研究表明雞紅細(xì)胞能轉(zhuǎn)錄TLRs,但人們對紅細(xì)胞的其他基因轉(zhuǎn)錄功能仍不清楚;肉雞脛骨軟骨發(fā)育不良(TD)可導(dǎo)致大量壞死軟骨細(xì)胞堆積,前期研究發(fā)現(xiàn)重組雞谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶A3(chGSTA3)和細(xì)胞外脂肪酸結(jié)合蛋白(Ex-FABP)有助于TD的恢復(fù),為探討紅細(xì)胞免疫相關(guān)基因轉(zhuǎn)錄功能及其與肉雞TD的關(guān)系,以及chGSTA3和Ex-FABP對紅細(xì)胞免疫相關(guān)基因的作用,本試驗研究免疫相關(guān)基因在紅細(xì)胞中的轉(zhuǎn)錄、在TD肉雞轉(zhuǎn)錄水平的變化及重組chGSTA3和Ex-FABP對其轉(zhuǎn)錄的影響。將120只肉雛雞喂養(yǎng)7天后,隨機分為基礎(chǔ)日糧組(A、B、C組)和福美雙處理組(D、E、F),福美雙拌入飼料中的濃度為100mg·kg-1,建立TD模型。采用腿部肌肉注射法,對B和E組肉雛雞注射有活性的低劑量(20μg·kg-1體重)重組GSTA3蛋白,對C和F組肉雛雞注射高劑量(50μg.kg-1體重)重組GSTA3蛋白,對A和D組的肉雛雞注射等體積的磷酸鹽緩沖液(PBS)。RT-PCR用于探究雞紅細(xì)胞19個免疫基因的轉(zhuǎn)錄,且Real-time PCR用于檢測肉雞紅細(xì)胞中與免疫有關(guān)的9個基因在信使RNA水平的表達(dá)變化。結(jié)果表明,健康雞紅細(xì)胞能轉(zhuǎn)錄Toll樣受體(TLR)-1,2,3,4,5,6,7,15,21、白細(xì)胞介素(IL)-7、12、13、干擾素(IFN)-α,β、髓樣分化因子88(MyD88)、腫瘤壞死因子受體相關(guān)因子6(TRAF6)、髓細(xì)胞生長因子(cMGF)、主要組織相容性復(fù)合體(MHC)II,I;D 組與 A 組相比,TLR2,3,4,5,7,15、MyD88 和 MHCII在試驗的第4天顯著升高,IL-7顯著降低;在第15天,TLR2,4和MyD88顯著下調(diào),而IL-7、TLR3,5,7,15、MHCII變化不明顯;E、F組與D組相比,在試驗第4天,除E組TLR4,5、MyD88外,其余基因都有顯著變化;第15天,E 組 TLR4,5、MyD88,及 F 組 TLR3,5、MyD88 和 IL-7 變化不顯著,其余基因都有顯著性差異。雞紅細(xì)胞可能通過免疫相關(guān)基因TLR2,3,4,5,7,15、IL-7、MyD88和MHCII轉(zhuǎn)錄水平的變化,在早期誘導(dǎo)TD發(fā)生,后期減輕肉雞TD癥狀;GSTA3可能通過調(diào)節(jié)紅細(xì)胞免疫相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄在TD中發(fā)揮一定的作用。120只飼喂7天的肉雛雞被隨機等分為基礎(chǔ)日糧組(A、B、C組)和福美雙飼喂組(D、E、F組)。對B和D組肉雞腿部注射濃度為20 μg·kg-1體重的Ex-FABP,對C、E注射50 μg·kg-1體重的Ex-FABP,給A、F組注射等劑量的PBS,使用 Real-time PCR 檢測肉雞紅細(xì)胞 TLR2,3,4,5,7,15、MyD88、MHCII和IL-7基因轉(zhuǎn)錄水平。結(jié)果表明,在飼喂福美雙后的第6天,與F組相比,D和E組中的TLR2,3,4,5,7,15、MyD88和MHCII表達(dá)顯著下調(diào),而IL-7顯著上調(diào);在第15天,D組中的TLR2,3,4,5,7,15、MyD88和MHCII表達(dá)顯著降低,而IL-7顯著增加;除IL-7和TLR3表達(dá)不顯著外,E組內(nèi)其余基因均顯著下調(diào)。B、C組與A相比,在第6天,除C組TLR3,5、MyD88、MHCII和IL-7,及B組TLR2,7外,其余基因都有顯著性差異;在第15天,除了 B組IL-7外,其余基因都有顯著變化。Ex-FABP可能通過調(diào)節(jié)紅細(xì)胞TLR2,3,4,5,7,15、MyD88、MHCII 和 IL-7 轉(zhuǎn)錄而減輕 TD 癥狀。
【學(xué)位單位】：山西農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：S858.31
【文章目錄】：
摘要
前言
    1 禽紅細(xì)胞
        1.1 紅細(xì)胞大小和顏色
        1.2 紅細(xì)胞免疫作用
    2 脛骨軟骨發(fā)育不良
        2.1 正常骨發(fā)育
        2.2 脛骨軟骨發(fā)育不良
    3 谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶
        3.1 GSTs在酶解毒中的作用
        3.2 谷胱甘肽硫轉(zhuǎn)移酶A3
    4 脂肪酸結(jié)合蛋白
        4.1 FABP主要功能和類別
        4.2 細(xì)胞外脂肪酸結(jié)合蛋白
    5 細(xì)胞凋亡
        5.1 TLRs與凋亡
        5.2 細(xì)胞因子與細(xì)胞凋亡
    6 研究目的與意義
第一章 重組雞GSTA3蛋白對福美雙誘導(dǎo)TD肉雞紅細(xì)胞免疫相關(guān)基因轉(zhuǎn)錄的影響
    1 試驗材料
        1.1 試驗動物
        1.2 試驗試劑
        1.3 主要試驗儀器
    2 試驗方法
        2.1 動物處理
        2.2 雞紅細(xì)胞分離和紅細(xì)胞RNA提取及質(zhì)量檢測
        2.3 cDNA的合成
        2.4 引物設(shè)計與合成
        2.5 RT-PCR反應(yīng)
        2.6 RT-PCR產(chǎn)物大小及特異性的鑒定
        2.7 Real time PCR
        2.8 數(shù)據(jù)分析
    3 試驗結(jié)果
    4 討論
    5 小結(jié)
第二章 Ex-FABP對福美雙誘導(dǎo)TD肉雞紅細(xì)胞免疫相關(guān)基因轉(zhuǎn)錄的影響
    1 試驗材料
        1.1 試驗動物
        1.2 試驗試劑
        1.3 主要試驗儀器
    2 試驗方法
        2.1 動物處理
        2.2 雞紅細(xì)胞分離,RNA提取,cDNA的合成及引物的設(shè)計與合成
        2.3 Real-time PCR,數(shù)據(jù)分析
    3 試驗結(jié)果
    4 討論
    5 小結(jié)
全文結(jié)論
參考文獻(xiàn)
Abstract
致謝

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本文編號：2852167