口蹄疫是由口蹄疫病毒引起的偶蹄類動(dòng)物烈性傳染病�？谔阋卟《�(FMDV)屬于小RNA病毒科口瘡病毒屬,除了主要由病毒蛋白(VP)1至4的結(jié)構(gòu)蛋白(SP)組成的病毒衣殼外,還包括L、2A、2B、2C、3A、3B、3C和3D以及它們的前體等非結(jié)構(gòu)蛋白(NSP)。NSP參與病毒的復(fù)制、多聚蛋白的裂解和病毒顆粒的組裝過程。動(dòng)物感染FMDV后,體內(nèi)既能產(chǎn)生SP抗體,又能產(chǎn)生NSP抗體,而疫苗免疫動(dòng)物主要誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生SP抗體,因此OIE推薦以NSP為抗原檢測(cè)動(dòng)物體內(nèi)的NSP抗體區(qū)分FMDV感染動(dòng)物和注射疫苗動(dòng)物已經(jīng)得到了廣泛認(rèn)可,最早檢測(cè)到NSP抗體的時(shí)間對(duì)于識(shí)別感染動(dòng)物,盡快采取防治措施,有效防控口蹄疫具有舉足輕重的意義。NSP可與血清蛋白發(fā)生互作反應(yīng),互作體也可能是由靶標(biāo)蛋白調(diào)節(jié)的底物或分子組分等組成的,識(shí)別給定蛋白質(zhì)的互作蛋白能夠提供關(guān)于蛋白質(zhì)功能及其涉及的分子機(jī)制的線索。目前,市面上的FMDV診斷試劑盒雜亂,動(dòng)物感染FMD后免疫球蛋白最早出現(xiàn)時(shí)間還不確定,NSP與豬血清互作蛋白還不清楚。本文通過三種不同廠家的試劑盒對(duì)人工感染FMDV的豬血清進(jìn)行NSP抗體IgA、IgM、IgG含量的檢測(cè),得出不同免疫球蛋白最早出現(xiàn)時(shí)間以及不同時(shí)間點(diǎn)的含量變化;以3AB為誘餌蛋白,通過免疫共沉淀聯(lián)合質(zhì)譜技術(shù)對(duì)3AB與FMDV NSP陽(yáng)性豬血清的互作蛋白進(jìn)行鑒定,并對(duì)其蛋白功能進(jìn)行了初步分析。結(jié)果顯示,篩選出最適合FMDV NSP抗體檢測(cè)的試劑盒A,并發(fā)現(xiàn)FMDV NSP IgG最早于第5天出現(xiàn),IgA、IgM含量在FMDV感染3d后開始逐漸上升。通過免疫共沉淀聯(lián)合質(zhì)譜技術(shù)鑒定到3AB與FMDV NSP陽(yáng)性豬血清的互作蛋白有81個(gè),通過GO分析發(fā)現(xiàn)他們主要參與了對(duì)刺激的應(yīng)答反應(yīng)、生物調(diào)節(jié)、免疫系統(tǒng)反應(yīng)、調(diào)節(jié)生物過程、細(xì)胞過程等重要生物學(xué)過程,集中分布在細(xì)胞外區(qū)域、細(xì)胞器、細(xì)胞外區(qū)域部分、細(xì)胞以及細(xì)胞的某一部分,具有結(jié)合、結(jié)構(gòu)分子活動(dòng)、分子功能調(diào)節(jié)因子、催化反應(yīng)、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)活動(dòng)等分子功能。通過KEGG Pathway分析,發(fā)現(xiàn)篩選出的差異蛋白主要參與金黃色葡萄球菌感染(Staphylococcus aureus infection)、PI3K-Akt信號(hào)通路(PI3K-Akt signaling pathway)等信號(hào)通路。本研究通過人工感染FMDV的豬血清進(jìn)行NSP抗體,得出不同免疫球蛋白最早出現(xiàn)時(shí)間以及不同時(shí)間點(diǎn)的含量變化,為進(jìn)一步研究口蹄疫病毒復(fù)制和FMDV NSP抗體最早出現(xiàn)時(shí)間提供一定的科學(xué)依據(jù)。并通過免疫共沉淀聯(lián)合質(zhì)譜技術(shù)獲得了與非結(jié)構(gòu)蛋白互作的蛋白,為FMDV感染生物標(biāo)識(shí)物的發(fā)現(xiàn)奠定基礎(chǔ)。
【學(xué)位單位】：甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：S852.65
【部分圖文】：

圖 2-1.A 試劑盒檢測(cè)感染 FMDV 豬 IgG 抗體Fig.2-1 Kit A detection the FMDV IgG antibody of swine after infected(橫坐標(biāo)為各個(gè)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物攻毒后不同天數(shù)，縱坐標(biāo)為阻斷率，50 以上陽(yáng)性，50 以下為陰性 ）(The graph's horizontal axis shows the different days after inculcated of each pigs,and the vertical axisshows the blocking rate,when greater than 50 is positive,and less than 50 is negative.)

圖 2-1.A 試劑盒檢測(cè)感染 FMDV 豬 IgG 抗體Fig.2-1 Kit A detection the FMDV IgG antibody of swine after infected(橫坐標(biāo)為各個(gè)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物攻毒后不同天數(shù)，縱坐標(biāo)為阻斷率，50 以上陽(yáng)性，50 以下為陰性 ）(The graph's horizontal axis shows the different days after inculcated of each pigs,and the vertical axisshows the blocking rate,when greater than 50 is positive,and less than 50 is negative.)

甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué) 2018 屆碩士學(xué)位論文 第二章人工感染 FMDV 豬 NSP 抗體測(cè)定B 試劑盒所檢測(cè)到的試驗(yàn)組和對(duì)照組的動(dòng)物血清抗體水平整體變化趨勢(shì)不及 A試劑盒一致，B 試劑盒所能最早檢測(cè)到的抗體陽(yáng)性在第 5d，為 P0067 與 P1473（這與 A 試劑盒一致）及 P1625（圖 2-2）。個(gè)別動(dòng)物表現(xiàn)出相反的趨勢(shì)，這可能與個(gè)體差異相關(guān)。C 試劑盒所檢測(cè)到的試驗(yàn)組和對(duì)照組的動(dòng)物血清抗體水平整體變化趨勢(shì)不及 A試劑盒與 B 試劑盒一致，除對(duì)照組外，C 試劑盒只檢測(cè)到一份樣品 P69 為陽(yáng)性（圖2-3），這與 A 試劑盒、B 試劑盒完全不同。

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本文編號(hào)：2826634