巴馬香豬作為近年來(lái)研究比較廣泛的一種小型豬,在長(zhǎng)期近親交配與各地飼養(yǎng)條件的影響下形成我國(guó)特有的小型豬封閉群體。其作為矮小品系在培育的進(jìn)程中形成了很多獨(dú)特的遺傳標(biāo)記,如體型矮小等形態(tài)學(xué)標(biāo)記和DNA水平遺傳多態(tài)性等分子標(biāo)記。microRNA(miRNA)是一種高度保守的序列長(zhǎng)度為22nt左右的非編碼RNA,具有組織和時(shí)序特異性,對(duì)動(dòng)物的生長(zhǎng)發(fā)育有著重要的作用。近年來(lái)隨著對(duì)miRNA研究的深入,大量研究表明miRNA與動(dòng)物的生長(zhǎng)發(fā)育有著密不可分的聯(lián)系,其中位于WWP-2基因的內(nèi)含子中的miR-140,對(duì)哺乳動(dòng)物軟骨發(fā)育和癌癥治療起著重要的作用,但目前針對(duì)豬的miR-140的研究未見報(bào)道。本研究以大白豬和巴馬香豬為實(shí)驗(yàn)對(duì)象,檢測(cè)其胚胎時(shí)期的細(xì)胞和出生后1-3日齡以及成年時(shí)期的6種組織(心臟、肝臟、肺臟、腎臟、肌肉和軟骨)的miR-140表達(dá)量的差異。結(jié)果顯示,大白豬胎兒成纖維細(xì)胞中的miR-140表達(dá)量顯著高于巴馬香豬(P0.05);出生后1-3日齡的巴馬香豬的心臟、肌肉、肺臟和腎臟中的miR-140的表達(dá)量高于大白豬中的表達(dá)量,與此相反,大白豬的軟骨和肝臟中miR-140的表達(dá)量高于巴馬香豬,且兩豬種中mi R-140的表達(dá)量在肝臟和腎臟中差異極顯著(P0.0001),在肺臟中的表達(dá)量差異顯著(P0.01);成年階段的大白豬所有組織中miR-140的表達(dá)量均高于巴馬香豬中的表達(dá)量,其中心臟、肌肉、肺臟和肝臟中的miR-140表達(dá)量的差異極顯著(P0.0001),軟骨組織中的表達(dá)量差異顯著(P0.05)。為進(jìn)一步檢測(cè)miR-140對(duì)細(xì)胞功能的影響,本實(shí)驗(yàn)利用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)過表達(dá)的miR-140 mimics對(duì)大白豬胎兒成纖維細(xì)胞凋亡和周期的影響。結(jié)果表明轉(zhuǎn)染后24小時(shí),實(shí)驗(yàn)組(miR-140 mimics)細(xì)胞的早期凋亡、晚期凋亡和總凋亡率均低于對(duì)照組(miR-140 NC),其中晚期凋亡率有明顯的差異(P0.05)。轉(zhuǎn)染后48小時(shí),實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞的各個(gè)階段凋亡比例均低于對(duì)照組,且細(xì)胞總凋亡和晚期凋亡的比例差異顯著(P0.05),早期細(xì)胞凋亡比例的差異極顯著(P0.01)。同時(shí),細(xì)胞周期檢測(cè)結(jié)果顯示,轉(zhuǎn)染48小時(shí)后的兩組間的比例在S期差異顯著(P0.05),且與轉(zhuǎn)染完24小時(shí)檢測(cè)時(shí)三個(gè)時(shí)期(G1期、S期和G2/M期)的比例差異趨勢(shì)相同。根據(jù)miRNA靶向結(jié)合目的基因的mRNA從而對(duì)其生物學(xué)功能產(chǎn)生影響的特性,本實(shí)驗(yàn)利用生物信息學(xué)網(wǎng)站和軟件,預(yù)測(cè)到71個(gè)3’UTR與mi R-140堿基完全互補(bǔ)配對(duì)的潛在靶基因,進(jìn)一步預(yù)測(cè)發(fā)現(xiàn)500個(gè)與靶基因共表達(dá)的基因,其中200個(gè)為轉(zhuǎn)錄因子。根據(jù)共表達(dá)網(wǎng)絡(luò)圖,篩選出9個(gè)調(diào)控凋亡途徑的關(guān)鍵基因(hub基因),12個(gè)與細(xì)胞周期相關(guān)的基因。熒光定量PCR結(jié)果表明,在大白豬和巴馬香豬的胎兒成纖維細(xì)胞中,7個(gè)預(yù)測(cè)得到的靶基因與mi R-140表達(dá)量成負(fù)相關(guān)性,推測(cè)這7個(gè)基因即為miR-140的候選靶基因。綜合以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果,推斷miR-140可能是影響豬體型性狀的功能miRNA之一,而其的靶基因的確定及其作用機(jī)制需進(jìn)一步驗(yàn)證與探討。本研究為miR-140對(duì)不同體型性狀豬的體型影響研究提供了理論依據(jù),為深入研究小型豬生長(zhǎng)發(fā)育的機(jī)制奠定了基礎(chǔ)。
【學(xué)位單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：S828
【部分圖文】：

miRNA起源(引自[30]

2.2 miR-8/miR-200 與 USH/FOG2 發(fā)揮功能示意圖(引自u(píng)re 2.2 Model for the functions of miR-8/miR-200 and USH/FiR-200 之外，還有很多實(shí)驗(yàn)陸續(xù)表明 miRNA 與生物體體型實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)豬中的 miR-208b 和 miR-499-5p 可以靶向 SOX-SOX-6 與豬生長(zhǎng)，屠體和肉質(zhì)等特征有關(guān)[38]。這兩種 miR

豬miR-140莖環(huán)結(jié)構(gòu)
【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前2條

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相關(guān)博士學(xué)位論文 前1條

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本文編號(hào)：2847070