Ghrelin是一種首先在胃部發(fā)現(xiàn)的、與生長(zhǎng)激素促分泌素受體(Growth hormone secretagogue receptor,GHS-R)結(jié)合后發(fā)揮其功能性作用的激素。大量研究表明Ghrelin具有調(diào)控生長(zhǎng)激素(Growth hormone,GH)、刺激食欲和調(diào)節(jié)能量平衡、影響胰島素分泌和調(diào)節(jié)糖代謝、抗炎免疫、增強(qiáng)心臟功能和保護(hù)消化道黏膜等多種生物學(xué)效應(yīng)。馬鹿是一種珍貴的反芻動(dòng)物,目前極少有關(guān)于馬鹿Ghrelin的研究報(bào)道。本研究為探知馬鹿Ghrelin cDNA全長(zhǎng)序列及Ghrelin在馬鹿體內(nèi)可能表達(dá)的器官,利用克隆、反轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(RT-PCR)、實(shí)時(shí)熒光定量PCR(RT-qPCR)和生物信息學(xué)分析等技術(shù)對(duì)其進(jìn)行研究。結(jié)果顯示:首次獲得馬鹿Ghrelin cDNA全長(zhǎng)序列,共539 bp,包含46 bp的5′非翻譯區(qū)(5′Untranslated Region,5′UTR)、351 bp開(kāi)放閱讀框(Open Reading Frame,ORF)及128 bp的3′非翻譯區(qū)(3′UTR)。該ORF編碼116個(gè)氨基酸殘基,包括23個(gè)氨基酸殘基組成的信號(hào)肽,27個(gè)氨基酸殘基組成的成熟肽及66個(gè)氨基酸殘基組成的C-末端肽。生物信息學(xué)分析顯示:馬鹿Ghrelin基因編碼產(chǎn)物存在跨膜區(qū)域和信號(hào)肽。RT-PCR和RT-qPCR結(jié)果顯示:Ghrelin mRNA在馬鹿的舌、食管、瘤胃、網(wǎng)胃、瓣胃、皺胃、十二指腸、空腸、回腸、盲腸、結(jié)腸、直腸、大腦、下丘腦、氣管黏膜、肺、心肌、心內(nèi)膜、肝、胰、脾、腎、輸尿管、膀胱、輸卵管、子宮、陰道、垂體、松果體、頜下腺、腮腺、甲狀腺、淋巴結(jié)、腎上腺、卵巢和骨骼肌等器官中均有表達(dá),且皺胃內(nèi)的表達(dá)量明顯高于其它器官。以上研究結(jié)果為進(jìn)一步探究Ghrelin基因的相關(guān)生物信息學(xué)情況奠定理論基礎(chǔ),同時(shí)為研究Ghrelin在馬鹿體內(nèi)的生理功能提供有效依據(jù)。
【學(xué)位單位】：內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類(lèi)】：S825
【部分圖文】：

3.1.1 馬鹿 Ghrelin cDNA 中間片段、3′RACE 和 5′RACE 擴(kuò)增結(jié)果經(jīng)1%的瓊脂凝膠電泳檢測(cè)，馬鹿Ghrelin cDNA中間片段產(chǎn)物約為165 bp，3′RACE產(chǎn)物約為212 bp，5′RACE產(chǎn)物約為364 bp，均與預(yù)期片段大小相同（圖1）。SYBR Premin Ex TaqII（2×）P3 primer/ P5 primer（10 μmol/L）P4 primer/ P6 primer（10 μmol/L）cDNAddH2OTotal100.80.826.420圖 1 中間片段（M1）、3′RACE（M2）和 5′RACE（M3） 產(chǎn)物的電泳結(jié)果Fig. 1 Electrophoresis analysis of intermediate segment (M1), 3' RACE (M2) and 5' RACE (M3) product.Marker. DL2000 DNAMarker

與3′RACE和5′RACE擴(kuò)增的片段大小相同，證明載體與目的片段連接成功（圖2）。圖 2 菌液 PCR 鑒定 3′RACE 和 5′RACE 產(chǎn)物的電泳結(jié)果Fig. 2 Electrophoresis analysis of 3' RACE and 5' RACE product.Marker. DL2000 DNAMarker3.1.3 馬鹿 Ghrelin 全長(zhǎng) cDNA 序列分析將 PCR 鑒定正確的陽(yáng)性菌液送北京美吉生物醫(yī)藥科技有限公司測(cè)定。馬鹿Ghrelin cDNA 的序列全長(zhǎng) 539 bp，這一序列包含 46 bp 的 5′UTR、351 bp 的 ORF 和128 bp 的 3′UTR，編碼 116 個(gè)氨基酸，起始與終止密碼子分別為 ATG 和 TGA（圖 3）。

ATG: 起始密碼子 、*終止密碼子、預(yù)測(cè)的信號(hào)肽、成熟肽和 c-末端肽分別用下劃線(xiàn)、陰影和虛線(xiàn)表示ATG is start codon, * is stop codon, signal peptide is underlined, the activation peptide is shaded and dashedline is used for c-terminal peptide.圖 3 馬鹿 Ghrelin cDNA 的序列和預(yù)測(cè)的氨基酸序列Fig. 3 The cDNA sequence and amino acid sequence of Ghrelin gene in red deer3.1.4 馬鹿 Ghrelin cDNA 全序列的同源性比較使用 MegAlign 軟件將馬鹿 Ghrelin cDNA 和其他物種進(jìn)行同源性分析。結(jié)果顯示，馬鹿 Ghrelin cDNA 與馴鹿、梅花鹿、山羊、綿羊、牛的同源性最高為 98.3%、98.1%、94.1%、92.7%、91.4%，其次是恒河猴、豬、狗、人分別為 76.3%、69.7%、69.0%、66.1%，而與野鴿、雞和草魚(yú)同源性最低分別為 36.5%、36.4%和 25.1%（圖4）。上述各物種 Ghrelin 基因的生物進(jìn)化樹(shù)分析顯示，馬鹿與馴鹿、梅花鹿、山羊、綿羊和牛在生物進(jìn)化樹(shù)中距離最近（圖 5）。

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 張曼;金鑫;田巧珍;劉驕;王云鶴;楊銀鳳;;梅花鹿Ghrelin全長(zhǎng)cDNA克隆及其序列分析[J];中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào);2017年12期

2 劉驕;張曼;金鑫;范燕茹;田巧珍;楊銀鳳;;梅花鹿體內(nèi)腦腸肽的表達(dá)及細(xì)胞定位分析[J];畜牧獸醫(yī)學(xué)報(bào);2017年01期

3 張曼;金鑫;劉驕;楊銀鳳;;Ghrelin在馴鹿器官內(nèi)的表達(dá)及定位檢測(cè)[J];畜牧獸醫(yī)學(xué)報(bào);2016年12期

4 阮國(guó)良;廖凱;楊代勤;邴旭文;;黃鱔ghrelin基因的克隆及分子特征分析[J];水生態(tài)學(xué)雜志;2016年01期

5 鄭福;張珍;黎宗強(qiáng);;Ghrelin結(jié)構(gòu)與生理功能的研究進(jìn)展[J];黑龍江畜牧獸醫(yī);2015年19期

6 陳文明;何敏;梁曉霞;汪開(kāi)毓;方靜;陳正禮;楊歡;李雪;;Ghrelin在成年中國(guó)黃羽鵪鶉消化道中的定位[J];動(dòng)物學(xué)雜志;2015年04期

7 程亮;王維民;李發(fā)弟;馬友記;郭江鵬;;綿羊Ghrelin基因的克隆和生物信息學(xué)分析[J];甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào);2012年06期

8 陳勇;李家樂(lè);沈玉幫;傅建軍;王榮泉;宣云峰;;草魚(yú)ghrelin基因的分子克隆與組織分布及其攝食調(diào)控作用分析[J];水產(chǎn)學(xué)報(bào);2012年05期

9 李恭賀;寧淑芳;王世凱;何寶祥;蔣和生;;廣西水牛ghrelin cDNA的克隆及序列分析[J];安徽農(nóng)業(yè)科學(xué);2009年02期

10 林少達(dá);陳小華;;Ghrelin對(duì)心血管系統(tǒng)作用的研究進(jìn)展[J];心血管康復(fù)醫(yī)學(xué)雜志;2006年02期

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1 呂東媛;Ghrelin在烏珠穆沁羊雌性生殖道內(nèi)的表達(dá)及其真核表達(dá)載體的構(gòu)建[D];內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué);2008年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前6條

1 張娜;牦牛Ghrelin對(duì)其極端生境適應(yīng)的分子機(jī)理[D];蘭州大學(xué);2016年

2 劉濤;齊口裂腹魚(yú)腸道ghrelin基因cDNA序列的克隆、組織分布與原核表達(dá)的研究[D];四川農(nóng)業(yè)大學(xué);2012年

3 李加龍;牦牛Ghrelin基因的克隆及其在“下丘腦—垂體—胃”軸上的表達(dá)機(jī)理[D];蘭州大學(xué);2012年

4 周朝偉;鯽魚(yú)gherlin基因cDNA序列基因的克隆與原核表達(dá)研究[D];四川農(nóng)業(yè)大學(xué);2011年

5 朱雪敏;馴鹿Ghrelin全長(zhǎng)cDNA的克隆及序列分析[D];內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué);2008年

6 宋艷華;Ghrelin在蒙古綿羊卵泡顆粒細(xì)胞及其擬黃體化過(guò)程中的表達(dá)[D];內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué);2008年

本文編號(hào)：2833282