旋毛形線蟲(chóng)(Trichinella spiralis,T.spiralis)簡(jiǎn)稱(chēng)旋毛蟲(chóng)(Trichinella),可感染幾乎所有的哺乳動(dòng)物。旋毛蟲(chóng)侵入到人或動(dòng)物體內(nèi)會(huì)引起人畜共患寄生蟲(chóng)病——旋毛蟲(chóng)病。人感染旋毛蟲(chóng)后的主要癥狀表現(xiàn)為腹瀉,發(fā)熱,肌肉酸痛,皮疹,出血等,嚴(yán)重者可導(dǎo)致死亡。該病還能引起突發(fā)性的重大公共衛(wèi)生事件,嚴(yán)重影響了畜牧業(yè)經(jīng)濟(jì)的發(fā)展以及食品工業(yè)的安全。旋毛蟲(chóng)病是世界各地待屠宰動(dòng)物首檢及強(qiáng)制性檢疫檢驗(yàn)的人獸共患病病種,目前為止,該病也是世界范圍內(nèi)投入預(yù)防控制費(fèi)用較多的一類(lèi)食源性人獸共患寄生蟲(chóng)病。大量研究表明,機(jī)體不能完全清除旋毛蟲(chóng)的原因之一是由于免疫細(xì)胞的影響,旋毛蟲(chóng)能在嚙齒動(dòng)物體內(nèi)通過(guò)與宿主的免疫細(xì)胞以及免疫分子之間的相互作用來(lái)逃避或著抑制宿主的相關(guān)免疫應(yīng)答反應(yīng)從而延長(zhǎng)其在宿主體內(nèi)的生存時(shí)間。調(diào)節(jié)性B細(xì)胞(Regulatory B cells,Bregs)是近年來(lái)專(zhuān)家學(xué)者們研究發(fā)現(xiàn)的一種能抑制相關(guān)免疫應(yīng)答的B細(xì)胞亞群,該類(lèi)細(xì)胞可以通過(guò)分泌相關(guān)的細(xì)胞抑炎因子(IL-10、IL-35和TGF-β等)來(lái)抑制免疫應(yīng)答反應(yīng),在腫瘤、自身免疫疾病、炎癥和寄生蟲(chóng)感染等多種疾病中發(fā)揮著極其重要的作用。為了探究Bregs在線蟲(chóng)——旋毛蟲(chóng)感染中是否參與并發(fā)揮作用,本試驗(yàn)采用了旋毛蟲(chóng)易感的雌性BALB/c小鼠建立的感染模型,研究了Bregs在旋毛蟲(chóng)感染過(guò)程中的數(shù)量變化情況及感染后的表型特征。主要研究?jī)?nèi)容及結(jié)果如下:本試驗(yàn)將雌性BALB/c小鼠分為兩組:對(duì)照組(PBS組),試驗(yàn)組:(T.spiralis感染組)。為了確定旋毛蟲(chóng)感染能否誘導(dǎo)產(chǎn)生Bregs,在旋毛蟲(chóng)感染后的不同時(shí)期(7d、14d、21d、28d、35d和42d),采用流式細(xì)胞術(shù)(FCM)檢測(cè)了小鼠脾臟(SPL)和腸系膜淋巴結(jié)(MLN)中CD19~+B細(xì)胞的數(shù)量變化及IL-10的表達(dá)情況。研究結(jié)果表明:與對(duì)照組(PBS組)相比,無(wú)論在SPL中還是MLN中,CD19~+B分泌IL-10的量均有所增加,從旋毛蟲(chóng)感染的第7天開(kāi)始,試驗(yàn)組小鼠CD19~+IL-10~+B細(xì)胞的數(shù)量逐漸增多,且該細(xì)胞數(shù)量在21d達(dá)到了頂峰,該時(shí)期后CD19~+IL-10~+B細(xì)胞數(shù)量逐漸減少,但仍比對(duì)照組多。運(yùn)用石蠟切片免疫熒光法檢測(cè)了旋毛蟲(chóng)感染后不同時(shí)期SPL中Bregs的變化情況,結(jié)果表明與對(duì)照組相比,試驗(yàn)組小鼠CD19~+IL-10~+B細(xì)胞比例均有所提高,且差異顯著,該變化趨勢(shì)與FCM檢測(cè)結(jié)果變化趨勢(shì)相一致。以上結(jié)果表明,旋毛蟲(chóng)感染能誘導(dǎo)產(chǎn)生Bregs。取派爾氏結(jié)(PPs)制成單細(xì)胞懸液,并對(duì)表面分子CD19,CD5,CD1d進(jìn)行染色,結(jié)果顯示在旋毛蟲(chóng)感染后的不同時(shí)期,CD19~+CD5~+CD1d~(high)細(xì)胞增多,在第35天時(shí),該細(xì)胞數(shù)量增至頂峰,這一結(jié)果表明旋毛蟲(chóng)感染也能誘導(dǎo)PPs中Bregs的產(chǎn)生。小鼠感染旋毛蟲(chóng)后,為了鑒定能分泌細(xì)胞因子IL-10的Bregs表型,我們?cè)诟腥竞蟮牡?天,運(yùn)用FCM檢測(cè)了小鼠SPL中B細(xì)胞中IL-10及CD23、IgM、CD5、IgD等相關(guān)表面分子的表達(dá)情況,結(jié)果發(fā)現(xiàn)IL-10~+B細(xì)胞表面分子CD23、CD21、IgM表達(dá)水平較高,CD5、CD1d、IgD的表達(dá)水平較低。結(jié)果表明感染旋毛蟲(chóng)后Bregs的表型與過(guò)渡2型邊緣區(qū)前體B細(xì)胞(T-MZP)和邊緣區(qū)前體B細(xì)胞(MZB)表型相似。我們還通過(guò)FCM檢測(cè)了感染后不同時(shí)期小鼠SPL淋巴細(xì)胞中CD19~+CD5~+CD1d~(high)細(xì)胞表達(dá)TGF-β1的情況,SPL和MLN中CD19~+B細(xì)胞和CD4~+T細(xì)胞分泌IL-17A的情況,結(jié)果表明在28天時(shí),TGF-β1表達(dá)量最多,感染后0~21天產(chǎn)生IL-17A的B細(xì)胞(B17)和T細(xì)胞(Th17)逐漸增多,隨后B17,Th17細(xì)胞數(shù)量逐漸減少,這一變化趨勢(shì)與CD19~+IL-10~+B細(xì)胞數(shù)量變化趨勢(shì)幾乎一致。這一現(xiàn)象說(shuō)明Bregs與Th17,B17細(xì)胞之間可能也有某種平衡關(guān)系,這種關(guān)系很可能與旋毛蟲(chóng)的發(fā)病機(jī)制有關(guān)。
【學(xué)位單位】：吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類(lèi)】：S852.7
【部分圖文】：

小鼠舌肌H&E染色黑色箭頭：肌細(xì)胞；藍(lán)色箭頭：膠原纖維；紅色箭頭：肌幼蟲(chóng)包囊（H&E×400）

A: The cells were stained for CD19, IL-10 and IgD, IgM, CDflow cytometry. Cell-surface molecule expression by IL-10+(tT.spiralis mice, and shaded part represent isotype-matched conCD21 and CD23 on CD19+IL-10+gated B cells 1.3.7 旋毛蟲(chóng)感染后 PPs 中 CD19+CD5+CD1dhigh細(xì)胞取 PPs 制成單細(xì)胞懸液，并對(duì)表面分子進(jìn)行染天、21 天、28 天、35 天、42 天時(shí)采用流式細(xì)胞術(shù)細(xì)胞表達(dá)量，結(jié)果表明在第 35 天時(shí)，CD19+CD5+C（P＜0.05）如圖 1.7。CD19+CD5+B

Figure 1.7 Expression of CD19+CD5+CD1dhighin PPs at different periods of T.spiralis infection1.3.8 旋毛蟲(chóng)感染脾中誘導(dǎo) TGF-β1 的情況在旋毛蟲(chóng)感染后，檢測(cè)了小鼠脾臟淋巴細(xì)胞中 CD19+CD5+CD1dhigh細(xì)胞表達(dá) TGF-β1情況，結(jié)果表明在 28 天時(shí)，TGF-β1 表達(dá)量達(dá)到了頂峰，占 CD19+CD5+CD1dhigh細(xì)胞 4.25%左右，如圖 1.8。

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