發(fā)布時間：2020-10-08 23:30

　　 為了解呼倫貝爾地區(qū)豬大腸桿菌病發(fā)病情況及豬致病性大腸桿菌血清類型、耐藥性、攜帶耐藥基因等情況,對當?shù)?個規(guī)模化豬場進行了豬大腸桿菌病的發(fā)病情況調(diào)查,對分離鑒定出的豬致病性大腸桿菌進行了血清型鑒定及藥物敏感試驗。對采集樣本培養(yǎng)后的細菌總菌及分離鑒定出豬致病性大腸桿菌采用PCR方法進行了四環(huán)素類、大環(huán)內(nèi)酯類及β-內(nèi)酰胺類共10種耐藥基因及I型整合子檢測。同時采用微生態(tài)制劑EM原露對仔豬腹瀉進行了預防試驗。采用硫酸阿米卡星注射液與乳酸環(huán)丙沙星注射液對人工誘發(fā)的豬大腸桿菌病進行了治療試驗。具體結(jié)果如下。(1)采用現(xiàn)場調(diào)查、查閱資料、病理剖檢、實驗室診斷對呼倫貝爾地區(qū)8個規(guī)�；i場豬大腸桿菌病進行了發(fā)病情況調(diào)查。結(jié)果顯示,8個規(guī)�；i場均有豬大腸桿菌病發(fā)生,平均發(fā)病率為39.54%,平均病死率為16.89%。發(fā)病主要以仔豬黃痢和仔豬白痢為主。(2)在呼倫貝爾地區(qū)8個規(guī)�；i場采集樣本136份,分離、鑒定出108株豬致病性大腸桿菌;對分離菌株采用平板凝集試驗進行了標準抗O抗原單因子血清型鑒定,結(jié)果顯示:分離菌株中除11株未鑒定出血清型外,其余97株鑒定為8種不同的血清型,分別為O8、O9、O60、O64、O115、O139、O149、O157,其中以O8、O9、O149、O157為優(yōu)勢血清型。(3)對分離、鑒定出的108株豬致病性大腸桿菌參照CLSI標準,采用MH肉湯微量稀釋法測定18種抗菌藥物的最小抑菌濃度,并分析比較了耐藥率及多重耐藥情況。結(jié)果表明氨芐西林、哌拉西林、四環(huán)素、呋喃妥因、氨曲南耐藥率最高,均在80%以上,而阿米卡星、頭孢西丁、頭孢噻肟耐藥率最低,均低于6%。分離菌株表現(xiàn)出不同程度的耐藥譜,共14種耐藥譜。最少耐藥的分離菌株可同時耐3種抗菌藥物,約占1.9%,耐藥最多的分離菌株可同時耐18種抗菌藥物,約占3.7%。分離菌株耐5種、6種、10種抗菌藥物所占的比例較高,分別為43.5%、13.0%、15.7%。(4)對136份樣本總菌及分離鑒定出的108株豬致病性大腸桿菌采用PCR技術(shù)檢測了四環(huán)素類耐藥基因、大環(huán)內(nèi)酯類耐藥基因、以及β-內(nèi)酰胺類耐藥基因,結(jié)果顯示:樣本總菌抽提DNA基因組檢出耐藥基因為tet A、tet B、tet C、erm B、erm F、bla CTX-M、bla TEM,檢出率分別為97.06%、94.12%、85.29%、22.06%、20.59%、56.62%、92.65%。致病性大腸桿菌分離株檢出tet A、tet B、erm B、bla CTX-M、bla TEM,檢出率分別為92.60%、64.81%、4.63%、43.52%、88.89%。(5)對136份樣本總菌及分離鑒定出的108株豬致病性大腸桿菌采用PCR技術(shù)進行了I型整合子整合酶(Int I)檢測,結(jié)果顯示:136份樣本總菌Int I的檢出率為95.59%,而致病性大腸桿菌分離株中Int I檢出率為80.56%。(6)選擇40頭健康三元雜交新生仔豬(日齡、體重相近),隨機抽樣分成A、B兩組,每組20頭,其中對照組為A組,試驗組為B組。對A組仔豬正常飼養(yǎng)管理,對B組仔豬應用EM原露配成的1:5稀釋液口服給藥,每天記錄A組與B組仔豬腹瀉情況和耗料量及體重情況。連續(xù)試驗35 d。結(jié)果顯示:1~21 d哺乳期B組腹瀉率顯著低于A組(P㩳0.05)。斷奶后22~35 d B組與A組平均日增重相比差異顯著(P㩳0.05),B組腹瀉率顯著低于A組(P㩳0.05),B組顯著降低了料重比(P㩳0.05)�？梢娢⑸鷳B(tài)制劑EM原露對仔豬腹瀉的預防有明顯的效果,且可提高飼料的利用率。(7)選擇40頭健康三元雜交新生仔豬(日齡、體重相近),隨機抽樣分成A、B、C、D共4組,每組10頭,A組為健康對照組。對B、C、D組采取人工誘發(fā)豬大腸桿菌感染,其中C、D兩組分別用硫酸阿米卡星注射液與乳酸環(huán)丙沙星注射液進行治療試驗,硫酸阿米卡星和乳酸環(huán)丙沙星分別以每千克體重7.5 mg和2.5 mg肌肉注射給藥,時間間隔為0 h、12 h、36 h、60 h共4次的給藥治療方案進行治療,B組為感染對照組只人工誘發(fā)豬大腸桿菌感染不進行治療。結(jié)果表明硫酸阿米卡星注射液與乳酸環(huán)丙沙星注射液對人工誘發(fā)豬大腸桿菌病療效顯著。綜上所述,呼倫貝爾地區(qū)規(guī)�；i場分離鑒定的108株豬致病性大腸桿菌具有O8、O9、O149、O157等8種不同的血清型,分離菌株對18種抗菌藥物均具有不同的耐藥性,且存在多重耐藥。檢測出136份樣本總菌及108株豬致病性大腸桿菌攜帶多種耐藥基因及I型整合子(Int I)。應用微生態(tài)制劑EM原露對仔豬腹瀉進行預防試驗,證明EM原露能有效預防仔豬腹瀉;硫酸阿米卡星與乳酸環(huán)丙沙星對大腸桿菌病療效顯著。本研究為獸醫(yī)臨床防治豬大腸桿菌病提供了參考依據(jù)。
【學位單位】：東北農(nóng)業(yè)大學
【學位級別】：博士
【學位年份】：2015
【中圖分類】：S858.28
【文章目錄】：
中文摘要
英文摘要
1 前言
    1.1 豬大腸桿菌病的流行病學與防治研究進展
        1.1.1 豬大腸桿菌病的流行病學研究進展
        1.1.2 豬大腸桿菌病的防治研究進展
    1.2 抗生素在獸醫(yī)臨床的應用
    1.3 大腸桿菌耐藥機制的研究進展
        1.3.1 大腸桿菌耐藥研究進展
        1.3.2 大腸桿菌耐藥機制研究進展
    1.4 研究的目的和意義
2 材料與方法
    2.1 材料
        2.1.1 主要儀器、試劑及藥物
        2.1.2 試驗動物
    2.2 方法
        2.2.1 大腸桿菌病發(fā)病情況調(diào)查
        2.2.2 大腸桿菌的分離鑒定
        2.2.3 大腸桿菌血清分型
        2.2.4 大腸桿菌體外藥物敏感性試驗
        2.2.5 耐藥基因的檢測
        2.2.6 I型整合子的檢測
        2.2.7 預防試驗
        2.2.8 治療試驗
        2.2.9 試驗數(shù)據(jù)分析與統(tǒng)計
3 結(jié)果與分析
    3.1 發(fā)病情況調(diào)查
        3.1.1 發(fā)病率與病死率
        3.1.2 發(fā)病癥狀、病理變化
        3.1.3 病原分離檢查結(jié)果
        3.1.4 環(huán)境因素調(diào)查結(jié)果
    3.2 大腸桿菌鑒定及致病性試驗
    3.3 血清型分布
    3.4 耐藥性檢測情況
        3.4.1 耐藥率分布
        3.4.2 耐藥譜檢測結(jié)果
    3.5 耐藥基因檢測結(jié)果
        3.5.1 樣本總菌DNA提取結(jié)果
        3.5.2 耐藥基因PCR引物特異性驗證
        3.5.3 樣本總菌耐藥基因檢測結(jié)果
        3.5.4 大腸桿菌耐藥基因檢測結(jié)果
    3.6 整合酶基因（INTI）檢測結(jié)果
        3.6.1 樣本總菌整合酶（INTI）基因PCR擴增結(jié)果
        3.6.2 大腸桿菌分離株整合酶（INTI）基因PCR擴增結(jié)果
    3.7 預防試驗
    3.8 治療試驗
4 討論
    4.1 豬大腸桿菌病各地區(qū)發(fā)病情況
    4.2 各地區(qū)豬大腸桿菌血清型檢測
    4.3 分離菌株耐藥性檢測
    4.4 分離菌株耐藥基因檢測
    4.5 I型整合子整合酶基因
    4.6 預防試驗
    4.7 治療試驗
5 結(jié)論
致謝
參考文獻
附錄
索引
攻讀博士學位期間發(fā)表的學術(shù)論文

【參考文獻】

相關(guān)期刊論文 前3條

1 朱群;王二柱;常娟;尹清強;;復合益生菌與金霉素配合抑制大腸桿菌生長的研究[J];安徽農(nóng)業(yè)科學;2015年06期

2 孫剛,賁百靈,孫廣力,張鳳強,張加勇,楊本;豬大腸桿菌病(本地株)多價滅活疫苗的應用[J];黑龍江畜牧獸醫(yī);2005年02期

3 謝家聲;李錦宇;王貴波;羅超應;;三種獸用中藥注射液后海穴注射治療仔豬黃痢的效果[J];中獸醫(yī)醫(yī)藥雜志;2014年04期

本文編號：2832905