旋毛形線蟲(Trichinella spiralis,T.spiralis)簡稱旋毛蟲(Trichinella),可感染幾乎所有的哺乳動物。旋毛蟲侵入到人或動物體內(nèi)會引起人畜共患寄生蟲病——旋毛蟲病。人感染旋毛蟲后的主要癥狀表現(xiàn)為腹瀉,發(fā)熱,肌肉酸痛,皮疹,出血等,嚴重者可導致死亡。該病還能引起突發(fā)性的重大公共衛(wèi)生事件,嚴重影響了畜牧業(yè)經(jīng)濟的發(fā)展以及食品工業(yè)的安全。旋毛蟲病是世界各地待屠宰動物首檢及強制性檢疫檢驗的人獸共患病病種,目前為止,該病也是世界范圍內(nèi)投入預防控制費用較多的一類食源性人獸共患寄生蟲病。大量研究表明,機體不能完全清除旋毛蟲的原因之一是由于免疫細胞的影響,旋毛蟲能在嚙齒動物體內(nèi)通過與宿主的免疫細胞以及免疫分子之間的相互作用來逃避或著抑制宿主的相關(guān)免疫應答反應從而延長其在宿主體內(nèi)的生存時間。調(diào)節(jié)性B細胞(Regulatory B cells,Bregs)是近年來專家學者們研究發(fā)現(xiàn)的一種能抑制相關(guān)免疫應答的B細胞亞群,該類細胞可以通過分泌相關(guān)的細胞抑炎因子(IL-10、IL-35和TGF-β等)來抑制免疫應答反應,在腫瘤、自身免疫疾病、炎癥和寄生蟲感染等多種疾病中發(fā)揮著極其重要的作用。為了探究Bregs在線蟲——旋毛蟲感染中是否參與并發(fā)揮作用,本試驗采用了旋毛蟲易感的雌性BALB/c小鼠建立的感染模型,研究了Bregs在旋毛蟲感染過程中的數(shù)量變化情況及感染后的表型特征。主要研究內(nèi)容及結(jié)果如下:本試驗將雌性BALB/c小鼠分為兩組:對照組(PBS組),試驗組:(T.spiralis感染組)。為了確定旋毛蟲感染能否誘導產(chǎn)生Bregs,在旋毛蟲感染后的不同時期(7d、14d、21d、28d、35d和42d),采用流式細胞術(shù)(FCM)檢測了小鼠脾臟(SPL)和腸系膜淋巴結(jié)(MLN)中CD19~+B細胞的數(shù)量變化及IL-10的表達情況。研究結(jié)果表明:與對照組(PBS組)相比,無論在SPL中還是MLN中,CD19~+B分泌IL-10的量均有所增加,從旋毛蟲感染的第7天開始,試驗組小鼠CD19~+IL-10~+B細胞的數(shù)量逐漸增多,且該細胞數(shù)量在21d達到了頂峰,該時期后CD19~+IL-10~+B細胞數(shù)量逐漸減少,但仍比對照組多。運用石蠟切片免疫熒光法檢測了旋毛蟲感染后不同時期SPL中Bregs的變化情況,結(jié)果表明與對照組相比,試驗組小鼠CD19~+IL-10~+B細胞比例均有所提高,且差異顯著,該變化趨勢與FCM檢測結(jié)果變化趨勢相一致。以上結(jié)果表明,旋毛蟲感染能誘導產(chǎn)生Bregs。取派爾氏結(jié)(PPs)制成單細胞懸液,并對表面分子CD19,CD5,CD1d進行染色,結(jié)果顯示在旋毛蟲感染后的不同時期,CD19~+CD5~+CD1d~(high)細胞增多,在第35天時,該細胞數(shù)量增至頂峰,這一結(jié)果表明旋毛蟲感染也能誘導PPs中Bregs的產(chǎn)生。小鼠感染旋毛蟲后,為了鑒定能分泌細胞因子IL-10的Bregs表型,我們在感染后的第7天,運用FCM檢測了小鼠SPL中B細胞中IL-10及CD23、IgM、CD5、IgD等相關(guān)表面分子的表達情況,結(jié)果發(fā)現(xiàn)IL-10~+B細胞表面分子CD23、CD21、IgM表達水平較高,CD5、CD1d、IgD的表達水平較低。結(jié)果表明感染旋毛蟲后Bregs的表型與過渡2型邊緣區(qū)前體B細胞(T-MZP)和邊緣區(qū)前體B細胞(MZB)表型相似。我們還通過FCM檢測了感染后不同時期小鼠SPL淋巴細胞中CD19~+CD5~+CD1d~(high)細胞表達TGF-β1的情況,SPL和MLN中CD19~+B細胞和CD4~+T細胞分泌IL-17A的情況,結(jié)果表明在28天時,TGF-β1表達量最多,感染后0~21天產(chǎn)生IL-17A的B細胞(B17)和T細胞(Th17)逐漸增多,隨后B17,Th17細胞數(shù)量逐漸減少,這一變化趨勢與CD19~+IL-10~+B細胞數(shù)量變化趨勢幾乎一致。這一現(xiàn)象說明Bregs與Th17,B17細胞之間可能也有某種平衡關(guān)系,這種關(guān)系很可能與旋毛蟲的發(fā)病機制有關(guān)。
【學位單位】：吉林農(nóng)業(yè)大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2019
【中圖分類】：S852.7
【部分圖文】：

小鼠舌肌H&E染色黑色箭頭：肌細胞；藍色箭頭：膠原纖維；紅色箭頭：肌幼蟲包囊（H&E×400）

A: The cells were stained for CD19, IL-10 and IgD, IgM, CDflow cytometry. Cell-surface molecule expression by IL-10+(tT.spiralis mice, and shaded part represent isotype-matched conCD21 and CD23 on CD19+IL-10+gated B cells 1.3.7 旋毛蟲感染后 PPs 中 CD19+CD5+CD1dhigh細胞取 PPs 制成單細胞懸液，并對表面分子進行染天、21 天、28 天、35 天、42 天時采用流式細胞術(shù)細胞表達量，結(jié)果表明在第 35 天時，CD19+CD5+C（P＜0.05）如圖 1.7。CD19+CD5+B

Figure 1.7 Expression of CD19+CD5+CD1dhighin PPs at different periods of T.spiralis infection1.3.8 旋毛蟲感染脾中誘導 TGF-β1 的情況在旋毛蟲感染后，檢測了小鼠脾臟淋巴細胞中 CD19+CD5+CD1dhigh細胞表達 TGF-β1情況，結(jié)果表明在 28 天時，TGF-β1 表達量達到了頂峰，占 CD19+CD5+CD1dhigh細胞 4.25%左右，如圖 1.8。

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本文編號：2815310