綿羊肺炎支原體(Mycoplasmaovipneumonime M ovi)可在綿羊和山羊中引起羊支原體性肺炎,該病是一種廣泛流行的高度接觸性傳染病。先天免疫細(xì)胞利用細(xì)胞質(zhì)膜和胞漿內(nèi)的受體對(duì)支原體的識(shí)別以及激活可能是引起羊機(jī)體某些免疫反應(yīng)的主要原因。Toll樣受體(toll-like receptors,TLRs)是目前己知的主要受體,在識(shí)別病原相關(guān)分子模式(pathogen associated molecular patterns,PAMPs)和內(nèi)源性損傷相關(guān)分子模式(damage associated molecular patterns,DAMPs)大分子中發(fā)揮著重要的作用。該類(lèi)受體參與對(duì)肺炎支原體的識(shí)別,從而誘導(dǎo)宿主的適當(dāng)免疫應(yīng)答反應(yīng)并清除感染,或誘導(dǎo)產(chǎn)生慢性炎癥。1.本實(shí)驗(yàn)利用AM.ovi及其脂質(zhì)相關(guān)膜蛋白(lipid-related membrane proteins,LAMPs)分別刺激C57BL/6J、Tlr2-/-和Nlrp3--三種小鼠的腹腔巨噬細(xì)胞,并通過(guò)熒光定量PCR、流式細(xì)胞術(shù)、Western blot和ELISA等實(shí)驗(yàn)手段分別對(duì)巨噬細(xì)胞TLR2和NLRP3受體,相關(guān)NF-κB、促分裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)和caspase-1信號(hào)通路,以及細(xì)胞因子腫瘤壞死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)和白細(xì)胞介素1β(interleukin-1β,IL-1β)的表達(dá)、激活和分泌情況分別進(jìn)行檢測(cè)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明(1)M ovi和其LAMPs可引起小鼠腹腔巨噬細(xì)胞表面TLR2及胞內(nèi)NLRP3受體基因及蛋白表達(dá)水平升高。(2)M ovi和其LAMPS可通過(guò)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞TLR2及NLRP3受體激活NF-κB、MAPK和caspase-1信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路。(3)M ovi和其LAMPS可通過(guò)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞TLR2及NLRP3受體引起細(xì)胞因子TNF-α和IL-1β分泌的增多。2.本實(shí)驗(yàn)在成功分離綿羊肺泡巨噬細(xì)胞的基礎(chǔ)上,利用Movi和其LAMPS對(duì)其進(jìn)行刺激,通過(guò)熒光定量PCR以及流式細(xì)胞術(shù)分別對(duì)細(xì)胞TLR2和NLRP3受體的基因和蛋白表達(dá)情況進(jìn)行檢測(cè)。利用Western blot和ELISA方法對(duì)NF-κB和MAPK信號(hào)通路以及細(xì)胞因子TNF-α和IL-1β的表達(dá)水平進(jìn)行檢測(cè)。同時(shí),利用相應(yīng)的受體功能抑制性抗體和信號(hào)蛋白抑制劑對(duì)受體和信號(hào)通路進(jìn)行抑制,并做相應(yīng)檢測(cè)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明(1)M ovi和其LAMPs可引起綿羊肺泡巨噬細(xì)胞表面TLR2及胞內(nèi)NLRP3受體基因及蛋白表達(dá)水平升高。(2)M ovi和其LAMPs可激活綿羊肺泡巨噬細(xì)胞中NF-κB和MAPK信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路。(3)M ovi和其LAMPs可使綿羊肺泡巨噬細(xì)胞的細(xì)胞因子TNF-α和IL-1β分泌增多。(4)TLR2功能抑制性抗體可阻斷M ovi和其LAMPs激活綿羊肺泡巨噬細(xì)胞中NF-κB和MAPK信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路,并降低細(xì)胞因子TNF-α和IL-1β的分泌。(5)M ovi和其LAMPS刺激綿羊肺泡巨噬細(xì)胞后,NF-1κB和MAPK功能抑制劑可降低細(xì)胞因子TNF-α和IL-1β的分泌。
【學(xué)位單位】：內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類(lèi)】：S858.26
【部分圖文】：

圖３巨噬細(xì)胞表面ＬＰＳ和ＬＰＰ相互作用的機(jī)制逡逑Ｆｉｇ．邋３邋Ｐｏｓｓｉｂｌｅ邋ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ邋ｏｆ邋ａｃｔｉｔ＞ｎ邋ｏｆ邋ｌｉｐｏｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ邋（ＬＰＳ）邋ａｎｄ邋ｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎｓ邋（ＬＰＰ）邋ａｔ邋ｔｈｅ?

圖４邋ＮＭ２０１０株生長(zhǎng)曲線(xiàn)測(cè)定結(jié)果逡逑Ｆｉｇ．邋４邋Ｇｒｏｗｔｈ邋ｃｕｒｖｅ邋ｏｆ邋ＮＭ２０１０邋ｓｔｒａｉｎ逡逑

圖５你ｍ／刺激小鼠巨嗤細(xì)胞后７Ｖ／－２基因的表達(dá)逡逑Ｆｉｇ．邋５邋Ｔｌｒ２邋ｇｅｎｅ邋ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ邋ｂｙ邋ｍａｃｒｏｐｈａｇｅｓ邋ａｆｔｅｒ邋Ｍ．邋ｏｗ－ｔｒｅａｔｅｄ逡逑

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本文編號(hào)：2835039