Mx蛋白廣泛存在于生物體內,是一種由Ⅰ干擾素誘導的動力蛋白GTP酶,具有廣譜的抗病毒活性。編碼Mx蛋白的基因是由Lindenmann等在研究野生型A2G小鼠上發(fā)現(xiàn)的,因能抵抗粘液病毒而命名為Mx(myxovirus resistance)基因。目前,對于Mx基因的研究大多集中在人類、小鼠等哺乳動物上,而對其他動物如家禽的研究相對較少。本研究以鴿為研究對象,采用RT-PCR法成功克隆出了鴿Mx基因全長編碼區(qū),并對其進行了生物信息學分析;通過構建真核表達載體,轉染293T細胞,并成功在其中進行了表達;采用實時熒光定量PCR技術研究了青年鴿和童鴿Mx基因在不同組織中的表達規(guī)律以及不同品種鴿Mx基因在相同組織中的表達規(guī)律。主要的研究結果如下:1.鴿Mx基因的克隆及序列分析根據(jù)GenBank上公布的鴿基因組序列設計特異性引物,成功克隆出了 Mx基因編碼區(qū)全長。利用生物信息學等軟件分析其序列特征,鴿Mx基因編碼區(qū)全長2106bp,編碼701個氨基酸殘基,且具有脊椎動物共有的結構特征。預測其蛋白分子量大小為79.7KD,等電點為6.37。通過與GenBank中已登錄的脊椎動物Mx基因序列比對,核昔酸序列的同源性為54.0%-78.0%,氨基酸序列的同源性為41.3%-69.3%。鴿與塞內加爾鰨的核苷酸同源性最低,為54.0%;與鴻雁的核苷酸同源性最高,為78.0%。鴿與綿羊的氨基酸同源性最低,為41.3%;與野鴨的氨基酸同源性最高,為69.3%。2.鴿Mx基因真核表達載體的建立及表達根據(jù)克隆得到的Mx基因編碼區(qū)全長和表達載體序列設計含有酶位點的特異性引物,將目的基因克隆到真核表達載體pcDNA3.1(-)/myc-hisA中,并將構建成功的真核表達載體pcDNA3.1(-)/myc-hisA-Mx,轉染到 293T細胞中,經(jīng) RT-PCR和 Western blot檢測后,結果表明,Mx基因能夠成功的在293T細胞中表達。真核表達載體pcDNA3.1(-)/myc-hisA-Mx的成功構建和表達,為Mx蛋白生物學功能的進一步研究提供了堅實的基礎和保障。3.鴿Mx基因在不同組織中的表達規(guī)律采用實時熒光定量PCR技術研究了鴿Mx基因在不同組織(心臟、肝臟、脾臟、肺臟、腎臟、胰臟、小腸、肌肉)中的相對表達量。結果發(fā)現(xiàn):鴿Mx基因在青年鴿和童鴿中,在心臟和肌肉中幾乎不表達,在胰臟和脾臟中表達量較高;深王鴿和卡奴鴿在相同組織中的表達情況為兩種鴿的Mx基因在心臟、肝臟、肺臟、腎臟、胰臟以及肌肉組織中其表達量均無顯著性差異,只有脾臟和小腸的表達存在顯著性差異,其中深王鴿脾臟Mx基因表達量極顯著(p0.01)高于卡奴鴿脾臟表達量,而卡奴鴿的小腸Mx基因的表達量顯著(p0.05)高于深王鴿小腸表達量。
【學位單位】：福建農(nóng)林大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2018
【中圖分類】：S836
【部分圖文】：

逡逑將提取的鴿成纖維細胞總ＲＮＡ進行電泳檢測如圖２－１，可在２８Ｓ和１８Ｓ處逡逑看到條帶清晰，亮度比約為２：１的兩條條帶，用紫外分光光度計檢測ＲＮＡ的純逡逑度，其Ａ２６０／Ａ２８０＝１．８－２．０，說明提取的總ＲＮＡ完整性較好，無降解，可用于下逡逑一步實驗。逡逑灄：，１ＳＳ逡逑圖２－１鴿成纖}赴埽遙危戀纈就煎義希疲椋玨澹玻卞澹裕錚簦幔戾澹遙危鈴澹澹歟澹悖簦潁錚穡瑁錚潁澹螅椋簀澹錚駑澹穡椋紓澹錚鑠澹媯椋猓潁錚猓歟幔螅簦簀義希玻哺耄停潁遙危戀模遙裕校茫依┰鰣義嫌茫校錚歟ǎ桑海茫┯盞幾氤上宋赴�，提取细胞总的＿b危粒煤銑傻奶匾煨砸镥義轄校遙裕校茫遙┰霾錁保デ碇悄旱纈競�，宰曐E玻保埃洞τ幸幻髁戀睦┰鰣義咸醮ㄍ跡玻玻�，与预圃懩目的条带大小蠂葵。辶x希卞澹插澹桑鄭卞義稀鰹靛義現(xiàn)

本文編號：2830417