單核細(xì)胞增生李斯特菌(Listeria monocytogenes,LM)簡稱單增李斯特菌,是人獸李斯特菌病的致病因子。它可以穿越宿主的腸道屏障、血胎屏障和血腦屏障,從而引起胃腸炎、敗血癥、腦膜炎、流產(chǎn)等疾病,易感性人群包括免疫功能低下者,老年人,孕婦和新生兒,死亡率可達(dá)20~30%。人類感染李斯特菌病常與食用被LM污染的肉類,奶制品等生食或即食食品有關(guān)。隨著臨床上抗菌藥物的不規(guī)范使用或濫用,許多LM分離株的抗性水平逐漸升高,不斷出現(xiàn)對一種或多種抗菌藥物耐藥的菌株,耐藥菌株感染將對該病治療產(chǎn)生很大影響。目的:對食源性LM污染情況進(jìn)行調(diào)查及耐藥性研究,掌握我國新疆地區(qū)LM的耐藥譜和部分耐藥基因,指導(dǎo)抗生素在人類臨床和動物飼養(yǎng)中的合理應(yīng)用,為控制耐藥基因的傳播提供重要的參考性數(shù)據(jù)。方法:采用國家標(biāo)準(zhǔn)GB4789.30-2016方法對新疆地區(qū)常規(guī)送檢的1222份食品樣品進(jìn)行LM的分離鑒定。用MIC法及K-B瓊脂擴(kuò)散法,對分離株進(jìn)行18種抗菌藥物敏感性測定;對相關(guān)耐藥基因進(jìn)行PCR檢測,并對耐藥基因進(jìn)行定位和序列分析;通過LM和腸球菌間的濾膜接合試驗,檢測LM耐藥基因tetM、ermB的水平轉(zhuǎn)移能力。結(jié)果:從新疆部分地區(qū)1222份食品樣品中共分離61株LM,總污染率為4.99%(61/1222)。送檢食品中生禽肉、調(diào)理肉制品及動物性水產(chǎn)品中受LM污染程度較高,檢出率分別為23.07%(18/78),14.39%(19/132)、10%(6/60)。藥物敏感性試驗顯示,29.51%(18/61)的菌株MIC法檢測耐藥,21.31%(13/61)菌株K-B瓊脂擴(kuò)散法檢測耐藥,對四環(huán)素、鏈霉素、復(fù)方新諾明的耐藥菌株高于強(qiáng)力霉素、卡那霉素耐藥菌株。MIC法檢出的3株氯霉素耐藥、2株紅霉素耐藥以及1株頭孢噻吩耐藥菌株,K-B紙片法未檢出。采用PCR方法對61株LM分離株的部分耐藥基因進(jìn)行檢測,結(jié)果顯示:65%(13/20)表型耐藥的菌株檢測到相應(yīng)的耐藥基因,四環(huán)素類耐藥基因以tetM為主,紅霉素耐藥基因為ermB,氯霉素素耐藥基因為cat。在41株非耐藥表型菌株中,氨基糖苷類耐藥基因aac(6')-Ib-cr和紅霉素耐藥基因ermB的檢出率分別高達(dá)53.65%和36.58%。擴(kuò)增片段核苷酸序列與參考序列同源性為95~100%。耐藥基因定位發(fā)現(xiàn)tetM,tetA主要存在于染色體DNA中,tetS、cat、ermB主要存在于質(zhì)粒上,而aac(6')-Ib-cr于染色體和質(zhì)粒均有分布。2株耐四環(huán)素,1株耐紅霉素的LM供體與腸球菌進(jìn)行接合試驗,分別獲得17、23、28株接合子,接合轉(zhuǎn)移率分別3.4×10~(㧟7)、4.6×10~(㧟7)、5.6×10~(㧟7),接合子ermB或tetM基因檢測陽性,其序列與LM的耐藥基因序列一致,藥敏試驗分別出現(xiàn)四環(huán)素或紅霉素的耐藥表型,說明LM的ermB或tetM基因可以通過水平傳遞給腸球菌。結(jié)論:新疆送檢食品受到不同程度LM污染,且部分LM出現(xiàn)耐藥性,耐藥表型與耐藥基因攜帶不完全相符,LM耐藥基因tetM和ermB可實現(xiàn)種間水平傳播。
【學(xué)位單位】：石河子大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類】：S852.61
【部分圖文】：

tetM耐藥基因PCR擴(kuò)增結(jié)果

tetA耐藥基因PCR擴(kuò)增結(jié)果

tetS耐藥基因PCR擴(kuò)增結(jié)果

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2819049