鴨疫里默氏菌(RA)是一種可以感染鴨、鵝、火雞和其它禽類的細(xì)菌性病原體。近年來RA對抗生素利福平的耐藥情況日益嚴(yán)重。圍繞RA耐利福平機(jī)制及RA rpoB基因的突變對其生存和適應(yīng)性的影響,開展的主要研究內(nèi)容和結(jié)果如下:1.鴨疫里默氏菌利福平耐藥機(jī)制的研究對110株RA進(jìn)行利福平MIC測定,89%(98/110)RA對利福平具有耐藥性,MIC值在0.5~256μg/mL之間。對18株RA rpoB序列與MIC關(guān)聯(lián)性進(jìn)行分析、利用定點(diǎn)突變和自然轉(zhuǎn)化技術(shù)構(gòu)建過表達(dá)菌株進(jìn)行驗(yàn)證,結(jié)果表明RA rpoB基因5個氨基酸位點(diǎn)的突變(V382I、H491N、R494K、G502K和S539Y)與利福平耐藥相關(guān)。試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)RA-CH-1株和RCAD0147株具有相同的rpoB突變,但對利福平MIC卻相差8倍,分別是32μg/mL和256μg/mL。利用外排泵抑制劑羰基氰化物間氯苯腙(CCCP)和維拉帕米(VP)進(jìn)行試驗(yàn),發(fā)現(xiàn)RCAD0147編碼有與利福平耐藥相關(guān)的藥物外排泵,它與rpoB突變兩種機(jī)制共同提高RCAD0147對利福平的耐藥水平。2.rpoB突變對RA適應(yīng)性代價的研究利用RA自發(fā)突變試驗(yàn)分離到了15種類型的rpoB突變株,其中R494K與分離株中檢測到的突變類型完全一致。經(jīng)菌落平板計數(shù)計算得出rpoB基因突變頻率約為10~(-8),所得突變株中98.8%(247/250)位于rpoB基因利福平耐藥決定區(qū)簇I。除D481Y、I537N和S539F外,其余突變株對利福平MIC至少達(dá)到了64μg/mL。位點(diǎn)H491D和484::TAA的突變導(dǎo)致RA出現(xiàn)生長延遲。體外競爭性試驗(yàn)結(jié)果顯示突變株適應(yīng)性降低,且位點(diǎn)H491D和484::TAA突變株影響最大(相對適應(yīng)性分別是0.60和0.63)。最后對R494K和H491D突變株的定殖能力和敏感性進(jìn)行測定,結(jié)果與親本株相比兩突變株對H_2O_2和SNP的敏感性均上升。體內(nèi)定殖試驗(yàn)表明,24h內(nèi)兩突變株在感染5日齡雛鴨的氣管和腦中定殖的活菌數(shù)明顯降低。該研究表明RA對利福平耐藥的突變株中,rpoB基因單突變導(dǎo)致RA適應(yīng)性減弱,產(chǎn)生了適應(yīng)性代價。
【學(xué)位單位】：四川農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：S852.61
【部分圖文】：

需要在稀釋好的菌液中添加次抑制濃度（1/2 抑制濃度排泵抑制劑 VP 對 RA 的生長不存在明顯的抑制作用，在測 MIC 時，需要在稀釋好的菌液中添加適當(dāng)濃度（80 μg/mL驟參見第二章“2.1 110 株 RA 對利福平耐藥性測定”。最終[91]所述，對利福平的 MIC 值至少降低為原來的 1/4 才能被。果 RA 對利福平耐藥性測定結(jié)果

RCAD0127 中同時存在 G50有 R494K 突變的菌株則表現(xiàn)H-1 和 RCAD0147 兩個菌株上表現(xiàn)出至少 8 倍的差異。3:: rpoB+過表達(dá)菌株的與 pLMF03 空白質(zhì)粒模板，利用所設(shè)計引物，B 基因全長為 3828 bp，附帶存在大腸桿菌 DH5α 中。將盒抽提質(zhì)粒（圖 2-2）。

圖 2-3. pLMF03::rpoB＋質(zhì)粒雙酶切鑒定Figure 2-3. Identification of pLMF03::rpoB+ plasmids by double enzyme digestion泳道 M 為 DL15000 Marker；泳道 1 為 pLMF03::rpoB(V382I)質(zhì)粒；泳道 2 為pLMF03::rpoB(H491N) 質(zhì)粒；泳道 3 為 pLMF03::rpoB(R494K) 質(zhì)粒；泳道 4 為pLMF03::rpoB(G502K) 質(zhì)粒；泳道 5 為 pLMF03::rpoB(S539Y) 質(zhì)粒；泳道 6 為pLMF03::rpoB(V382I)雙酶切產(chǎn)物；泳道 7 為 pLMF03::rpoB(H491N)雙酶切產(chǎn)物；泳道 8 為pLMF03::rpoB(R494K)雙酶切產(chǎn)物；泳道 9 為 pLMF03::rpoB(G502K)雙酶切產(chǎn)物；泳道 10 為pLMF03::rpoB(S539Y)雙酶切產(chǎn)物；Lane M is DL15000 Marker; Lane 1 is pLMF03:: rpoB (V382I) plasmid; Lane 2 is pLMF03::rpoB (H491N) plasmid; Lane 3 is pLMF03:: rpoB (R494K) plasmid; Lane 4 is pLMF03 :: rpoB(G502K) plasmid; Lane 5 is pLMF03:: rpoB (S539Y) plasmid; Lane 6 is pLMF03:: rpoB (V382I)double digested product; Lane 7 is pLMF03:: rpoB (H491N) double digested product; Lane 8 ispLMF03:: rpoB (R494K) double digested product; Lane 9 is pLMF03 :: rpoB (G502K) double digestionproduct; Lane 10 is pLMF03:: rpoB (S539Y) double digestion products3.3.3 RpoB 過表達(dá)菌株 ATCC 11845-pLMF03::rpoB＋的鑒定
【相似文獻(xiàn)】

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7 霍翠梅;鴨疫里默氏桿菌檢測方法的建立[D];山東農(nóng)業(yè)大學(xué);2007年

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9 潘海城;一株鴨疫里默氏菌部分生物學(xué)特性分析[D];福建農(nóng)林大學(xué);2010年

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本文編號：2838967