抗病候選基因與畜禽自身的抗病力和免疫力都有相關(guān)性,其中天然抗性相關(guān)巨噬細(xì)胞蛋白1(natural resistant macrophage protein 1,Nramp1)基因就是牛的一個抗病候選基因且較為保守,與抗多種傳染病及細(xì)胞內(nèi)寄生蟲病的感染有關(guān)。但是,該基因在貴州本地牛中是否存在多態(tài)性還需要進(jìn)行探索。因此,本研究通過提取貴州威寧黃牛、關(guān)嶺黃牛及思南黃牛的血液基因組DNA,采用PCR法擴(kuò)增Nramp1基因外顯子1~6、9~11,并進(jìn)行測序比對,分析外顯子10和11的單鏈構(gòu)象多態(tài)性(single-strand conformational polymorphism,SSCP)、統(tǒng)計基因頻率及基因型頻率,各品種牛所對應(yīng)基因型的雜合度、有效等位基因數(shù)和多態(tài)信息含量,同時分析了牛血漿中免疫球蛋白IgG和IgM含量與基因型的關(guān)系。進(jìn)而探索貴州威寧黃牛、關(guān)嶺黃牛及思南黃牛的Nramp1是否存在多態(tài)性及分析其抗病性能。通過研究得到以下結(jié)果:1.在PCR擴(kuò)增貴州威寧黃牛、關(guān)嶺黃牛與思南黃牛3個地方品種黃牛Nramp1基因的幾個外顯子中發(fā)現(xiàn),外顯子1、3、4、5、6、9與基因庫比對不存在變異,其他外顯子則存在以下突變:g.700AG(exon2)、g.2046GA(intron3)、g.7155GA(exon10)、g.7400CG(exon11),分別導(dǎo)致氨基酸的突變:Ala9Ala(exon2)、Asp321Asn(exon10)、Pro356Ala(exon11)。2.對3個地方品種黃牛進(jìn)行exon10 SSCP分析發(fā)現(xiàn),均有兩個等位基因A、B,3種等位基因型AA、BB和AB,A為優(yōu)勢等位基因(分別為0.53、0.56及0.64),AB為優(yōu)勢等位基因型(分別為0.61、0.67及0.64),BB基因型頻率最低(分別為0.17、0.11及0.05),這3個群體牛均處于中度多態(tài)(0.25PIC0.5);exon11的SSCP分析顯示,有C、D、E、F 4種等位基因,CC、CD、CE、CF 4種等位基因型,C為優(yōu)勢等位基因(0.83以上),CC為優(yōu)勢等位基因型(0.67以上),其中思南牛只存在CC基因型,即無多態(tài)性,關(guān)嶺牛為低度多態(tài)(PIC0.25),威寧牛處于中度多態(tài)。3.威寧牛血漿中兩種免疫球蛋白的含量顯示AA基因型最高。AA基因型的威寧黃牛與思南黃牛與關(guān)嶺黃牛的兩種免疫球蛋白含量依次存在極顯著性差異(P0.01)。綜上所述:貴州威寧黃牛、關(guān)嶺黃牛與思南黃牛的exon10呈中度多態(tài),威寧牛的exon11區(qū)域亦屬中度多態(tài),有較大的選擇潛力;且若存在g.7155GA與g.7401CG兩種變異時,可能與貴州黃牛的抗病力有關(guān),以威寧牛AA基因型為最佳,其次是AB基因型。
【學(xué)位單位】：貴州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類】：S823.81
【部分圖文】：

圖 1 Nramp1 基因在 5 只公兔不同組織的表達(dá)量Figure 1 Expression of Nramp1 in different tissues of 5 male rabbitsNramp1 基因是一種較為保守的能夠天然抵抗多種傳染，與動物的結(jié)核、布魯氏菌、沙門氏菌等的抗性有關(guān)細(xì)胞轉(zhuǎn)化率等部分免疫指標(biāo)，還會影響動物的泌乳狀性能。因的應(yīng)用明，Nramp1 基因多態(tài)性與結(jié)核病易感性之間具有相關(guān)2016）。因此西北農(nóng)林科技大學(xué)的研究人員（李倩，Nramp1 細(xì)胞特異性表達(dá)載體；將其線性化后轉(zhuǎn)入新生入該基因的細(xì)胞經(jīng)處理使得該基因插入到染色體相應(yīng)牛子宮，最終產(chǎn)下健康牛犢；并在隨后的試驗(yàn)中證實(shí)

組 DNA 提取牛血液基因組 DNA 提取試劑盒說明提樣品=1.8，純的 RNA：A260/A280=2.0，所以對范圍應(yīng)該在 1.8 到 2.0 之間為宜，否則可能，DNA 的濃度和純度測定實(shí)例見附圖。 DNA 經(jīng) 0.7%瓊脂糖凝膠電泳，置于凝膠因組 DNA 無拖尾現(xiàn)象，無污染，說明 上樣量均為 5μl，因此條帶的明亮程度與明亮，DNA 的濃度越高，同理，條帶越暗

圖 3.2 黃牛 Nramp1 基因 exon10 擴(kuò)增圖Figure 3.2 Amplification of Nramp1 gene exon10 incattle圖 3.3 黃牛 Nramp1 基因 exon11 擴(kuò)增圖Figure 3.3 Amplification of Nramp1 gene exon11 incattle圖 3.4 黃牛 Nramp1 基因 exon1～6 的擴(kuò)增圖Figure 3.4Amplification of Nramp1 gene exon1～6in cattle圖 3.5 黃牛 Nramp1 基因 exon9～11 的擴(kuò)增圖Figure 3.5Amplification of Nramp1 gene exon9～11 in cattle注：圖 3.4 中 M 為 Marker（D2000 分子量標(biāo)準(zhǔn)），泳道 1、2 為 exon1～2（800bp）、泳道 3、4 為 exon3～4（752bp）、泳道 5、6 為 exon5～6（773bp）；圖 3.5 中 M 為 D2000 分子量標(biāo)準(zhǔn)，泳道 1、2 為 exon10（231bp）、泳道 3、4 為 exon11（327bp）、泳道 5、6 為 exon9（399bp）、泳道 7、8 為 exon10～11（600bp）。

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