發(fā)布時間：2020-10-19 10:09

　　 巴馬香豬作為近年來研究比較廣泛的一種小型豬,在長期近親交配與各地飼養(yǎng)條件的影響下形成我國特有的小型豬封閉群體。其作為矮小品系在培育的進程中形成了很多獨特的遺傳標記,如體型矮小等形態(tài)學標記和DNA水平遺傳多態(tài)性等分子標記。microRNA(miRNA)是一種高度保守的序列長度為22nt左右的非編碼RNA,具有組織和時序特異性,對動物的生長發(fā)育有著重要的作用。近年來隨著對miRNA研究的深入,大量研究表明miRNA與動物的生長發(fā)育有著密不可分的聯(lián)系,其中位于WWP-2基因的內(nèi)含子中的miR-140,對哺乳動物軟骨發(fā)育和癌癥治療起著重要的作用,但目前針對豬的miR-140的研究未見報道。本研究以大白豬和巴馬香豬為實驗對象,檢測其胚胎時期的細胞和出生后1-3日齡以及成年時期的6種組織(心臟、肝臟、肺臟、腎臟、肌肉和軟骨)的miR-140表達量的差異。結(jié)果顯示,大白豬胎兒成纖維細胞中的miR-140表達量顯著高于巴馬香豬(P0.05);出生后1-3日齡的巴馬香豬的心臟、肌肉、肺臟和腎臟中的miR-140的表達量高于大白豬中的表達量,與此相反,大白豬的軟骨和肝臟中miR-140的表達量高于巴馬香豬,且兩豬種中mi R-140的表達量在肝臟和腎臟中差異極顯著(P0.0001),在肺臟中的表達量差異顯著(P0.01);成年階段的大白豬所有組織中miR-140的表達量均高于巴馬香豬中的表達量,其中心臟、肌肉、肺臟和肝臟中的miR-140表達量的差異極顯著(P0.0001),軟骨組織中的表達量差異顯著(P0.05)。為進一步檢測miR-140對細胞功能的影響,本實驗利用流式細胞術檢測過表達的miR-140 mimics對大白豬胎兒成纖維細胞凋亡和周期的影響。結(jié)果表明轉(zhuǎn)染后24小時,實驗組(miR-140 mimics)細胞的早期凋亡、晚期凋亡和總凋亡率均低于對照組(miR-140 NC),其中晚期凋亡率有明顯的差異(P0.05)。轉(zhuǎn)染后48小時,實驗組細胞的各個階段凋亡比例均低于對照組,且細胞總凋亡和晚期凋亡的比例差異顯著(P0.05),早期細胞凋亡比例的差異極顯著(P0.01)。同時,細胞周期檢測結(jié)果顯示,轉(zhuǎn)染48小時后的兩組間的比例在S期差異顯著(P0.05),且與轉(zhuǎn)染完24小時檢測時三個時期(G1期、S期和G2/M期)的比例差異趨勢相同。根據(jù)miRNA靶向結(jié)合目的基因的mRNA從而對其生物學功能產(chǎn)生影響的特性,本實驗利用生物信息學網(wǎng)站和軟件,預測到71個3’UTR與mi R-140堿基完全互補配對的潛在靶基因,進一步預測發(fā)現(xiàn)500個與靶基因共表達的基因,其中200個為轉(zhuǎn)錄因子。根據(jù)共表達網(wǎng)絡圖,篩選出9個調(diào)控凋亡途徑的關鍵基因(hub基因),12個與細胞周期相關的基因。熒光定量PCR結(jié)果表明,在大白豬和巴馬香豬的胎兒成纖維細胞中,7個預測得到的靶基因與mi R-140表達量成負相關性,推測這7個基因即為miR-140的候選靶基因。綜合以上實驗結(jié)果,推斷miR-140可能是影響豬體型性狀的功能miRNA之一,而其的靶基因的確定及其作用機制需進一步驗證與探討。本研究為miR-140對不同體型性狀豬的體型影響研究提供了理論依據(jù),為深入研究小型豬生長發(fā)育的機制奠定了基礎。
【學位單位】：吉林大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2018
【中圖分類】：S828
【部分圖文】：

miRNA起源(引自[30]

2.2 miR-8/miR-200 與 USH/FOG2 發(fā)揮功能示意圖(引自ure 2.2 Model for the functions of miR-8/miR-200 and USH/FiR-200 之外，還有很多實驗陸續(xù)表明 miRNA 與生物體體型實驗發(fā)現(xiàn)豬中的 miR-208b 和 miR-499-5p 可以靶向 SOX-SOX-6 與豬生長，屠體和肉質(zhì)等特征有關[38]。這兩種 miR

豬miR-140莖環(huán)結(jié)構(gòu)
【參考文獻】

相關期刊論文 前2條

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相關博士學位論文 前1條

1 趙拴平;豬骨骼肌生長發(fā)育相關基因和microRNA鑒定及其網(wǎng)絡互作分析[D];西北農(nóng)林科技大學;2012年

相關碩士學位論文 前6條

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本文編號：2847070