目的:血竭具有止血生肌的功效,血竭素是從血竭中提取出來的一種黃酮類化合物,由于其以單體形式存在時很不穩(wěn)定,易被還原,因此常以血竭素高氯酸鹽的方式存在。本試驗(yàn)通過血竭素高氯酸鹽軟膏對傷口及其周圍組織應(yīng)用進(jìn)行處理,檢測膠原蛋白及其相關(guān)因子含量變化,探究血竭素高氯酸鹽(Dracorhodin Perchlorate,DP)對膠原蛋白及其相關(guān)因子的調(diào)節(jié)作用。方法:試驗(yàn)選取雄性SD大鼠40只,體重220 g左右。SD大鼠隨機(jī)分為模型對照組,DP治療低,中,高劑量組。將大鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)7天,并在第7天禁食12小時。將大鼠按0.35mL/100 g的劑量用10%水合氯醛麻醉,然后將大鼠背部剃毛并用70%酒精消毒。使用直徑為1 cm的無菌組織打孔器在每只大鼠背部沖壓兩個全層皮膚創(chuàng)口,打孔后使用碘酊對創(chuàng)口消毒。待觀察大鼠蘇醒后,進(jìn)行常規(guī)飼養(yǎng)。用不同濃度的DP軟膏處理每組的傷口。低劑量組軟膏的DP含量為50μg/mL,中劑量組軟膏的DP含量為100μg/mL。高劑量組軟膏的DP含量為200μg/mL,模型對照組大鼠未進(jìn)行處理。使傷口自然愈合。在造模前和造模后第3天,第7天,第10天和第14天取大鼠皮膚的傷口組織。免疫組化法檢測大鼠愈合皮膚組織中TGF-β1,MMP-2,MMP-9,TIMP-1和TIMP-2的表達(dá)和分布。ELISA法檢測大鼠愈合皮膚組織中IL-1β,COX-2和PDGF的含量。Western Blot法檢測愈合皮膚組織中TGF-β1,Smad2/3,p-Smad2/3,MMP-2,MMP-9,TIMP-1,TIMP-2,collagenⅠ和collagenⅢ的表達(dá)的變化,RT-PCR法檢測愈合皮膚組織中MMP-2,MMP-9,TIMP-1,TIMP-2,collagenⅠ和collagenⅢ的mRNA表達(dá)量的變化。結(jié)果:與模型對照組相比,在0~14 d時,DP軟膏可顯著提升大鼠愈合皮膚組織中collagenⅠ蛋白及mRNA的表達(dá)量,14 d時表達(dá)量達(dá)到高峰;0~7 d時,DP軟膏治療組collagenⅢ的蛋白及mRNA表達(dá)量提高,7 d時表達(dá)量達(dá)到高峰,collagenⅢ蛋白及mRNA表達(dá)水平在7~14d降低,表達(dá)水平在14 d時基本恢復(fù)正常;在0~14 d時,DP軟膏可顯著提升大鼠愈合皮膚組織中TGF-β1、Smad2/3蛋白的表達(dá)量,并顯著提高Smad2/3蛋白的磷酸化水平;在0~14 d時,DP軟膏可顯著降低大鼠愈合皮膚組織中IL-1β、COX-2的含量并提高PDGF的含量;0~3d時,DP軟膏治療組MMP-9、TIMP-1蛋白及其mRNA的表達(dá)量均顯著提高,且在第3 d時表達(dá)量達(dá)到最大值、MMP-9/TIMP-1的比值也為最大值,3~14 d時MMP-9、TIMP-1蛋白及其mRNA的表達(dá)量降低,且MMP-9/TIMP-1的比值亦降低,至14 d時表達(dá)量基本恢復(fù)至正常水平,且上述作用皆呈現(xiàn)劑量依賴性。在3 d時,DP軟膏治療組MMP-2及TIMP-2蛋白及mRNA的表達(dá)量與模型對照組相比變化不顯著,但與造模前相比顯著提升,在3~14 d時,DP軟膏治療組MMP-2及TIMP-2蛋白及mRNA的表達(dá)量與模型對照組相比變化不顯著,MMP-2/TIMP-2的比值亦無顯著變化。結(jié)論:DP能夠促進(jìn)大鼠的傷口愈合�？赏ㄟ^增加愈合皮膚組織中表達(dá)的膠原蛋白的量來促進(jìn)傷口愈合。DP主要是通過增加TGF-β1、Smad2/3蛋白的表達(dá)和Smad2/3蛋白的磷酸化水平促進(jìn)膠原蛋白的合成,并通過降低MMP-9的表達(dá)量及通過調(diào)節(jié)TIMP-1的表達(dá)量抑制MMP-9的活性,從而抑制膠原蛋白的分解,達(dá)到促進(jìn)傷口愈合的作用。
【學(xué)位單位】：東北農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類】：S853.74
【部分圖文】：

結(jié) 果3 結(jié)果3.1 血竭素高氯酸鹽對皮膚組織中 collagenⅠ和 collagenⅢ的影響檢測結(jié)果3.1.1 血竭素高氯酸鹽對皮膚組織中 collagenⅠ和 collagenⅢ的表達(dá)檢測結(jié)果由 WB 結(jié)果可以看出，同一時間點(diǎn)，隨血竭素高氯酸鹽軟膏中血竭素高氯酸鹽濃度的增加，collagen Ⅰ及 collagen Ⅲ的表達(dá)量顯著提高，呈劑量依賴性；而在同一濃度不同時間點(diǎn)觀察，發(fā)現(xiàn)隨著時間的增加，collagen Ⅰ的表達(dá)量也有顯著提高，呈現(xiàn)時間依賴性。但 collagen Ⅲ的表達(dá)量則呈現(xiàn)先上升后下降的趨勢，且在 7d 時的表達(dá)量最高。見圖 3-1 和圖 3-2。

圖 3-2 DP 軟膏對皮膚組織中 collagen Ⅲ蛋白表達(dá)的影響Figure 3-2 Effect of DP ointment on the expression of collagen Ⅲprotein in skin tissue3.1.2 血竭素高氯酸鹽對皮膚組織中 collagenⅠ和 collagenⅢ基因表達(dá)檢測結(jié)果從 RT-PCR 結(jié)果可以看出，隨時間增加，皮膚組織中 collagen Ⅰ的 mRNA 表達(dá)量顯著增加，且給藥組中 collagen Ⅰ的 mRNA 表達(dá)量極顯著高于未給藥組；而皮膚組織中 collagen Ⅲ的 mRNA 表達(dá)量在 0~7d 時顯著上升，但在 7~14d 時則顯著降低，7d 時表達(dá)量達(dá)到最高值，且給藥組中 collagen Ⅲ的 mRNA 表達(dá)量極顯著高于未給藥組。見圖 3-3。

圖 3-2 DP 軟膏對皮膚組織中 collagen Ⅲ蛋白表達(dá)的影響Figure 3-2 Effect of DP ointment on the expression of collagen Ⅲprotein in skin tissue3.1.2 血竭素高氯酸鹽對皮膚組織中 collagenⅠ和 collagenⅢ基因表達(dá)檢測結(jié)果從 RT-PCR 結(jié)果可以看出，隨時間增加，皮膚組織中 collagen Ⅰ的 mRNA 表達(dá)量顯著增加，且給藥組中 collagen Ⅰ的 mRNA 表達(dá)量極顯著高于未給藥組；而皮膚組織中 collagen Ⅲ的 mRNA 表達(dá)量在 0~7d 時顯著上升，但在 7~14d 時則顯著降低，7d 時表達(dá)量達(dá)到最高值，且給藥組中 collagen Ⅲ的 mRNA 表達(dá)量極顯著高于未給藥組。見圖 3-3。

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本文編號：2824949