Mx蛋白廣泛存在于生物體內(nèi),是一種由Ⅰ干擾素誘導(dǎo)的動(dòng)力蛋白GTP酶,具有廣譜的抗病毒活性。編碼Mx蛋白的基因是由Lindenmann等在研究野生型A2G小鼠上發(fā)現(xiàn)的,因能抵抗粘液病毒而命名為Mx(myxovirus resistance)基因。目前,對(duì)于Mx基因的研究大多集中在人類(lèi)、小鼠等哺乳動(dòng)物上,而對(duì)其他動(dòng)物如家禽的研究相對(duì)較少。本研究以鴿為研究對(duì)象,采用RT-PCR法成功克隆出了鴿M(mǎn)x基因全長(zhǎng)編碼區(qū),并對(duì)其進(jìn)行了生物信息學(xué)分析;通過(guò)構(gòu)建真核表達(dá)載體,轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞,并成功在其中進(jìn)行了表達(dá);采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)研究了青年鴿和童鴿M(mǎn)x基因在不同組織中的表達(dá)規(guī)律以及不同品種鴿M(mǎn)x基因在相同組織中的表達(dá)規(guī)律。主要的研究結(jié)果如下:1.鴿M(mǎn)x基因的克隆及序列分析根據(jù)GenBank上公布的鴿基因組序列設(shè)計(jì)特異性引物,成功克隆出了 Mx基因編碼區(qū)全長(zhǎng)。利用生物信息學(xué)等軟件分析其序列特征,鴿M(mǎn)x基因編碼區(qū)全長(zhǎng)2106bp,編碼701個(gè)氨基酸殘基,且具有脊椎動(dòng)物共有的結(jié)構(gòu)特征。預(yù)測(cè)其蛋白分子量大小為79.7KD,等電點(diǎn)為6.37。通過(guò)與GenBank中已登錄的脊椎動(dòng)物Mx基因序列比對(duì),核昔酸序列的同源性為54.0%-78.0%,氨基酸序列的同源性為41.3%-69.3%。鴿與塞內(nèi)加爾鰨的核苷酸同源性最低,為54.0%;與鴻雁的核苷酸同源性最高,為78.0%。鴿與綿羊的氨基酸同源性最低,為41.3%;與野鴨的氨基酸同源性最高,為69.3%。2.鴿M(mǎn)x基因真核表達(dá)載體的建立及表達(dá)根據(jù)克隆得到的Mx基因編碼區(qū)全長(zhǎng)和表達(dá)載體序列設(shè)計(jì)含有酶位點(diǎn)的特異性引物,將目的基因克隆到真核表達(dá)載體pcDNA3.1(-)/myc-hisA中,并將構(gòu)建成功的真核表達(dá)載體pcDNA3.1(-)/myc-hisA-Mx,轉(zhuǎn)染到 293T細(xì)胞中,經(jīng) RT-PCR和 Western blot檢測(cè)后,結(jié)果表明,Mx基因能夠成功的在293T細(xì)胞中表達(dá)。真核表達(dá)載體pcDNA3.1(-)/myc-hisA-Mx的成功構(gòu)建和表達(dá),為Mx蛋白生物學(xué)功能的進(jìn)一步研究提供了堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ)和保障。3.鴿M(mǎn)x基因在不同組織中的表達(dá)規(guī)律采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)研究了鴿M(mǎn)x基因在不同組織(心臟、肝臟、脾臟、肺臟、腎臟、胰臟、小腸、肌肉)中的相對(duì)表達(dá)量。結(jié)果發(fā)現(xiàn):鴿M(mǎn)x基因在青年鴿和童鴿中,在心臟和肌肉中幾乎不表達(dá),在胰臟和脾臟中表達(dá)量較高;深王鴿和卡奴鴿在相同組織中的表達(dá)情況為兩種鴿的Mx基因在心臟、肝臟、肺臟、腎臟、胰臟以及肌肉組織中其表達(dá)量均無(wú)顯著性差異,只有脾臟和小腸的表達(dá)存在顯著性差異,其中深王鴿脾臟Mx基因表達(dá)量極顯著(p0.01)高于卡奴鴿脾臟表達(dá)量,而卡奴鴿的小腸Mx基因的表達(dá)量顯著(p0.05)高于深王鴿小腸表達(dá)量。
【學(xué)位單位】：福建農(nóng)林大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類(lèi)】：S836
【部分圖文】：

逡逑將提取的鴿成纖維細(xì)胞總ＲＮＡ進(jìn)行電泳檢測(cè)如圖２－１，可在２８Ｓ和１８Ｓ處逡逑看到條帶清晰，亮度比約為２：１的兩條條帶，用紫外分光光度計(jì)檢測(cè)ＲＮＡ的純逡逑度，其Ａ２６０／Ａ２８０＝１．８－２．０，說(shuō)明提取的總ＲＮＡ完整性較好，無(wú)降解，可用于下逡逑一步實(shí)驗(yàn)。逡逑灄：，１ＳＳ逡逑圖２－１鴿成纖}赴埽遙危戀纈就煎義希疲椋玨澹玻卞澹裕錚簦幔戾澹遙危鈴澹澹歟澹悖簦潁錚穡瑁錚潁澹螅椋簀澹錚駑澹穡椋紓澹錚鑠澹媯椋猓潁錚猓歟幔螅簦簀義希玻哺耄停潁遙危戀模遙裕校茫依┰鰣義嫌茫校錚歟ǎ桑海茫┯盞幾氤上宋赴崛∠赴艿模遙危�，用恒娚的特异性引物辶x轄校遙裕校茫遙┰霾錁保デ碇悄旱纈競(jìng)螅讜跡玻保埃洞τ幸幻髁戀睦┰鰣義咸醮ㄍ跡玻玻�，与预圃懩目的条带大小蠂葵。辶x希卞澹插澹桑鄭卞義稀鰹靛義現(xiàn)

本文編號(hào)：2830417