羊口瘡是由口瘡病毒(orf virus,ORFV)引起的接觸性、嗜上皮性的傳染病。020基因是該病毒重要的酶活力調(diào)節(jié)蛋白。根據(jù)Gen Bank中020基因的序列設(shè)計(jì)引物,從ORFV-F10株感染的病料中提取DNA,PCR擴(kuò)增獲得目的基因。然后將其亞克隆至p ET-32a(+)原核表達(dá)載體,構(gòu)建重組表達(dá)質(zhì)粒p ET-32a-ORF-020。鑒定正確后轉(zhuǎn)化BL21感受態(tài)細(xì)胞,進(jìn)行IPTG誘導(dǎo)表達(dá)。表達(dá)產(chǎn)物進(jìn)行SDS-PAGE和Western-blot分析。最后將純化的020蛋白免疫BALB/c雌鼠,制備多抗血清。SDS-PAGE結(jié)果表明,ORFV 020基因在體外獲得正確表達(dá),大小約37 k Da。Western-blot結(jié)果表明,制備的多抗血清能夠與020蛋白發(fā)生特異性反應(yīng)具有良好的反應(yīng)原性。

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