蘋果多酚(Apple Polyphenol,AP)是蘋果中多酚類物質的總稱,具有抗氧化、清除自由基、抑菌、抗癌、抗突變及防衰老等功能。本實驗通過MTT測定及形態(tài)觀察,檢測不同濃度蘋果多酚對巨噬細胞活性及生長的影響;利用基因芯片分析蘋果多酚對巨噬細胞基因表達譜的影響;應用實時熒光定量PCR對6個基因表達譜芯片分析篩選出的差異基因進行了定量分析;應用微量法NO檢測試劑盒及ELISA試劑盒測定蘋果多酚對巨噬細胞NO、TNF-α、IL-1α、IFN-γ產生的影響;主要研究結果如下:1.MTT測定及形態(tài)學觀察表明:蘋果多酚的濃度在20μg/mL以上時,可以抑制巨噬細胞的生長,與對照組相比差異顯著(p0.05);濃度在10μg/mL時,促進巨噬細胞的生長,與對照組相比差異顯著(p0.05);濃度為5μg/mL時,對細胞的生長沒有明顯的影響,與對照組相比差異不顯著(p0.05);蘋果多酚的濃度在25μg/mL以上時,引起小鼠巨噬細胞體積變小、圓形、脫落、固縮壞死成碎片;5-20μg/mL時,巨噬細胞多為圓形或橢圓形,極少數細胞為梭形,蘋果多酚的最大安全濃度即確定為10μg/mL。2.蘋果多酚作用于巨噬細胞后利用基因芯片技術進行數據分析,結果顯示:以兩倍變化為標準,共得到3149個差異表達基因,其中1540個基因在巨噬細胞中表達上調,1609個基因表達下調。GO分析結果顯示,這些差異基因主要參與蛋白與核苷酸結合、DNA修復、細胞周期、細胞骨架與細胞核等功能。KEGG Pathway分析結果表明,差異基因涉及的信號通路包括類固醇生物合成、真核細胞核糖體合成、TNF信號通路、抗生素生物合成等。利用qPCR進一步驗證TNF信號通路上相關差異基因的表達,其中Map3k8、Mlkl、Tnf表達顯著下調(p0.05),而Pik3ca、Cflar、Atf_2下調不顯著(p0.05)。3.NO及細胞因子檢測結果顯示:蘋果多酚的濃度為2.5μg/mL、5μg/mL和10μg/mL時,NO的生成量隨著蘋果多酚濃度的升高而降低,與對照組相比差異顯著(p0.05);濃度為0.625μg/mL、1.25μg/mL時,NO生成量與對照組相比差異不顯著(p0.05);濃度為10μg/mL時,能夠降低TNF-α、IL-1α及IFN-γ的表達水平,與對照組相比差異顯著(p0.05)。本研究結果顯示,基因芯片分析表明共有1540上調基因,1609個下調基因,這些基因主要參與蛋白結合、核苷酸結合、DNA修復等過程,分析結果為進一步研究蘋果多酚的生物學作用提供參考;蘋果多酚可能通過影響巨噬細胞TNF信號通路中相關基因的表達,從而介導巨噬細胞抗炎抗癌機制及免疫調節(jié)作用;蘋果多酚可下調巨噬細胞TNF-α、IL-1α與IFN-γ及NO的生成量,從而具有一定的抗炎效果和免疫調節(jié)作用。
【學位單位】：甘肅農業(yè)大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2018
【中圖分類】：S852.4
【部分圖文】：

圖 1-1 不同濃度蘋果多酚對巨噬細胞生長的影響（n=4）*代表與正常對照組相比差異顯著（p㩳0.05）；**代表與正常對照組相比差異極顯著（p㩳0.01）Fig.1-1 Effects of different concentrations of apple polyphenols on multiplication capacity of macrophage*p㩳0.05, ** p㩳0.01versus control group

圖 1-1 不同濃度蘋果多酚對巨噬細胞生長的影響（n=4）與正常對照組相比差異顯著（p㩳0.05）；**代表與正常對照組相比差異極顯著（p-1 Effects of different concentrations of apple polyphenols on multiplication capacity of m*p㩳0.05, ** p㩳0.01versus control group

甘肅農業(yè)大學 2018 屆碩士學位論文 第二章 蘋果多酚對 RAW264.7 小鼠巨噬細胞基因表達譜的影響2.2 基因芯片雜交結果實驗組與對照組 6 個樣品的基因表達譜芯片雜交掃描結果（見圖 2-1），圖像亮度較好，圖像清晰，熒光分布致密且均勻，說明該結果符合下一步實驗要求。

【參考文獻】

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本文編號：2818013