雄性激素調(diào)控鹿茸發(fā)育干細(xì)胞組織的蛋白組學(xué)研究
發(fā)布時間:2020-09-09 17:52
鹿茸不但具有重要的藥用價值,而且也被認(rèn)為是研究多種疾病的新型生物醫(yī)學(xué)模型。研究表明角柄骨膜(pedicle periosteum,PP)是鹿茸每年再生的組織基礎(chǔ),其強(qiáng)大的增殖分化潛能來源于鹿額外脊的生茸區(qū)骨膜(antlerogenic periosteum,AP)。AP組織發(fā)育形成角柄和初角茸(鹿茸發(fā)生)以及PP組織發(fā)育形成再生茸都受到雄性激素的調(diào)控。然而,AP和PP組織受雄性激素調(diào)控被激活發(fā)起鹿茸發(fā)生和再生的分子調(diào)控機(jī)制還未被研究。本研究以AP和PP組織為研究對象,通過差異蛋白質(zhì)組學(xué)研究系統(tǒng)的比較兩種組織在雄性激素調(diào)控下發(fā)育前后的差異蛋白表達(dá)圖譜。根據(jù)蛋白組學(xué)結(jié)果篩選調(diào)控AP和PP發(fā)育的關(guān)鍵調(diào)控因子和相關(guān)信號通路,并從中找到雄性激素激活A(yù)P組織發(fā)育過程中的關(guān)鍵調(diào)控蛋白。同時探究雄性激素對體外培養(yǎng)AP組織中的細(xì)胞是否具有促增殖作用。差異蛋白組學(xué)研究發(fā)現(xiàn):通過2D-DIGE技術(shù)分析雄性激素觸發(fā)AP發(fā)育的差異表達(dá)蛋白(differential expressed proteins,DEPs),共鑒定出83個DEPs(15個上調(diào),68個上調(diào)),主要涉及細(xì)胞周期、程序性凋亡、基因表達(dá)和信號轉(zhuǎn)導(dǎo)等信號通路,GO功能分析發(fā)現(xiàn)DEPs多聚類于蛋白核定位、神經(jīng)元再生以及細(xì)胞骨架重組等生物學(xué)過程,篩選到了CALR,p53和SRCIN1等與AP組織發(fā)育的重要調(diào)控因子;調(diào)控鹿茸發(fā)生的大部分蛋白表達(dá)量下調(diào),而調(diào)控鹿茸再生的大部分蛋白表達(dá)量上調(diào)。CALR,p53,LMNA和ACTB蛋白參與了鹿茸發(fā)生和再生過程,除了LMNA蛋白,CALR,p53和ACTB在兩個過程中的表達(dá)水平相反。在鹿茸發(fā)生和再生過程中,CALR和p53蛋白與AR直接互作,其表達(dá)水平與雄性激素水平密切相關(guān)。通過EdU標(biāo)記和Ki67免疫組化檢測結(jié)果顯示:雄性激素不能促進(jìn)體外培養(yǎng)AP組織中的細(xì)胞的增殖。結(jié)論:1)高水平雄性激素是激活A(yù)P發(fā)育的關(guān)鍵因子,低水平雄性激素是激活PP發(fā)育的關(guān)鍵因子;2)AP組織發(fā)育主要受細(xì)胞周期、細(xì)胞程序性凋亡、基因表達(dá)和信號轉(zhuǎn)導(dǎo)等通路調(diào)節(jié),CALR、p53和SRCIN1是參與AP發(fā)育的關(guān)鍵調(diào)控因子;3)PP組織發(fā)育主要受內(nèi)質(zhì)網(wǎng)蛋白調(diào)控、雌激素信號通路和細(xì)胞黏連等信號通路的調(diào)節(jié),熱休克蛋白、鈣網(wǎng)蛋白、FK506和Src酪氨酸激酶等是調(diào)控PP發(fā)育的主要因子;4)雄激素不能促進(jìn)體外培養(yǎng)的AP組織塊內(nèi)部細(xì)胞的增殖。
【學(xué)位單位】:中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院
【學(xué)位級別】:博士
【學(xué)位年份】:2019
【中圖分類】:S825
【部分圖文】:
學(xué)院博士學(xué)位論文 第一章 引第一章 引言發(fā)生茸發(fā)生概述屬于雄性鹿科動物第二性征,其發(fā)生受雄性激素調(diào)控。鹿茸發(fā)生指的是仔公鹿進(jìn)入青(鹿額外脊處永久性骨質(zhì)殘樁,鹿茸年周期性再生的基礎(chǔ))和初角茸的形成過程。梅us nippon)仔公鹿在出生后 8-10 月齡于額外脊處(圖 1-1A)基于骨膜組織(圖 1-1角柄,待角柄生長完全后,初角茸于角柄遠(yuǎn)心端生長(圖 1-1C);初角茸與正常鹿茸為初角茸不分叉,秋季初角茸生長完全開始骨化形成鹿角(鹿茸完全骨化后形成的骨個冬季鹿角牢牢附著在角柄上,翌年春季,鹿角脫落,鹿茸以角柄為基礎(chǔ)年周期性-1D)。
農(nóng)業(yè)科學(xué)院博士學(xué)位論文 第一章 引2 鹿茸發(fā)生組織基礎(chǔ)最初 Hartwig 等(1974)在尋找能夠形成鹿茸的組織時發(fā)現(xiàn)了生茸區(qū)骨膜(antlerogsteum, AP)。AP 的發(fā)現(xiàn)被稱為鹿茸研究史上的里程碑(Fennessy, 1984b; Hartwig and Schru; Li and Suttie, 1994)。將 AP 從生茸區(qū)移植到鹿身體其他部位,例如前額,前腿(鼻子前側(cè)面與后背除外)甚至是裸鼠上都導(dǎo)致了異位生茸,同時 AP 移除部位失去了鹿茸發(fā)生能s and Powel, 1985; Hartwig and Schrudde, 1974; Li, 2003a; Li and Suttie, 2001b)。實(shí)驗(yàn)初步證鹿茸發(fā)生的組織基礎(chǔ)。
圖 1-3 LacZ 基因表達(dá)Figure 1-3 Expression of the LacZ gene發(fā)生組織學(xué)過程生過程在妊娠期已經(jīng)能夠檢測到,但是出生以后就停止了發(fā)育,直到進(jìn)入青春期以后,因此鹿茸發(fā)生過程我們可以分為妊娠期發(fā)育階段和青春期發(fā)育階段。期角柄發(fā)育過程973 年,Lincoln(1973)已經(jīng)注意到公鹿胎兒期的角柄已經(jīng)進(jìn)行了發(fā)育過程,AP(或被基)組織形態(tài)在孕期 60 天左右可以被明顯觀察到。Li 等(2001b)對馬鹿胎兒期組織學(xué)究發(fā)現(xiàn)角柄最初比肢體發(fā)育晚兩周,在第 35-48 天已能夠明顯觀察到,妊娠期第 55明顯的增大現(xiàn)象,并于妊娠期后期停止發(fā)育。直到仔公鹿進(jìn)入青春期,AP 才開始發(fā)和初角茸。在組織結(jié)構(gòu)上,AP 與其他部位骨膜一致,分為內(nèi)側(cè)細(xì)胞層和外側(cè)纖維層?椉(xì)胞層厚度是周圍臉部骨膜的 3.7 倍(馬鹿),其中細(xì)胞層是鹿茸發(fā)生的起源。
【學(xué)位單位】:中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院
【學(xué)位級別】:博士
【學(xué)位年份】:2019
【中圖分類】:S825
【部分圖文】:
學(xué)院博士學(xué)位論文 第一章 引第一章 引言發(fā)生茸發(fā)生概述屬于雄性鹿科動物第二性征,其發(fā)生受雄性激素調(diào)控。鹿茸發(fā)生指的是仔公鹿進(jìn)入青(鹿額外脊處永久性骨質(zhì)殘樁,鹿茸年周期性再生的基礎(chǔ))和初角茸的形成過程。梅us nippon)仔公鹿在出生后 8-10 月齡于額外脊處(圖 1-1A)基于骨膜組織(圖 1-1角柄,待角柄生長完全后,初角茸于角柄遠(yuǎn)心端生長(圖 1-1C);初角茸與正常鹿茸為初角茸不分叉,秋季初角茸生長完全開始骨化形成鹿角(鹿茸完全骨化后形成的骨個冬季鹿角牢牢附著在角柄上,翌年春季,鹿角脫落,鹿茸以角柄為基礎(chǔ)年周期性-1D)。
農(nóng)業(yè)科學(xué)院博士學(xué)位論文 第一章 引2 鹿茸發(fā)生組織基礎(chǔ)最初 Hartwig 等(1974)在尋找能夠形成鹿茸的組織時發(fā)現(xiàn)了生茸區(qū)骨膜(antlerogsteum, AP)。AP 的發(fā)現(xiàn)被稱為鹿茸研究史上的里程碑(Fennessy, 1984b; Hartwig and Schru; Li and Suttie, 1994)。將 AP 從生茸區(qū)移植到鹿身體其他部位,例如前額,前腿(鼻子前側(cè)面與后背除外)甚至是裸鼠上都導(dǎo)致了異位生茸,同時 AP 移除部位失去了鹿茸發(fā)生能s and Powel, 1985; Hartwig and Schrudde, 1974; Li, 2003a; Li and Suttie, 2001b)。實(shí)驗(yàn)初步證鹿茸發(fā)生的組織基礎(chǔ)。
圖 1-3 LacZ 基因表達(dá)Figure 1-3 Expression of the LacZ gene發(fā)生組織學(xué)過程生過程在妊娠期已經(jīng)能夠檢測到,但是出生以后就停止了發(fā)育,直到進(jìn)入青春期以后,因此鹿茸發(fā)生過程我們可以分為妊娠期發(fā)育階段和青春期發(fā)育階段。期角柄發(fā)育過程973 年,Lincoln(1973)已經(jīng)注意到公鹿胎兒期的角柄已經(jīng)進(jìn)行了發(fā)育過程,AP(或被基)組織形態(tài)在孕期 60 天左右可以被明顯觀察到。Li 等(2001b)對馬鹿胎兒期組織學(xué)究發(fā)現(xiàn)角柄最初比肢體發(fā)育晚兩周,在第 35-48 天已能夠明顯觀察到,妊娠期第 55明顯的增大現(xiàn)象,并于妊娠期后期停止發(fā)育。直到仔公鹿進(jìn)入青春期,AP 才開始發(fā)和初角茸。在組織結(jié)構(gòu)上,AP 與其他部位骨膜一致,分為內(nèi)側(cè)細(xì)胞層和外側(cè)纖維層?椉(xì)胞層厚度是周圍臉部骨膜的 3.7 倍(馬鹿),其中細(xì)胞層是鹿茸發(fā)生的起源。
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