發(fā)布時(shí)間：2020-09-29 20:33

　　 骨關(guān)節(jié)炎(OA)是常見(jiàn)的老齡動(dòng)物多發(fā)的關(guān)節(jié)疾病,嚴(yán)重影響動(dòng)物正常關(guān)節(jié)功能并使動(dòng)物生活質(zhì)量降低。臨床上主要治療方法包括手術(shù)置換、非甾體類抗炎藥(NSAID)以及改善飼養(yǎng)管理,但是每種治療方法都具有各自的局限性,所以急需尋找副作用小、能長(zhǎng)期使用的藥物。植物藥逐漸成為近些年來(lái)的研究熱點(diǎn)。L-茶氨酸(L-Theanine)是茶葉中的非蛋白氨基酸,具有抗炎、抗凋亡以及抗腫瘤等多種生物活性。基于此,本試驗(yàn)使用前十字韌帶切斷術(shù)(ACLT)造模的OA大鼠,將L-Theanine與非甾體類抗炎藥(塞來(lái)昔布)進(jìn)行對(duì)比,探究其對(duì)OA的保護(hù)效果,同時(shí)通過(guò)對(duì)患犬臨床治療試驗(yàn),觀察其治療效果。試驗(yàn)分為在體試驗(yàn)、離體試驗(yàn)和臨床治療效果觀察三部分。在體試驗(yàn)用ACLT造模,分為假手術(shù)組、模型組、L-Theanine治療組(分低、中、高三個(gè)劑量)以及塞來(lái)昔布組。空白組和模型組造模之后第二天開(kāi)始每天灌服1 mL生理鹽水,治療組灌胃給予L-Theanine(50mg/kg、100 mg/kg、200 mg/kg)持續(xù)六周;塞來(lái)昔布組于第四周開(kāi)始灌服塞來(lái)昔布(2.86mg/kg),直到第六周。所有動(dòng)物于6周后脫頸處死,取血清及關(guān)節(jié)軟骨用于檢測(cè)iNOS、NO、COX-2和PGE-2的含量;取脛骨用甲醛固定,進(jìn)行HE染色及番紅O-固綠染色;離體試驗(yàn)使用二代軟骨細(xì)胞,試驗(yàn)分為五組:1)空白對(duì)照組2)IL-1β模型組:10 ng/mL IL-1β處理24 h;3)試驗(yàn)組(分三個(gè)劑量)10 ng/mL IL-1β預(yù)處理24 h后加入50μM、100μM、200μM L-Theanine共同作用24 h。Western Blot檢測(cè):COX-2、iNOS、MMP-3、MMP-13蛋白表達(dá)水平,q-PCR檢測(cè)MMP-3、MMP-13,試劑盒檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)液上清中NO、PGE-2含量;臨床治療效果只觀察患犬癥狀改善情況。在體試驗(yàn)結(jié)果顯示造模組相對(duì)于空白組iNOS、NO、COX-2和PGE-2的含量升高,L-Theanine治療組與造模組相比,這四個(gè)指標(biāo)的表達(dá)都減少,且高劑量組(200 mg/kg)與塞來(lái)昔布組相比無(wú)顯著差異;組織切片可以觀察到造模組與假手術(shù)組相比軟骨破壞較嚴(yán)重,L-Theanine治療組和塞來(lái)昔布給藥組的軟骨破壞程度均較輕。離體試驗(yàn)結(jié)果顯示MMP-3、MMP-13、COX-2、iNOS四種蛋白造模組比空白組表達(dá)顯著增加,而L-Theanine干預(yù)組顯示蛋白表達(dá)量下降,呈劑量依賴性;細(xì)胞培養(yǎng)上清中NO、PGE-2的含量造模組與空白組相比顯著增加,L-Theanine治療組其含量明顯減少;臨床療效觀察顯示,L-Theanine能夠緩解犬骨關(guān)節(jié)炎引起的關(guān)節(jié)敏感、步態(tài)強(qiáng)拘以及姿勢(shì)異常,改善患犬生活質(zhì)量。試驗(yàn)結(jié)果表明,L-Theanine可以減輕ACLT誘導(dǎo)的大鼠OA模型的炎癥反應(yīng),而且可以減輕IL-1β刺激后的軟骨細(xì)胞的基質(zhì)降解以及降低炎癥因子的表達(dá),從而緩解骨關(guān)節(jié)炎的癥狀。
【學(xué)位單位】：東北農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：S857.16
【部分圖文】：

L-茶氨酸-茶氨酸（又名谷氨酸γ-乙基酰胺，英文名 L-theanine）是茶葉中的主要氨基酸，14N2O3。它最早從綠茶中分離得到，占茶葉干重的 2%，占茶葉中游離氨基酸總]。與其他天然α-氨基酸類似，茶氨酸具有不對(duì)稱碳，因此理論上具有存在 D 型，自然界中存在的茶氨酸大多為 L 型（圖 1-1），其結(jié)構(gòu)與 L-谷氨酸相似。同是一種安全性高、毒性很小的物質(zhì)，在毒性試驗(yàn)中并沒(méi)有發(fā)現(xiàn)其有毒性，因此已將其確認(rèn)為一種安全物質(zhì)，使用時(shí)不作限量規(guī)定[63]。L-茶氨酸具有多種生物炎作用、抗氧化作用、抗腫瘤、神經(jīng)保護(hù)作用以及免疫調(diào)節(jié)作用和保護(hù)肝臟的有研究表明 L-茶氨酸可以通過(guò)減少活性氧產(chǎn)生和抑制 NF-κB 通路來(lái)減輕β淀粉神經(jīng)中毒；也能抑制白血病的發(fā)展和肺癌細(xì)胞[65]；也可抑制 EGFR/Met-Akt/N來(lái)減緩宮頸癌細(xì)胞的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移[66]，且茶氨酸本身無(wú)細(xì)胞毒性和小鼠毒性[67]；L-茶氨酸可抑制過(guò)敏性哮喘的氣道炎癥使 NF-κB、MMP-9 表達(dá)顯著下調(diào)[68]；酸通過(guò)降低由 IL-1β和 TNF-α刺激產(chǎn)生的 COX-2、iNOS、細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白（cP）的表達(dá)抑制 CCL4 誘導(dǎo)的小鼠急性肝損傷[69]。因此，抑制 NF-κB 信號(hào)通路 OA 的治療。以上研究暗示 L-茶氨酸可能對(duì) OA 炎癥反應(yīng)以及基質(zhì)降解具有一。

東北農(nóng)業(yè)大學(xué)獸醫(yī)碩士學(xué)位論文3 結(jié)果與分析3.1 在體試驗(yàn)結(jié)果3.1.1 軟骨表面眼觀變化如圖 3-1，假手術(shù)組（Sham 組）關(guān)節(jié)軟骨在造模 6 周后關(guān)節(jié)表面光滑、脛骨平臺(tái)內(nèi)、外側(cè)均無(wú)磨損出現(xiàn)；手術(shù)組（ACLT 組）可見(jiàn)關(guān)節(jié)軟骨表面粗糙，內(nèi)側(cè)脛骨平臺(tái)出現(xiàn)磨損，色澤變暗、邊緣不規(guī)整、出現(xiàn)軟骨缺損及變�。籆elecoxib（塞來(lái)昔布）治療組軟骨面損傷較ACLT 組輕，軟骨表面有不規(guī)則顆粒樣磨損；L-茶氨酸治療組（LDL、MDL 及 HDL）軟骨表面眼觀各組差異不明顯，都出現(xiàn)軟骨磨損、表面不光滑、關(guān)節(jié)光澤變暗。

圖 3-3 番紅 O-固綠染色切片（×100）細(xì)胞外基質(zhì)中蛋白多糖含量的變化Fig. 3-3 Changes in proteoglycan content in Extracellular Matrix in Safranin O-Fast Green StainedSlice (×100)3.1.4 血清中 COX-2、PGE-2 含量的變化如圖 3-4（A、B）所示，圖（A）血清中 COX-2 的含量造模組相對(duì)于空白組顯著增加；L-Theanine 低劑量給藥組與造模組相比顯著降低，中劑量組與高劑量組相比于模型組有極顯著差異，COX-2 含量減少；塞來(lái)昔布給藥組與模型組相比顯著降低，與 L-Theanine 高劑量組相比差異不顯著。圖（B）所示血清中 PGE-2 含量模型組相對(duì)于空白組顯著上升；低劑量給藥組與模型組相比差異不顯著，中劑量和高劑量給藥組與模型組相比極顯著降低，塞來(lái)昔布給藥組與模型組相比差異極顯著，PGE-2 含量明顯減少。塞來(lái)昔布組與 L-Theanine 給藥組相比沒(méi)有顯著差異。3.1.5 軟骨組織中 NO、iNOS 含量的變化如圖 3-4（C、D）所示，圖（C）顯示軟骨組織中模型組 iNOS 的活力顯著升高，L-Theanine

【參考文獻(xiàn)】

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1 郭玉冬;王宸;魏波;;骨關(guān)節(jié)炎動(dòng)物模型研究進(jìn)展[J];東南大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2012年05期

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1 許偉朋;TNF-α、PGE2和MMP-9在膝骨關(guān)節(jié)炎滑膜中的表達(dá)及意義[D];鄭州大學(xué);2012年

本文編號(hào)：2830222