為了解廣西地區(qū)犬細小病毒病的流行病學情況,及時發(fā)現(xiàn)和掌握疫情動態(tài),現(xiàn)將2015年1月1日至2017年12月31日期間,在廣西地區(qū)的11861例犬傳染性病毒病(以犬瘟熱病毒(canine distemper virus,CDV)、犬細小病毒(canine parvovirus,CPV)、犬冠狀病毒(canine coronavirus,CCV)為主)及其中7107例犬細小病毒病單一感染和犬細小病毒病混合感染的門診記錄情況進行調(diào)查分析。結(jié)果表明:犬細小病毒感染存在性別、年齡、品種、季節(jié)和免疫狀況等方面的差異,其中公犬感染率高,2-3月齡幼犬感染率高,純種犬發(fā)病率高,3-5月份犬發(fā)病率高,未免疫接種的犬感染率高。本實驗建立了快速檢測犬細小病毒的PCR方法,最低能檢測出5-6×6.1342ng/μL的病毒DNA。隨機采集2016～2017年來自廣西地區(qū)的120只患病動物應(yīng)用膠體金免疫層析法確診為犬細小病毒的臨床病料,應(yīng)用已建立的PCR檢測方法對其進行二次檢測,120只患病動物的病料均為陽性,檢出率為100%。PCR方法檢測CPV具有更高的靈敏性,而膠體金免疫層析法在臨床操作上更加快捷簡便。通過對廣西不同地區(qū)的120份臨床病料的CPV VP2全基因測序結(jié)果進行CPV亞型分析,發(fā)現(xiàn)CPV-2c亞型占59.17%(71/120),CPV--2亞型占25.83%(31/120),CPV-2b 亞型占 15.00%(18/120),表明 2016～2017年廣西地區(qū)的CPV主要流行的亞型為CPV-2c和CPV-2a,而CPV-2b的比例較低,無CPV-2亞型,這也是廣西地區(qū)首次發(fā)現(xiàn)CPV-2c;分離株之間以及與參考毒株之間的核苷酸序列、氨基酸序列的同源性都較高。通過對從PCR鑒定VP2全基因為陽性的120份樣品(糞便)DNA隨機挑選出10份樣品進行CPV全基因測序,從測序結(jié)果可知全基因的核苷酸同源性較高,但氨基酸同源性有高有低,而VP2的核苷酸及氨基酸的同源性都較高,再結(jié)合臨床癥狀觀察可知,這10個樣品所對應(yīng)的病犬的臨床癥狀都符合犬細小病毒病的臨床癥狀,所以CPV起抗原決定簇作用的部位在VP2片段上,與報道相符合。綜上所述,廣西地區(qū)犬細小病毒病的分子流行病學調(diào)查及遺傳差異分析,為探討臨床免疫失敗的原因及有針對性地開發(fā)寵物用CPV疫苗奠定了理論基礎(chǔ)。
【學位單位】：廣西大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2018
【中圖分類】：S858.292
【部分圖文】：

５７．０ｏＣ、５８．０°Ｃ、５９．０。0、６０．０0Ｃ的退火溫度中，均可擴增出明顯的ＤＮＡ片段，且擴增逡逑出來的ＤＮＡ片段值與期望值６９３ｂｐ相當，最后通過從各方面因素考慮，選擇最終的退逡逑火溫度為５５．０°Ｃ邋（圖３－１）。逡逑Ｍ邋１邐２邐３邐４邐５邐６７８９邐１０逡逑＿＿邋Ｊｌ？■栜：１j#二逡逑２０００邋ｂｐ逡逑圖３－１邋ＰＣＲ檢測的最佳退火溫度逡逑Ｆｉｇ．３－１邋Ｔｈｅ邋ｏｐｔｉｍｕｍ邋ａｎｎｅａｌｉｎｇ邋ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ邋ｆｏｒ邋ＰＣＲ邋ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ逡逑Ｍ：邋ＤＬ２０００邋ＤＮＡＭａｒｋｅｒ；邋１？１０為犬細小病毒ＤＮＡ的ＰＣＲ產(chǎn)物，退火溫度分別為５１．０°Ｃ、５２．０°Ｃ、逡逑５３．０。。、５４．０。0、５５．０°Ｃ、５６．０。0、５７．０°Ｃ、５８．０。。、５９．０。。、６０．０。0。逡逑３．３．Ｉ．２最適ＤＮＡ模板量的確立逡逑通過瓊脂糖凝膠電泳顯示，觀察到在犬細小病毒（ＣＰＶ）ＤＮＡ模板的量分別為０．２ｐＬ、逡逑０＿４ｊｊＬ、０．６｜ｉＬ、０．８ｐＬ、ｌ＿０ｐＬ、１．２｜ｉＬ、１．４叫、１．６ｐＬ、１．８｜ｉＬ、２．0ｎＬ邋中，均可擴增出明逡逑顯的ＤＮＡ片段，且擴增出來的ＤＮＡ片段值與期望值６９３ｂｐ相當，最后通過從各方面逡逑因素考慮

邐廣西地區(qū)犬細小病毒的分子流行病學調(diào)查研究逡逑Ｍ邋１２３４５６７８９邐１０逡逑圖３－２邋ＰＣＲ檢測的最佳ＤＮＡ模板量逡逑Ｆｉｇ．３－２邋Ｔｈｅ邋ｏｐｔｉｍａｌ邋ＤＮＡ邋ｔｅｍｐｌａｔｅ邋ａｍｏｕｎｔ邋ｆｏｒ邋ＰＣＲ邋ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ逡逑Ｍ：邋ＤＬ２０００ＤＮＡＭａｒｋｅｒ；邋１？１０為犬細小病毒ＤＮＡ的ＰＣＲ產(chǎn)物，犬細小病毒ＤＮＡ模板的量分別逡逑為邋０．２ｊｉＬ、０．４ｊｉＬ、０．６｜ａＬ、０．８ｊｊＪＬ、ｌ．ＯｊｉＬ、１．２（ｉＬ、１．４｜ｉＬ、１．６ｊｉＬ、１．８｜ｉＬ、２．０｜ｉＬ。逡逑３．３．１．３最適引物量的確立逡逑通過瓊脂糖凝膠電泳顯示，觀察到在上下游引物（ＧＸＰ－Ｆ１和ＧＸＰ－Ｒ１）的量分別逡逑為邋０．２ｐＬ、０．４｜ｉＬ、０．６（ｉＬ、０＿８｜ｉＬ、１．０（＿ｉＬ、１．２（ＪＬ、１．４ｊｉＬ、１．６（ｉＬ、１．８｜ｉＬ、２．０（ｉＬ邋中，均逡逑可擴增出明顯的ＤＮＡ片段，且擴增出來的ＤＮＡ片段值與期望值６９３ｂｐ相當，最后通逡逑過從各方面因素考慮，選擇最終的引物量均為１．０邐（圖＞３）。逡逑Ｍ邋１邐２邐３邐４邐５邐６邐７邐８邐９邐１０逡逑＼邐、ｖ／邋＜Ｖ”；邐＞邋ｗ邋、邋Ｖ邐：邋，丫邋、？４逡逑＿＿焌嫇趣~杶朸~霉ｉ媝囊１嫇灥逡逑ｂｐ邐廣＇：逡逑圖３－３邋ＰＣＲ檢測的最佳引物量逡逑Ｆｉｇ．３－３邋Ｔｈｅ邋ｏｐｔｉｍｕｍ邋ｐｒｉｍｅｒ邋ｑｕａｎｔｉｔｙ邋ｆｏｒ邋ＰＣＲ邋ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ逡逑Ｍ：邋ＤＬ２０００ＤＮＡＭａｒｋｅｒ；邋１？１０為犬細小病毒ＤＮＡ的ＰＣＲ產(chǎn)物

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【參考文獻】

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本文編號：2833910