創(chuàng)傷是獸醫(yī)臨床上常見病例,糖尿病是影響創(chuàng)傷愈合的重要因素之一,血糖升高將引起傷口周圍細(xì)胞代謝異常以及血管發(fā)生狹窄和閉塞,同時(shí)也會(huì)導(dǎo)致自身免疫力下降。蘆薈膠具有抑菌消炎、免疫調(diào)節(jié)、鎮(zhèn)痛以及促進(jìn)肉芽組織生成等作用,能有效促進(jìn)創(chuàng)傷愈合。本研究的目的就是探討蘆薈凝膠在糖尿病犬皮膚創(chuàng)傷愈合過程中的作用,并初步探究蘆薈凝膠是通過哪些指標(biāo)來影響創(chuàng)傷愈合速率,為今后臨床治療糖尿病動(dòng)物創(chuàng)傷愈合提供新思路。6只大型中華田園犬適應(yīng)性飼養(yǎng)兩周后,先建立糖尿病模型后建立創(chuàng)傷模型。在犬背作16個(gè)創(chuàng)口(用直徑約為15 mm的自制打孔器作皮膚全層切除),從左到右每列分別為空白對(duì)照組(K組)、凡士林組(F組)、蘆薈膠組(L組)和橡皮生肌膏組(X組)。每天同一時(shí)間給藥且每周稱一次體重;術(shù)后第0 d、3 d、7 d、14 d、21 d、28 d拍照記錄愈合情況;用ImageJ軟件計(jì)算3 d、7 d、14 d、21 d的創(chuàng)面愈合率、創(chuàng)傷愈合時(shí)間及愈合后瘢痕面積;于第7 d、14 d、21 d、28 d取皮膚組織樣本進(jìn)行HE染色及Masson染色;ELISA試劑盒測(cè)定組織勻漿中白細(xì)胞介素1-β(Interleukin-1β,IL-1β)、白細(xì)胞介素6(Interleukin-6,IL-6)、腫瘤壞死因子-α(Tumor Necrosis Factor-α,TNF-α)和轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β(Transforming Growth Factor-β,TGF-β)四種炎性因子的含量;提取組織RNA并用RT-PCR檢測(cè)創(chuàng)面愈合相關(guān)因子血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(Vascular Endothelial Growth Factor,VEGF)和血小板衍生因子(Platelet Derived Growth Factor,PDGF)的含量。實(shí)驗(yàn)結(jié)果:糖尿病模型及創(chuàng)傷模型建立成功。3周后糖尿病犬的體重呈下降趨勢(shì)。肉眼觀察與K組相比L組和X組可較快生成肉芽組織及上皮,結(jié)痂脫落及瘢痕組織形成時(shí)間均減少。與K組相比,創(chuàng)面愈合率隨時(shí)間而增加,7 d及14 d時(shí)L組和X組差異極顯著(P0.01),21 d時(shí)僅X組差異顯著(P0.05);創(chuàng)面愈合時(shí)間L組和X組差異極顯著(P0.01);愈合后瘢痕面積L組差異顯著(P0.05),X組差異極顯著(P0.01)。皮膚勻漿中的IL-1β、IL-6、TNF-α和TGF-β整體含量逐漸下降,組間含量也逐漸降低。與K組相比,IL-1β在7 d時(shí)L組差異顯著(P0.05),X組差異極顯著(P0.01);14 d時(shí)L組差異顯著(P0.05),X組差異極顯著(P0.01);21 d時(shí)僅有L組差異顯著(P0.05)。IL-6在7 d時(shí)L組和X組差異極顯著(P0.01);14 d時(shí)L組和X組差異顯著(P0.05)。TNF-α在7 d時(shí)L組和X組差異顯著(P0.05);14 d時(shí)L組和X組差異極顯著(P0.01)。TGF-β在7 d時(shí)L組和X組差異顯著(P0.05);14 d時(shí)L組差異顯著(P0.05),X組差異極顯著(P0.01)。HE染色結(jié)果顯示7 d時(shí)四組創(chuàng)面均有大量炎性細(xì)胞浸潤(rùn),少量肉芽組織覆蓋以及血管組織新生,但L組和X組的炎癥細(xì)胞密度比K組和F組小。14 d時(shí)四組創(chuàng)面有少量上皮細(xì)胞覆蓋,與K組和F組相比,L組和X組炎癥細(xì)胞較少但新生血管數(shù)量較多,并伴有少量成纖維細(xì)胞和膠原纖維生成。21 d時(shí)四組可見大量成熟肉芽組織,K組和F組仍有少量的炎癥細(xì)胞浸潤(rùn),L組和X組創(chuàng)緣組織完全上皮化,成纖維細(xì)胞與膠原纖維較多。28 d時(shí)四組均見成熟肉芽組織,L組和X組有表皮和皮脂腺再生,而K組和F組未發(fā)現(xiàn)。Masson染色結(jié)果顯示四組創(chuàng)面膠原纖維隨治療時(shí)間延長(zhǎng)而增多。7 d和14 d時(shí)L組和X組的膠原纖維生成量比K組和F組多,14 d時(shí)L組和X組的膠原纖維分布均勻且排列相對(duì)整齊,而K組和F組的膠原纖維排列不規(guī)則,卷曲成團(tuán)。21 d和28 d時(shí)K組和F組膠原纖維排列仍處于混亂狀態(tài),而L組和X組膠原纖維的染色特性和排列方式更接近正常皮膚組織。PDGF和VEGF基因的表達(dá)量整體呈下降趨勢(shì),但組間呈上升趨勢(shì)。PDGF基因表達(dá)量與K組相比,7 d時(shí),L組有顯著差異(P0.05),X組有極顯著差異(P0.01);14 d時(shí),L組和X組有顯著差異(P0.05);21 d時(shí),只有X組有顯著差異(P0.05)。VEGF基因的表達(dá)量與K組相比,7 d時(shí),L組有顯著差異(P0.05),X組有極顯著差異(P0.01);14 d時(shí),L組和X組有顯著差異(P0.05)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明:蘆薈凝膠在糖尿病犬的創(chuàng)傷愈合過程中能加快創(chuàng)面愈合速率,縮短創(chuàng)面愈合時(shí)間,減少愈合后瘢痕面積,抑制IL-1β、IL-6、TNF-α和TGF-β等炎癥因子的分泌,刺激VEGF和PDGF等創(chuàng)傷愈合相關(guān)細(xì)胞因子的表達(dá),從而達(dá)到加快創(chuàng)傷愈合的目的。
【學(xué)位單位】：東北農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類】：S858.292
【部分圖文】：

圖 2-1 創(chuàng)傷模型的制備Fig.2-1 Preparation of wound model面愈合的臨床指標(biāo)床一般觀察術(shù)后第 0 d、3 d、7 d、14 d、21 d、28 d，肉眼觀察創(chuàng)面愈合情況，有無滲出物以及肉芽組織生長(zhǎng)等情況并拍照。傷愈合率術(shù)后第 0 d、3 d、7 d、14 d、21 d、28 d 觀察創(chuàng)面愈合情況并在同一時(shí)間件計(jì)算出創(chuàng)面愈合率。創(chuàng)面愈合率的計(jì)算是用原始創(chuàng)面面積減去未愈合的始創(chuàng)面面積乘以 100%。面愈合時(shí)間犬進(jìn)行長(zhǎng)期觀察，并記錄創(chuàng)面愈合時(shí)間。本實(shí)驗(yàn)中創(chuàng)面愈合以創(chuàng)面被肉芽準(zhǔn)，達(dá)到愈合標(biāo)準(zhǔn)的時(shí)間即為創(chuàng)面愈合時(shí)間。合后創(chuàng)面瘢痕面積

.1 糖尿病造模前后犬血糖及體重的變化犬正常血糖值為空腹 3.3-6.7 mmol/l，餐后 3.6-7.7 mmol/l，連續(xù) 3 d于早上空腹、餐后晚 8 時(shí)監(jiān)測(cè)犬的血糖，結(jié)果見表 3-1。在任一時(shí)間點(diǎn)，所有犬的血糖值均處于正常范圍高血糖或低血糖等異常情況。表 3-1 糖尿病模型前犬血糖值Tab. 3-1 The blood glucose level of canines before diabetes model間/編號(hào) 1 2 3 4 5 6空腹 4.43±0.404 4.23±0.751 3.70±0.300 3.53±0.322 3.77±0.153 4.23±0.2餐后 5.23±0.651 4.53±0.723 3.97±0.116 4.10±0.100 4.17±0.569 4.47±0.1晚 8 時(shí) 4.93±0.208 4.07±0.058 3.37±0.322 3.97±0.503 3.80±0.625 4.23±0.3有學(xué)者表明若注射四氧嘧啶 48 h后隨機(jī)血糖≥11.1 mmol/L，且持續(xù)兩周血糖均維持在平以上，則證明糖尿病犬造模成功。因此分別于注射四氧嘧啶前 0.5 h和 0.5 h、2 h、4、8 h、10 h、12 h、1 d、1.5 d、2 d、2.5 d、3 d、5 d、7 d、9 d、11 d、13 d、15 d監(jiān)測(cè)血糖，結(jié)果見表 3-2。糖尿病模型犬在 2 h后血糖急劇升高且維持在 14 mmol/L以上，明于對(duì)照組。

圖 3-3 各時(shí)間段創(chuàng)面愈合情況臨床觀察Fig. 3-3 Clinical observation of wound healing in each period3.2.2 蘆薈膠對(duì)創(chuàng)面愈合率影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果分別于術(shù)后 3 d、7 d、14 d、21 d 測(cè)量各實(shí)驗(yàn)組犬的創(chuàng)傷面積，然后計(jì)算出平均創(chuàng)合率總體來看實(shí)驗(yàn)犬創(chuàng)面愈合率隨著天數(shù)的增長(zhǎng)均逐漸增加。第 3 d 時(shí)，雖然蘆薈膠組皮生肌膏組的平均愈合率比空白對(duì)照組及凡士林組的愈合率高，但經(jīng)分析后結(jié)果并沒有性差異；第 7 d 及第 14 d 時(shí)，與空白對(duì)照組相比，蘆薈膠組和橡皮生肌膏組的愈合率顯加，呈極顯著增加（P<0.01），凡士林組無顯著差異；第 21 d 時(shí)，蘆薈膠組和橡皮生肌已基本愈合，與空白對(duì)照組相比，橡皮生肌膏組創(chuàng)面愈合率顯著增加（P<0.05），凡士林蘆薈膠組無顯著差異。結(jié)果見表 3-2 和圖 3-4。表 3-2 創(chuàng)面平均愈合率（%）Tab. 3-2 Average wound healing rate (%)組別/時(shí)間 3 d 7 d 14 d 21 d空白對(duì)照組 2.573±0.518 10.610±0.956 47.500±3.631 89.313±1.5凡士林組 2.140±0.260 14.310±3.994 52.480±1.770 88.397±3.2蘆薈膠組 8.447±1.130 26.480±5.134** 72.397±2.625** 94.347±2.0

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