研究目的:犬乳腺腫瘤是母犬最常見的腫瘤,其中約50%是惡性的,它是小動物臨床重要疾病之一。采用常規(guī)腫瘤治療方法(手術、化療和放療或他們的組合)后,高風險乳腺癌患犬仍會死于腫瘤復發(fā)和轉移。與人類患者一樣,腫瘤中存在腫瘤干細胞導致這一臨床現象。鹽霉素(SAL),是從白色鏈霉菌(Streptomycesalbus)培養(yǎng)液中提取的聚醚類抗生素,作為抗球蟲藥廣泛的用于經濟動物。目前已證明鹽霉素可以在體外體內抑制多種人類腫瘤。本研究著眼于鹽霉素對犬乳腺癌細胞系及其癌干細胞的抗癌作用。研究方法:1、使用無血清懸浮培養(yǎng)技術從母代細胞CMT7364和CIPp中獲得微球體CMT7364S和CIPpS。從CD44+CD24-/low表型,多柔吡星和順鉑的半數致死量IC50,細胞集落形成能力,侵襲能力,β-catenin、CyclinDl、CD44和Oct-4蛋白表達量和異體成瘤能力等方面,分析微球體的特性。2、通過體外試驗,評估鹽霉素對于CMT7364和CIPp細胞活力、凋亡細胞比例、細胞周期的影響;通過體內試驗評估鹽霉素對CMT7364異體成瘤、肺部轉移及β-catenin和Cyclin D1在腫瘤組織中的表達的影響,研究鹽霉素對于犬乳腺癌的抑制作用。3、使用梯度濃度的鹽霉素處理CMT7364S和CIPpS,觀察鹽霉素對細胞活力、CD44+CD24-/loW表型、細胞集落形成能力、侵襲能力、微球體形成能力及β-catenin、CyclinDl及Oct-4蛋白表達量的影響,評估鹽霉素對微球體干細胞特性的影響。研究結果:1、微球體CMT7364S和CIPpS具有癌干細胞特性。CMT7364S和CIPpS以CD44+CD24-/low表型細胞為主。與CMT7364和CIPp相比,CMT7364S和CIPpS具有更高的多柔吡星和順鉑IC50,更強細胞集落形成能力、侵襲能力,干細胞標記蛋白CD44、Oct-4及Wnt信號通路相關蛋白β-catenin和Cyclin D1表達量更高。與CMT7364相比,CMT7364S的異體成瘤能力更強,形成的肺轉移灶更多。2、在體外鹽霉素對CMT7364和CIPp的增殖抑制呈現時間-劑量依賴性,其作用機制可能與增加CMT7364和CIPp的凋亡細胞比例,及G0/G1期細胞比例有關;在體內霉素可以抑制CMT7364在BALB/c小鼠的生長和肺部轉移,降低Wnt/β-catenin信號通路相關蛋白β-catenin和Cyclin D1的表達在腫瘤組織中的表達。3、鹽霉素抑制CMT7364S和CIPpS的癌干細胞能力。CMT7364S與CMT7364及CIPpS與CIPp的鹽霉素48 h IC50無差異;暴露于不同濃度的鹽霉素可以不同程度的抑制CMT7364S和CIPpS的微球體形、細胞集落形成及侵襲能力。與此同時,鹽霉素還可以降低CMT7364S和CIPpS中CD44+ CD24-/loW表型細胞比例,抑制Wnt/β-catenin信號通路相關蛋白β-catenin和Cyclin D1和干細胞標記CD44和Oct-4的表達。結論:犬乳腺癌細胞中存在犬乳腺癌干細胞。鹽霉素通過抑制犬乳腺癌細胞增殖、阻滯細胞周期、增加細胞凋亡、干擾Wnt/β-catenin信號通路、抑制犬乳腺癌細胞侵襲和轉移、抑制犬乳腺癌干細胞等多種機制發(fā)揮抗癌作用。鹽霉素有望成為治療犬乳腺癌的化療藥物。
【學位單位】：中國農業(yè)大學
【學位級別】：博士
【學位年份】：2018
【中圖分類】：S858.292
【部分圖文】：

鹽霉素作為新發(fā)現的抗腫瘤藥物，其抗腫瘤機制仍在研究中。目前發(fā)現鹽霉素可以通過激活逡逑非正常細胞死亡途徑，干擾Ｗｎｔ／ｐ－ｃａｔｅｎｉｎ、Ａｋｔ／ＮＦ－ＫＢ等信號通路；增加ＤＮＡ損傷；組織細胞逡逑周期等多種途徑抑制腫瘤細胞及腫瘤干細胞（圖１－４）邋［Ｉ２Ｎ１２３］。逡逑１０逡逑

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本文編號：2828223