瘦素(leptin)是一種由脂肪組織分泌的蛋白,其主要功能是調(diào)控體重和能量的平衡,還通過內(nèi)分泌、自分泌或旁分泌方式對機體外周組織或器官的功能發(fā)揮廣泛的生物調(diào)節(jié)作用。已發(fā)現(xiàn)瘦素可以通過細胞周期和MyoD來調(diào)控細胞增殖,還可通過降低CK的活性和減少肌細胞生成蛋白的量而抑制細胞分化。另外,在豬成肌細胞的研究中瘦素可以通過PI3K/Akt/mTOR、AMPK、JAK/STAT和MEK信號通路調(diào)控細胞發(fā)育。但是,瘦素對鴨成肌細胞的作用一直缺乏研究。本實驗以鴨骨骼肌成肌細胞為研究對象,采用離體培養(yǎng)成肌細胞和熒光定量PCR等技術(shù)與方法,研究外源性瘦素對鴨成肌細胞增殖與分化關(guān)鍵基因的表達影響,并探究其可能的調(diào)控通路。結(jié)果表明：1、低濃度瘦素(1ng/mL)對鴨成肌細胞具有促進增殖的作用,并且促進作用不會隨著時間的增加而保持,長時間的處理會抑制增殖。高濃度瘦素(10ng/mL. 100ng/mL)對鴨成肌細胞增殖沒有促進作用。2、不同濃度瘦素均抑制鴨成肌細胞關(guān)鍵基因的表達,并且隨著處理時間的增加抑制效果逐漸加強。3、抑制PI3K/Akt/mTOR信號通路后,瘦素對鴨成肌細胞增殖關(guān)鍵基因的促進作用發(fā)生改變,表明瘦素對成肌細胞的增殖調(diào)控與PI3K/Akt/mTOR信號通路相關(guān)聯(lián)。當(dāng)抑制PI3K/Akt/mTOR信號通路后,瘦素對成肌細胞分化的抑制作用降低,但是抑制作用沒有消失,說明瘦素通過PI3K/Akt/mTOR信號通路調(diào)控鴨成肌細胞的分化關(guān)鍵基因,但PI3K/Akt/mTOR信號通路并不是瘦素抑制成肌細胞分化的唯一途徑。4、抑制AMPK后,瘦素促進成肌細胞增殖及抑制成肌細胞分化的效果均發(fā)生了顯著變化,這表明瘦素的作用可能主要是通過AMPK實現(xiàn)的。
【學(xué)位單位】：四川農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2015
【中圖分類】：S834
【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
主要符號說明
前言
1 文獻綜述
    1.1 骨骼肌及其發(fā)育調(diào)控
        1.1.1 骨骼肌的結(jié)構(gòu)
        1.1.2 骨骼肌發(fā)育的基本原理
        1.1.3 肌管形成的轉(zhuǎn)錄調(diào)控
        1.1.4 肌纖維的增長和增大
        1.1.5 肌肉發(fā)育相關(guān)基因
    1.2 瘦素(Leptin)及其功能
        1.2.1 瘦素的發(fā)現(xiàn)
        1.2.2 瘦素的結(jié)構(gòu)與定位
        1.2.3 瘦素的功能
        1.2.4 瘦素的信號通路
    1.3 本研究的目的與意義
2 材料與方法
    2.1 試驗材料
        2.1.1 樣品來源
        2.1.2 主要儀器設(shè)備
        2.1.3 主要試劑及配制
    2.2 試驗方法
        2.2.1 鴨成肌細胞的培養(yǎng)
        2.2.2 CCK檢測細胞活性
        2.2.3 熒光定量PCR(qRT-PCR)
        2.2.4 數(shù)據(jù)分析
3 結(jié)果與分析
    3.1 鴨成肌細胞的離體培養(yǎng)及RNA的提取
    3.2 實時熒光定量PCR條件的確定
    3.3 不同濃度Leptin對鴨成肌細胞增殖的影響
    3.4 Leptin對鴨成肌細胞增殖關(guān)鍵基因表達影響
    3.5 Leptin對成肌細胞分化關(guān)鍵基因表達影響
    3.6 抑制PI3K/Akt/mTOR與AMPK后Leptin對鴨成肌細胞增殖的影響
    3.7 抑制PI3K/Akt/mTOR與AMPK后Leptin對鴨成肌細胞分化的影響
4 討論
    4.1 Leptin對成肌細胞增殖的影響
    4.2 Leptin對成肌細胞分化的影響
    4.3 PI3K/Akt/mTOR通路在Leptin影響鴨成肌細胞增殖分化中的作用
    4.4 AMPK在Leptin影響鴨成肌細胞增殖分化中的作用
5 結(jié)論
參考文獻
致謝

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本文編號：2830381