蘋果多酚(Apple Polyphenol,AP)是蘋果中多酚類物質(zhì)的總稱,具有抗氧化、清除自由基、抑菌、抗癌、抗突變及防衰老等功能。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)MTT測(cè)定及形態(tài)觀察,檢測(cè)不同濃度蘋果多酚對(duì)巨噬細(xì)胞活性及生長(zhǎng)的影響;利用基因芯片分析蘋果多酚對(duì)巨噬細(xì)胞基因表達(dá)譜的影響;應(yīng)用實(shí)時(shí)熒光定量PCR對(duì)6個(gè)基因表達(dá)譜芯片分析篩選出的差異基因進(jìn)行了定量分析;應(yīng)用微量法NO檢測(cè)試劑盒及ELISA試劑盒測(cè)定蘋果多酚對(duì)巨噬細(xì)胞NO、TNF-α、IL-1α、IFN-γ產(chǎn)生的影響;主要研究結(jié)果如下:1.MTT測(cè)定及形態(tài)學(xué)觀察表明:蘋果多酚的濃度在20μg/mL以上時(shí),可以抑制巨噬細(xì)胞的生長(zhǎng),與對(duì)照組相比差異顯著(p0.05);濃度在10μg/mL時(shí),促進(jìn)巨噬細(xì)胞的生長(zhǎng),與對(duì)照組相比差異顯著(p0.05);濃度為5μg/mL時(shí),對(duì)細(xì)胞的生長(zhǎng)沒有明顯的影響,與對(duì)照組相比差異不顯著(p0.05);蘋果多酚的濃度在25μg/mL以上時(shí),引起小鼠巨噬細(xì)胞體積變小、圓形、脫落、固縮壞死成碎片;5-20μg/mL時(shí),巨噬細(xì)胞多為圓形或橢圓形,極少數(shù)細(xì)胞為梭形,蘋果多酚的最大安全濃度即確定為10μg/mL。2.蘋果多酚作用于巨噬細(xì)胞后利用基因芯片技術(shù)進(jìn)行數(shù)據(jù)分析,結(jié)果顯示:以兩倍變化為標(biāo)準(zhǔn),共得到3149個(gè)差異表達(dá)基因,其中1540個(gè)基因在巨噬細(xì)胞中表達(dá)上調(diào),1609個(gè)基因表達(dá)下調(diào)。GO分析結(jié)果顯示,這些差異基因主要參與蛋白與核苷酸結(jié)合、DNA修復(fù)、細(xì)胞周期、細(xì)胞骨架與細(xì)胞核等功能。KEGG Pathway分析結(jié)果表明,差異基因涉及的信號(hào)通路包括類固醇生物合成、真核細(xì)胞核糖體合成、TNF信號(hào)通路、抗生素生物合成等。利用qPCR進(jìn)一步驗(yàn)證TNF信號(hào)通路上相關(guān)差異基因的表達(dá),其中Map3k8、Mlkl、Tnf表達(dá)顯著下調(diào)(p0.05),而Pik3ca、Cflar、Atf_2下調(diào)不顯著(p0.05)。3.NO及細(xì)胞因子檢測(cè)結(jié)果顯示:蘋果多酚的濃度為2.5μg/mL、5μg/mL和10μg/mL時(shí),NO的生成量隨著蘋果多酚濃度的升高而降低,與對(duì)照組相比差異顯著(p0.05);濃度為0.625μg/mL、1.25μg/mL時(shí),NO生成量與對(duì)照組相比差異不顯著(p0.05);濃度為10μg/mL時(shí),能夠降低TNF-α、IL-1α及IFN-γ的表達(dá)水平,與對(duì)照組相比差異顯著(p0.05)。本研究結(jié)果顯示,基因芯片分析表明共有1540上調(diào)基因,1609個(gè)下調(diào)基因,這些基因主要參與蛋白結(jié)合、核苷酸結(jié)合、DNA修復(fù)等過(guò)程,分析結(jié)果為進(jìn)一步研究蘋果多酚的生物學(xué)作用提供參考;蘋果多酚可能通過(guò)影響巨噬細(xì)胞TNF信號(hào)通路中相關(guān)基因的表達(dá),從而介導(dǎo)巨噬細(xì)胞抗炎抗癌機(jī)制及免疫調(diào)節(jié)作用;蘋果多酚可下調(diào)巨噬細(xì)胞TNF-α、IL-1α與IFN-γ及NO的生成量,從而具有一定的抗炎效果和免疫調(diào)節(jié)作用。
【學(xué)位單位】：甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：S852.4
【部分圖文】：

圖 1-1 不同濃度蘋果多酚對(duì)巨噬細(xì)胞生長(zhǎng)的影響（n=4）*代表與正常對(duì)照組相比差異顯著（p㩳0.05）；**代表與正常對(duì)照組相比差異極顯著（p㩳0.01）Fig.1-1 Effects of different concentrations of apple polyphenols on multiplication capacity of macrophage*p㩳0.05, ** p㩳0.01versus control group

圖 1-1 不同濃度蘋果多酚對(duì)巨噬細(xì)胞生長(zhǎng)的影響（n=4）與正常對(duì)照組相比差異顯著（p㩳0.05）；**代表與正常對(duì)照組相比差異極顯著（p-1 Effects of different concentrations of apple polyphenols on multiplication capacity of m*p㩳0.05, ** p㩳0.01versus control group

甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué) 2018 屆碩士學(xué)位論文 第二章 蘋果多酚對(duì) RAW264.7 小鼠巨噬細(xì)胞基因表達(dá)譜的影響2.2 基因芯片雜交結(jié)果實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組 6 個(gè)樣品的基因表達(dá)譜芯片雜交掃描結(jié)果（見圖 2-1），圖像亮度較好，圖像清晰，熒光分布致密且均勻，說(shuō)明該結(jié)果符合下一步實(shí)驗(yàn)要求。

【參考文獻(xiàn)】

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7 張澤生;史s

本文編號(hào)：2818013