水貂腹瀉病是嚴(yán)重危害我國水貂養(yǎng)殖業(yè)的重大疫病,死亡率高、經(jīng)濟損失大,病因復(fù)雜、缺乏有效的防控技術(shù),本研究旨在明確水調(diào)腹瀉的主要傳染性病原,提升水貂養(yǎng)殖場的腹瀉病防控能力。采用描述流行病學(xué)調(diào)查和實驗流行病學(xué)調(diào)查方法,揭示水貂腹瀉病的存在現(xiàn)狀和腹瀉病在水貂養(yǎng)殖場的三間分布情況,結(jié)合宏基因組測序技術(shù)對腹瀉樣品的腸道黏膜進行了病毒核酸和細菌16SDNA序列測定,明確水貂腹瀉的主要病原,對存在的主要病原犬瘟熱病毒(Caninedistempervirus,CDV)、偽狂犬病毒(Pseudorabies virus,PRV)、豬圓環(huán)病毒2型(Porcinecircovirus2,PCV2)和發(fā)熱伴血小板減少綜合癥病毒(Severe fever with thrombocytopenia syndrome bunyavirus,SFTSV)進行了分子生物學(xué)特點分析和流行病學(xué)調(diào)查,建立主要病原的診斷檢測方法,研制防制制品,為建立水貂腹瀉主要病原的生物安全防控技術(shù)體系提供技術(shù)支撐。結(jié)果表明:1.山東省水貂腹瀉病發(fā)病區(qū)域主要集中在威海、青島、濰坊、臨沂等地市,發(fā)病時間主要集中在6-9月份,以夏秋季多發(fā),占全年發(fā)病總數(shù)的90%以上,即發(fā)病期集中在水貂斷奶期至育成前期,冬毛成熟期貂和圍產(chǎn)期種貂發(fā)病率較低。2.對主要病原進行了檢出率統(tǒng)計,CDV為15.78%、水貂腸炎病毒(Mink enteritis virus,MEV)為 7.97%、星狀病毒(Astrovirus,AST)為 9.33%、PCV2 為3.85%和PRV為6.87%,大腸桿菌45.34%,鏈球菌屬34.67%,葡萄球菌屬24.19%,肺炎克雷伯氏菌20.19%,綠膿桿菌4.99%,其他細菌占8.39%。同時存在CDV與其他病毒的混合感染,其中CDV與MEV的混合感染率2.9%,與PCV2混合感染率為1.79%、與AST的混合感染率為1.82%,與PRV的混合感染率為1.1%。且病毒的檢出率存在明顯的地區(qū)差異。水貂存在新型布尼亞病毒的感染。3.宏基因組檢測發(fā)病水貂和健康水貂發(fā)現(xiàn)水貂常見的CDV和阿留申病毒,患病水貂還帶有水貂冠狀病毒、貓傳染性腹膜炎病毒、皰疹病毒、呼腸孤病毒等。發(fā)病水貂和健康水貂共有菌屬198種,其中有12種菌屬是常見的致病菌屬,氣單胞菌屬(Aeromonas)、假單胞菌(Pseudomonasaeruginosa)、檸檬酸桿菌(Citrobacter)、鏈球菌(Streptococcus)、志賀氏菌(Shigella)、葡萄球菌(Staphylococcus)、克雷伯氏菌(klebsiella)、埃希氏菌(E.coli)、坂崎腸桿菌(Bntorobater sakazakii)、不動桿菌屬(Acinetobacter)、氣球菌屬(Aerococcus)、變形桿菌屬(Proteus)。4.在喂食偽狂犬病死豬的水貂場水貂發(fā)病率為87%,病死率100%。分離獲得兩株P(guān)RV W-MPRV1和W-MPRV2,W-MPRV1在gD基因的3末端具有282bp的缺失。感染水貂的PRV分離毒株是PRV的一個毒株。且與對Bartha-K61疫苗有抗性的豬的PRV毒株在系統(tǒng)發(fā)育上密切相關(guān),提示疫苗抗性PRV早已在中國廣泛傳播。5.在腹瀉水貂死亡病例中分離到兩株P(guān)CV2,分別是MiSD-1和MiSD-2,MiSD-1 屬于 PCV2b-1 B 組,MiSD-2 屬于 PCV2b-1C 組。6.建立并標(biāo)準(zhǔn)化了熒光PCR方法檢測10病毒和7種細菌,包括水貂犬瘟熱病毒、細小病毒、冠狀病毒、輪狀病毒、星狀病毒、阿留申病毒、杯狀病毒、博卡病毒、圓環(huán)病毒、偽狂犬病毒,大腸桿菌、綠膿桿菌、克雷伯氏菌、嗜水氣單胞菌、沙門氏菌、檸檬酸桿菌、不動桿菌;建立了特異和敏感的雙重RT-PCR方法檢測犬瘟熱病毒與犬副流感病毒,其靈敏度(分別為1.2110-3ng/μL和1.5110-3ng/μL)遠遠高于目前的檢測方法(約為1ng/μL);研制了大腸桿菌、肺炎克雷伯氏菌和不動桿菌的三重?zé)晒舛縋CR檢測方法,其靈敏度、重復(fù)性及特異性均較好,可用于同時快速檢測三種病原菌。7.研發(fā)了防治水貂消化道疾病的中藥制劑,分別是“一種治療水貂消化道疾病的藥物”、“一種治療水貂大腸桿菌型消化道疾病的藥物”和“一種治療奇異變形桿菌型消化道疾病的藥物”。結(jié)論1.水貂腹瀉病主要發(fā)生在斷奶期至育成前期水貂,即每年的6-9月份,發(fā)病區(qū)域與養(yǎng)殖數(shù)量相關(guān),養(yǎng)殖數(shù)量集中的地區(qū)發(fā)病率高。生物安全意識淡薄,飼養(yǎng)管理水平相對滯后,是誘發(fā)各種疫病主要原因。2.通過流行病學(xué)調(diào)查、宏基因組的測定和相關(guān)主要病原的分子生物學(xué)研究,分析發(fā)現(xiàn)水貂腹瀉的主要病原是犬瘟熱病毒,在犬瘟熱病毒存在的情況下,水貂會繼發(fā)或混合感染其他病毒和細菌,如細小病毒性腸炎,大腸桿菌等。同時,存在其他病原如圓環(huán)病毒、偽狂犬病毒和SFTSV等的感染,甚至導(dǎo)致疫情的暴發(fā)流行。3.建立了水貂主要病原的診斷檢測方方法,并標(biāo)準(zhǔn)化,研制了防制制品,初步建立了水貂腹瀉病綜合防控技術(shù)體系,并取得良好的推廣應(yīng)用效果。
【學(xué)位單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：S858.92
【部分圖文】：

１．１水貂規(guī)�；B(yǎng)殖主產(chǎn)區(qū)分布逡逑對收集的１７０份調(diào)查問卷進行了統(tǒng)計分析。其中１０個地市為規(guī)�；B(yǎng)殖的逡逑主產(chǎn)區(qū)，見圖１－１，分別是青島、濰坊、威海、煙臺、臨巧、日照、聊城、濟逡逑寧、荷澤和濱州。逡逑注：藍色標(biāo)注是水貂主產(chǎn)區(qū)逡逑圖水貂主產(chǎn)區(qū)分布圖逡逑Ｆｉｇｕｒｅ邋１－１邋Ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ邋ｍａｐ邋ｏｆ邋ｔｈｅ邋ｍａｉｎ邋ｐｒｏｄｕｃｉｎｇ邋ａｒｅａｓ邋ｏｆ邋ｍｉｎｋ逡逑１．邋２水貂常見多發(fā)癥存在情況逡逑規(guī)�；躔B(yǎng)殖場中常見多發(fā)癥，見圖＾２，主要表現(xiàn)為肺炎、腹瀉和神經(jīng)逡逑癥狀。其中肺炎占６３％，神經(jīng)癥狀占１３％，腹瀉癥狀占２４％。逡逑２４逡逑

圖１－４邋２０Ｕ－２０１６年不同月你送檢疫病情況逡逑Ｆｉｇｕｒｅｌ－４邋Ｔｈｅ邋ｎｕｍｂｅｒ邋ｏｆ邋ｓａｍｐｌｅｓ邋ｒｅｃｅｉｖｅｄ邋ｅａｃｈ邋ｍｏｎ化邋ｆｒｏｍ邋２０１１邋化邋２０１６逡逑

貂疾病的診斷和治療帶來了一定困難。逡逑２．邋５．１各種細菌感染情況逡逑對１３，８５９份送檢病死水貂病料進行了細菌的檢測，結(jié)果見表１－５和圖１－逡逑８。統(tǒng)計表明細菌１＾＞１大腸桿菌、鏈球菌、葡萄球菌、綠肢桿菌和肺炎克雷伯氏菌逡逑感染為主。逡逑表１－５水貂細菌感染情況統(tǒng)計逡逑Ｔａｂｌｅｌ－５邋Ｂａｄｅｒｉａｌ邋ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ邋ｒａ（：ｅｓ邋ｏｆ邋ｍｉｎｋｓ逡逑細菌種類邐感染數(shù)量（共１３８日９例）邐感染率（％）邐逡逑大肪桿菌邐６，２８２邐４５．３４逡逑鏈球菌屬邐４，８０５邐３４．６７逡逑葡萄球菌屬邐３，邋：３５２邐２４．巧逡逑肺炎克雷伯氏菌邐２，７９８邐２０．１９逡逑綠胳桿菌邐６９１邐４．卵逡逑其他邐１，１６３邐８．３９逡逑

本文編號：2831309