實(shí)驗(yàn)室檢測方法
        1.3 本研究的目的和意義
試驗(yàn)研究
    第二章 青海省牦牛內(nèi)阿米巴原蟲種類分布及其種群結(jié)構(gòu)分析
        2.1 材料
            2.1.1 樣品來源
            2.1.2 主要試劑
            2.1.3 溶液配制
            2.1.4 主要儀器設(shè)備
        2.2 方法
            2.2.1 糞便基因組DNA提取
            2.2.2 內(nèi)阿米巴原蟲18S r RNA基因擴(kuò)增
            2.2.3 PCR檢測及序列測定
            2.2.4 序列校正與比對
            2.2.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
            2.2.6 種系發(fā)育分析
        2.3 結(jié)果
            2.3.1 內(nèi)阿米巴原蟲18S r RNA位點(diǎn)PCR擴(kuò)增結(jié)果
            2.3.2 牦牛內(nèi)阿米巴原蟲感染率及分布情況
            2.3.3 牦牛內(nèi)阿米巴原蟲的種群結(jié)構(gòu)分析
        2.4 討論
        2.5 小結(jié)
    第三章 青海省牦牛芽囊原蟲種類分布及其種群結(jié)構(gòu)分析
        3.1 材料
            3.1.1 樣品來源
            3.1.2 主要試劑
            3.1.3 溶液配制
            3.1.4 主要儀器設(shè)備
        3.2 方法
            3.2.1 糞便基因組DNA提取
            3.2.2 芽囊原蟲SSU r RNA基因擴(kuò)增
            3.2.3 PCR檢測及序列測定
            3.2.4 序列校正與比對
            3.2.5 測序重疊峰樣品的克隆及序列測定
            3.2.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
            3.2.7 種系發(fā)育分析
        3.3 結(jié)果
            3.3.1 芽囊原蟲SSU rRNA位點(diǎn)PCR擴(kuò)增結(jié)果
            3.3.3 牦牛芽囊原蟲的感染率及分布情況
            3.3.3 牦牛芽囊原蟲及內(nèi)阿米巴原蟲的混合感染情況
            3.3.4 牦牛芽囊原蟲的種群結(jié)構(gòu)分析
        3.4 討論
        3.5 小結(jié)
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝
作者簡介

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本文編號：2853212