早孕因子(early pregnancy factor,EPF)是一種與哺乳動(dòng)物妊娠有關(guān)的蛋白,是在哺乳動(dòng)物受精后最早可在血清中檢測(cè)出的一種免疫抑制因子和生長(zhǎng)因子。研究表明,卵母細(xì)胞在受精后產(chǎn)生的一系列反應(yīng)會(huì)使早孕因子產(chǎn)生變化,因此早孕因子可以作為超早孕檢測(cè)的指標(biāo)。由于機(jī)體在流產(chǎn)之前都會(huì)有早孕因子下降的趨勢(shì),所以早孕因子在超早孕檢測(cè)及流產(chǎn)預(yù)測(cè)和診斷方面有著重要的應(yīng)用。本試驗(yàn)旨在通過(guò)對(duì)陰道采集物中早孕因子標(biāo)記物的篩選與鑒定,選擇一種含量穩(wěn)定且變化有規(guī)律的早孕因子對(duì)家畜進(jìn)行超早孕檢測(cè)。選取身體況相同的80只初產(chǎn)母羊進(jìn)行同期發(fā)情處理,注射氯前列酸鈉后48~72h進(jìn)行試情,隨機(jī)選取30只發(fā)情時(shí)間相同的母羊進(jìn)行配種。在配種后第14~17 d用試情公羊?qū)μ暨x的母羊進(jìn)行試情,試情結(jié)果為有6只母羊再次發(fā)情,將這6只母羊判定為返情母羊,其余24只母羊則為妊娠母羊。將24只妊娠母羊分為兩組分別是第Ⅰ組和第Ⅱ組,第Ⅰ組作為返情母羊的對(duì)照組,羊只數(shù)量應(yīng)與返情母羊數(shù)量一致,因此第Ⅰ組的母羊數(shù)量為6只,則第Ⅱ組母羊的數(shù)量為剩余的18只。將6只返情母羊分為第Ⅲ組返情組,用來(lái)和第Ⅰ組進(jìn)行早孕因子基因mRNA表達(dá)量和孕酮含量的對(duì)比試驗(yàn)。對(duì)挑選的30只母羊在配種后的第0、5、10、13 d進(jìn)行樣本采集,后在第14 d試情分組。分組后,對(duì)第Ⅰ組和第Ⅲ組的母羊在配種后第15、20、25 d進(jìn)行樣本采集,對(duì)第Ⅱ組的母羊在配種后第16、19、25 d進(jìn)行樣本采集。根據(jù)JAK/STAT信息轉(zhuǎn)導(dǎo)通路和孕酮變化對(duì)與其相關(guān)的早孕因子進(jìn)行篩選。采樣結(jié)束后利用綿羊孕酮(PROG)酶聯(lián)免疫分析試劑盒將妊娠母羊和返情母羊陰道采集物中不同時(shí)期孕酮含量作出對(duì)比,利用qPCR方法檢測(cè)早孕因子相關(guān)基因Cox1、Cox2、Jak2、Stat1、Isg15、Mx1、Oas1的mRNA的表達(dá),利用Western Blot檢測(cè)早孕因子相關(guān)基因Cox1、Jak2、Mx1、Isg15的蛋白的表達(dá)。結(jié)果表明:(1)通過(guò)孕酮含量變化與Cox2基因表達(dá)量變化的比較發(fā)現(xiàn),在配種15 d前兩者間拮抗作用不明顯,在配種15 d后兩者間拮抗作用明顯。(2)IFNτ刺激基因Isg15的表達(dá)量對(duì)綿羊早孕鑒定有重要意義,可作為早孕診斷檢測(cè)的指標(biāo)。上述結(jié)果揭示:在所選取的7種與早孕因子相關(guān)的基因中,Isg15是最適合做超早孕檢測(cè)的。
【學(xué)位單位】：沈陽(yáng)農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類】：S826
【部分圖文】：

3 結(jié)果與分析集物中孕酮含量檢測(cè)結(jié)果示，妊娠母羊陰道采集物中孕酮的含量在配種 0 d 時(shí)較高，然含量最低，與配種 0 d 相比較減少極顯著（p<0.01），隨后含 與配種 0 d 相比較仍處于減少狀態(tài)，減少量極顯著（p<0.01），配種 0 d 相比有極顯著的增加（p<0.01），隨后逐漸減少，在配較減少量顯著（p<0.05）。返情母羊陰道采集物中孕酮含量在漸減少，在配種 5 d 含量最低，與配種 0 d 相比較減少極顯著漸增多，但配種 10 d 與配種 0 d 相比較仍處于減少狀態(tài)，減在第 15 d 達(dá)到峰值，與配種 0 d 相比有極顯著的增加（p<0.配種 20 d 和 25 d 減少量極顯著（p<0.01）。

3 結(jié)果與分析相關(guān)基因表達(dá)檢測(cè)結(jié)果 Cox1 的 mRNA 表達(dá)結(jié)果示，妊娠母羊的陰道采集物中 Cox1 的含量與配種 0 d 相比較量逐漸減少，在配種 5 d、10 d 減少量顯著（p<0.05），隨后與配種 0 d 相比較在配種 15 d、20 d、25 d 增加量極顯著（p<采集物中 Cox1 的含量與配種 0 d 相比較，可得出其含量在配種種 5 d 的含量減少顯著（p<0.05），配種 10 d 含量減少極顯著（ 開始轉(zhuǎn)變?yōu)樵黾于厔?shì)，且在配種 15 d 增加量顯著（p<0.05），顯著（p<0.01）。通過(guò)組間比較可以知道，在整個(gè)早孕期間組

沈陽(yáng)農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文子 Cox2 的 mRNA 表達(dá)結(jié)果所示，妊娠母羊的陰道采集物中 Cox2 的含量與配種 0d 相比較ox2 突然減少，減少量極顯著（p<0.01），后逐漸增加，但與減少狀態(tài)，且減少量極顯著（p<0.01）。返情母羊的陰道采集0 d相比較，也得出在配種10 d時(shí)Cox2含量減少，且減少量極顯加，但與配種 0 d 相比含量仍呈現(xiàn)減少狀態(tài)，在配種 15 d、20極顯著（p<0.01），配種 25 d 與配種 0 d 相比減少量顯著（p<較得出，配種 10 d 和 15 d 組間存在差異性，差異性顯著（p<0
【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2851232