鴨疫里默氏桿菌(Riemerella anatipestifer)是一種無鞭毛、無芽孢,瑞氏染色呈兩極著色的革蘭氏陰性菌。該菌感染家鴨后,引起的傳染病稱為鴨傳染性漿膜炎,以纖維素性心包炎等廣泛性纖維素性炎癥為臨床病理特征。該病在世界各地廣泛分布,具有較高的發(fā)病率和死亡率,是造成養(yǎng)鴨業(yè)重大損失的主要傳染病之一。細(xì)菌DNA損傷誘導(dǎo)反應(yīng)又稱為SOS反應(yīng),是指細(xì)菌應(yīng)對基因組DNA損傷的重要保護(hù)機(jī)制。RecA/LexA蛋白在很多細(xì)菌的SOS反應(yīng)誘導(dǎo)中起關(guān)鍵調(diào)控作用。研究清楚RecA基因的功能及其可能在DNA損傷修復(fù)反應(yīng)(SOS應(yīng)答)中發(fā)揮的作用,有助于理解減弱細(xì)菌毒力和進(jìn)化,降低細(xì)菌致病性,同時(shí)有助于降低并控制日益嚴(yán)峻的細(xì)菌耐藥性,以及為開發(fā)新型抗菌小分子及生物制劑,減少化學(xué)藥物的使用以控制病原菌方面發(fā)揮著一定作用。首先在同源重組的基礎(chǔ)上,通過改造后的自殺性質(zhì)粒PRE112-RecA-Erm構(gòu)建缺失株RA-GD?RecA。在缺失株的基礎(chǔ)上,通過對回復(fù)質(zhì)粒PCP29逐步引入多克隆位點(diǎn)(Mcs)、復(fù)制區(qū)(Ori)、啟動(dòng)子(Psr)和RecA基因序列,構(gòu)建成功回復(fù)質(zhì)粒Pcp29-Mcs-Ori-Psr-RecA,與親本株RA-GD通過接合轉(zhuǎn)移構(gòu)建回復(fù)株cRA-GD?RecA。其次,對上述3種鴨疫里默氏桿菌(親本株RA-GD、缺失株RA-GD?RecA和回補(bǔ)株cRA-GD?RecA)分別開展生長曲線、藥敏試驗(yàn)、雛鴨毒力試驗(yàn)等生物學(xué)特性研究。結(jié)果表明,RecA基因并不影響鴨疫里默氏桿菌RA-GD株的生長速率;RecA基因在降低鴨疫里默氏桿菌對硫酸慶大霉素的敏感性方面發(fā)揮作用;與RA-GD相比,RecA基因的缺失顯著降低了RA-GD?RecA對雛鴨的致死率,表明RecA基因可能參與影響并減弱了鴨疫里默氏桿菌毒力因子的表達(dá)。最后,比較親本株RA-GD和回復(fù)株cRA-GD?RecA在UV損傷前后,細(xì)菌存活數(shù)、RecA基因的轉(zhuǎn)錄和蛋白表達(dá)水平。結(jié)果表明,在一定限度內(nèi),RecA基因的轉(zhuǎn)錄水平隨UV輻照時(shí)間的延長而增加。在UV引起的DNA損傷試驗(yàn)中,UV因素可以引發(fā)細(xì)菌發(fā)生DNA損傷應(yīng)答(SOS應(yīng)答),表明RecA基因可能在鴨疫里默氏桿菌RA-GD株的SOS應(yīng)答中發(fā)揮正調(diào)控作用。親本株RA-GD與回復(fù)株cRA-GD?RecA的Western blotting證實(shí),RecA蛋白反應(yīng)原性良好,但UV因素并不參與影響RecA蛋白水平的表達(dá)。
【學(xué)位單位】：中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類】：S852.61
【部分圖文】：

反之，宿主細(xì)胞中的細(xì)菌病原體會(huì)引起，由于慢性炎癥和/或基因毒素和 DNA 修復(fù) (Arthur et al., 2012)。 SOS 應(yīng)答對抗菌藥物誘導(dǎo)產(chǎn)生的 DNA 損傷進(jìn)行修復(fù)，修復(fù)突變的基因，的形成。抑制細(xì)菌 SOS 反應(yīng)，細(xì)菌基因組更容易突變，增加了出現(xiàn)耐藥性 SOS 反應(yīng)可以通過突變和促進(jìn)基因水平轉(zhuǎn)移來引入耐藥性，理論上也可以耐藥性。因此，在目前耐藥性廣泛分布現(xiàn)狀下，如何有效利用細(xì)菌 SOS 反既能增強(qiáng)現(xiàn)有抗菌藥物效果，減少耐藥性發(fā)生，又能消除現(xiàn)有細(xì)菌耐藥性因此，了解抗菌藥物存在時(shí)細(xì)菌是如何誘導(dǎo) SOS 反應(yīng)的？誘導(dǎo)的 SOS 反、轉(zhuǎn)移的機(jī)制是什么？了解這種進(jìn)化機(jī)制可能更有利于我們認(rèn)識和控制細(xì)究的目的和意義Bank 數(shù)據(jù)庫發(fā)表的 RA 全基因組序列證實(shí)(Yuan et al., 2011)，RecA 基因在守。經(jīng)與大腸桿菌 RecA 基因序列比對，同源性為 59.8%，同源性較高。菌與大腸桿菌表達(dá) RecA 蛋白的氨基酸序列，相似性為 61.11%。序列對比

圖 1.3 鴨疫里默氏桿菌 RecA 蛋白的三維構(gòu)象預(yù)測ree-dimensional conformational prediction of RecA protein因的功能及其可能在 DNA 損傷修復(fù)反應(yīng)（SOS和進(jìn)化，降低細(xì)菌致病性，同時(shí)有助于降低并控分子及生物制劑，減少化學(xué)藥物的使用以控制默氏桿菌（RA-GD 株）RecA 基因的功能。 RA 中 RecA 基因功能的相關(guān)報(bào)道�；谝陨弦蚰苎芯俊�

Fig. 2.2 Schematic diagram of the one-step rapid cloning kit reaction p化線性化載體獲得斷擴(kuò)增引物設(shè)計(jì)引物設(shè)計(jì)（5’-3’）：線性化載體正向 15-25nt 重疊序列+目的片25nt）引物設(shè)計(jì)（5’-3’）：線性化載體正向 15-25nt 重疊序列+目的片25nt）如下：A 重組 F（含 pstⅠ和 sphⅠ酶切位點(diǎn)序列）：ACAAAGGAAAACAGAAATGCTGCAGATGGCAAAGACTGAA 重組 R（含 pstⅠ和 sphⅠ酶切位點(diǎn)序列）：ATGATTACGCCAAGCTTGCATGCCTATTTAGCTTGTAATTTT圖 2.2 一步法快速克隆試劑盒反應(yīng)原理示意圖
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本文編號：2840991