發(fā)布時間：2020-10-22 06:08

　　 奶牛乳房炎是奶牛常見的一種疾病,對奶牛生產(chǎn)影響極大,會導致奶源產(chǎn)量和質量下降,進而影響?zhàn)B殖場收益,同時還會危害消費者的身體健康。而藥物的使用不僅影響牛奶品質,也會導致細菌產(chǎn)生耐藥性,因此需要通過對抗病基因的研究來降低奶牛乳房炎的發(fā)病率,降低奶牛飼養(yǎng)的經(jīng)濟成本,提高奶牛的生產(chǎn)性能。本試驗通過對牛群炎癥相關基因的SNP研究及其與奶牛牛群改良(DHI)生產(chǎn)性能的關聯(lián)分析,在基因水平上尋求有效的奶牛分子標記位點,為降低牛群乳房炎發(fā)病率奠定基礎。本研究以某牛場645頭荷斯坦奶牛血液DNA為研究材料,用直接測序法、PCR-RFLP法、SSCP法對調(diào)控奶牛乳房炎相關的候選基因白細胞介素8(IL-8)、趨化因子受體1(CXCR1)、趨化因子受體2(CXCR2)、Toll樣受體2(TLR2)和Toll樣受體4(TLR4)的基因多態(tài)性(SNP)進行檢測,計算SNP位點的遺傳參數(shù),并用SPSS22.0軟件進行SNP位點與奶牛生產(chǎn)性能的的關聯(lián)分析。結果如下:IL-8研究發(fā)現(xiàn)g.202 CT、g.264 CT、g 1892 AC、g.1939 GA、g.2103 CT、g.2209 TG、g.2222 GA這7個連鎖突變SNP位點。以g.202 CT位點進行關聯(lián)分析,發(fā)現(xiàn)CC型的305天產(chǎn)奶量和乳蛋白率顯著高于TC型和TT型(P0.05);CXCR1研究發(fā)現(xiàn)g.295 CT、g.337 TC、g.341 GA、g.369 TC、g.646 GA、g.652 GT、g.739 CG、g.823 GA這8個SNP位點。對測序結果分析后,g.646 GA和g.823 GA位點進行關聯(lián)分析,發(fā)現(xiàn)g.646 GA位點AA型的305天乳脂量、產(chǎn)奶量、乳蛋白量和乳蛋白率極顯著高于AG型和GG型(P0.01);g.823 GA位點AG型的305天產(chǎn)奶量和乳蛋白量極顯著高于GG型(P0.01),AG型的305天乳脂量顯著高于GG型(P0.05)。CXCR2研究發(fā)現(xiàn)g.13783 GA、g.13895.GA、g.14444 AG和g.14476 TC這4個突變位點。對其進行關聯(lián)分析后,g.13783 GA、g.14444 AG和g.14476 TC位點進行關聯(lián)分析,發(fā)現(xiàn)g.13783 GA位點GG型的305天乳脂量、產(chǎn)奶量和乳蛋白量極顯著高于AG型(P0.01),而AG型的乳蛋白率極顯著高于GG型(P0.01);g.14444AG位點AG型的305天產(chǎn)奶量和乳蛋白量極顯著高于GG型(P0.01),AG型的305天乳脂量顯著高于GG型(P0.05);g.14476 TC位點TT型的305天乳脂量、產(chǎn)奶量和乳蛋白量極顯著高于TC型(P0.01),而TC型的乳蛋白率極顯著高于TT型(P0.01)。TLR2研究發(fā)現(xiàn)g.10508 GA這1個突變位點。對其進行關聯(lián)分析,發(fā)現(xiàn)AA型的乳脂率顯著高于AG和GG(P0.05),AA型和AG型乳蛋白率顯著高于GG型(P0.05)。TLR4研究發(fā)現(xiàn)g.245 GC、g.5987 AG和g.9422 CT這3個突變位點。對其進行關聯(lián)分析,發(fā)現(xiàn)g.245 GC位點CC型的乳脂率極顯著高于GC型和GG型(P0.01),GC型的乳脂率極顯著高于GG型(P0.01)。g.5987 AG位點AA型和AG型的體細胞數(shù)極顯著高于GG型(P0.01)。g.9422 CT位點CC型和CT型的305天產(chǎn)奶量顯著高于TT型(P0.05);TT型的乳脂率極顯著高于CC型和CT型(P0.01)。通過對IL-8、CXCR1、CXCR2、TLR2和TLR4基因多態(tài)性的檢測及其與DHI生產(chǎn)性能關聯(lián)分析,檢測到突變位點有10個:IL-8基因的g.202 CT位點、CXCR1基因的g.646 GA和g.823 GA位點、CXCR2基因的g.13783 GA、g.14444 AG和g.14476 TC位點、TLR2基因的g.10508 GA位點、TLR4基因的g.245 GC、g.5987AG和g.9422 CT位點。其中新發(fā)現(xiàn)的可用于分子標記位點來選育抗乳房炎的奶牛的位點有3個:IL-8基因的g.202 CT位點、CXCR2基因的g.14476 TC位點和TLR4基因的g.245 GC位點。
【學位單位】：安徽農(nóng)業(yè)大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2018
【中圖分類】：S858.23
【部分圖文】：

2 結果 質量檢測量紫外分光光度計檢測μL 的 DNA 樣品在超微量紫外分光光度計上檢測 OD260/OD280值，比間，表明所提的 DNA 純度較高，符合要求，可進行后續(xù)試驗。糖凝膠電泳檢測的瓊脂糖凝膠電泳法檢測所提的基因組 DNA 條帶，所提基因組 DNA合要求，可以進行后續(xù)試驗。如圖 2-1。

圖 2-2 IL-8 基因引物 P1的 PCR 產(chǎn)物瓊脂糖凝膠電泳檢測Fig. 2-2 Detection of PCR products of primer P1of IL-8 gene using agarose electrophoresis注：M：DNA Marker; 1-9:PCR 擴增產(chǎn)物Note: M：DNA Marker; 1-9:PCR amplified products圖 2-3 IL-8 基因引物 P2的 PCR 產(chǎn)物瓊脂糖凝膠電泳檢測Fig. 2-3 Detection of PCR products of primer P2of IL-8 gene using agarose electrophoresis

性擴增良好且沒有明顯的非特異性條帶，故符合要求，可以進行后續(xù)試驗。圖 2-2 IL-8 基因引物 P1的 PCR 產(chǎn)物瓊脂糖凝膠電泳檢測Fig. 2-2 Detection of PCR products of primer P1of IL-8 gene using agarose electrophoresis注：M：DNA Marker; 1-9:PCR 擴增產(chǎn)物Note: M：DNA Marker; 1-9:PCR amplified products
【參考文獻】

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本文編號：2851211