培育有重大價(jià)值的農(nóng)用實(shí)驗(yàn)動(dòng)物,是豐富實(shí)驗(yàn)動(dòng)物新資源的重要內(nèi)容。我國是全國最大的鴨生產(chǎn)國,疾病對(duì)養(yǎng)殖業(yè)危害嚴(yán)重。標(biāo)準(zhǔn)化的無特定病原體鴨是農(nóng)業(yè)領(lǐng)域科學(xué)研究和多種生物制品研發(fā)、生產(chǎn)與檢定等環(huán)節(jié)重要的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物和原材料。本研究以培育中的F1代金定鴨(A、B、C、D 4個(gè)家系)為基礎(chǔ),開展培育研究。種群培育采用鴨用隔離器飼養(yǎng)、高效濾過空氣、鈷60輻照飼料、飲用酸化水、嚴(yán)格控制人流物流等方式阻斷外界環(huán)境污染和再感染途徑。目前,種群已培育到F3代。整體鴨群共有鴨461只,產(chǎn)蛋母鴨388只。該種群命名為HJD-SPF鴨。本研究對(duì)種群主要開展了微生物學(xué)、遺傳學(xué)和飼料營養(yǎng)學(xué)檢測(cè)3方面的研究。微生物學(xué)方面,通過定期全群普查檢測(cè)病原微生物攜帶情況,淘汰陽性個(gè)體,在鴨群中凈化了I型鴨肝炎病毒、鴨瘟病毒、鴨圓環(huán)病毒、鴨坦布蘇病毒、鵝細(xì)小病毒、禽白血病病毒、禽呼腸孤病毒、禽流感病毒(H5亞型(Re8株)、H7亞型、H9亞型)、新城疫病毒、禽腺病毒III型等共10種病原。遺傳學(xué)方面,利用17對(duì)微衛(wèi)星標(biāo)記對(duì)該群體的遺傳多樣性進(jìn)行了評(píng)估,結(jié)果發(fā)現(xiàn),該群體中有13個(gè)位點(diǎn)呈高度多態(tài)(PIC0.5),平均雜合度為0.5816±0.0142,12個(gè)位點(diǎn)顯著偏離Hardy-Weinberg平衡(P0.01),符合封閉群培育和選育的遺傳學(xué)特點(diǎn)。另外,發(fā)現(xiàn)SPF金定鴨對(duì)DHV-I和DPV強(qiáng)毒株易感;并發(fā)現(xiàn)SPF金定鴨鴨胚對(duì)DHV-I和DPV敏感,測(cè)得ELD_(50)和TCID_(50)分別為10~(-4.6)和10~(-4.8);采用組織消化培養(yǎng)法從SPF金定鴨鴨胚臍帶中分離得到鴨胚臍來源的干細(xì)胞,建立鴨胚臍帶來源的干細(xì)胞系。將DPV(CSC株)接種到鴨胚臍帶來源的干細(xì)胞上,并對(duì)其進(jìn)行傳代培養(yǎng)。通過病變觀察、PCR檢測(cè)、IFA檢測(cè)、細(xì)胞切片中病毒粒子電鏡觀察等分析DPV在鴨胚臍帶來源的干細(xì)胞上的增殖特性。結(jié)果顯示,DPV(CSC株)首次接種于鴨胚臍帶來源的干細(xì)胞上,即產(chǎn)生了病變,隨著在鴨胚臍帶來源的干細(xì)胞上連續(xù)傳代,病變能夠穩(wěn)定存在。鴨胚臍帶來源的干細(xì)胞上增殖的DPV的F1-F35均擴(kuò)增出大小為416 bp的UL6基因片段。間接免疫熒光檢測(cè)進(jìn)一步證實(shí)了兔抗DPV的陽性血清能夠?qū)θ径镜募?xì)胞產(chǎn)生特異性免疫熒光。細(xì)胞切片的電鏡觀察能夠看見細(xì)胞間隙和細(xì)胞囊泡內(nèi)以及細(xì)胞質(zhì)中均可觀察到裝配完整和裝配不完整的病毒粒子。以上結(jié)果表明DPV能夠在鴨胚臍帶來源的干細(xì)胞上增殖。綜上,我們初步建立了無特定病原體、遺傳學(xué)背景清晰、疫病敏感的標(biāo)準(zhǔn)化SPF金定鴨鴨群,并建立了能夠用于DPV增殖的鴨胚臍帶來源的干細(xì)胞系。
【學(xué)位單位】：東北農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：S834
【部分圖文】：

群繁育以本實(shí)驗(yàn)室培育中的 F1 代金定鴨（A、B、C、D 4 個(gè)家系）為基礎(chǔ)，開培育流程見圖 3-1。培育的雛鴨自 1 日齡起即飼養(yǎng)在隔離器中。每只鴨標(biāo)蹤監(jiān)測(cè)。種群采用高效濾過空氣、鈷 60 輻照飼料、飲用酸化水、嚴(yán)格控阻斷外界環(huán)境污染和再感染途徑。采用隨機(jī)交配法，繁育子代。F1 代飼，選留受精卵，繁育 F2 代。每隔 1 年繁育 Fn+1 代。繁育 Fn 代時(shí)，根據(jù) 3 倍終數(shù)量的 Fn 代雛鴨（即每個(gè)家系雄鴨（♂）10 只，雌鴨（♀）36 只）終保種鴨。每個(gè)家系，每個(gè)隔離器保種情況見表 3-1。

果與分析PF 金定鴨種群規(guī)模研究以本實(shí)驗(yàn)室培育中的 F1 代金定鴨為基礎(chǔ)，開展培育研究。每一年傳代一個(gè)世代經(jīng)過連續(xù)多次的種群微生物學(xué)篩查后，留取最終保種鴨。每個(gè)世代每個(gè)家系保于至少 2 臺(tái)隔離器中見圖 4-1。SPF 金定鴨種群保種情況見表 4-1。另外，選育過一部分經(jīng)微生物學(xué)篩查合格的鴨轉(zhuǎn)移至屏障環(huán)境飼養(yǎng)，作為生產(chǎn)群。目前，SPF 金B(yǎng)、C、D 4 個(gè)家系保種群共有 193 只，產(chǎn)蛋母鴨 144 只；屏障環(huán)境中共有鴨 268 鴨 244 只。F3 代繁育中，整體鴨群共有鴨 461 只，產(chǎn)蛋母鴨 388 只。該種群命名F 鴨。

結(jié)果見表 4-3。F1 代第三次 PCR 檢測(cè)結(jié)果圖見附錄 A，前該種群已排除 10 種病原，該種群經(jīng)過初步凈化，已達(dá)到 SPF 級(jí)表 4-2 SPF 金定鴨種群微生物學(xué)檢測(cè)情況Tab.4-2 Microbiological detection of SPF Jinding ducks population Time (year/month) Weeks Detection of 15/10 4716/01 1616/03 2416/06 3616/09 4817/04 7217/09 9217/01 4417/04 1617/09 3618/01 5218/01 8 1

【參考文獻(xiàn)】

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1 銀鳳桂;李晶;張爽;余萌;張萬林;范國兵;董秀凱;劉文軍;;鴨病毒性肝炎二價(jià)滅活疫苗(DHAV-SH和DHAV-FS株)的制備和評(píng)價(jià)[J];生物工程學(xué)報(bào);2015年11期

2 盧順;高其雙;劉武;陳志華;周莉;占才耀;童偉文;陶弼菲;夏瑜;王蓮芳;華娟;;鴨胚腎細(xì)胞用于鴨肝炎弱毒增殖的研究[J];湖北農(nóng)業(yè)科學(xué);2015年16期

3 何潔;趙晶;王金祥;蔡學(xué)敏;龐榮清;潘興華;;多次貼壁法高效制備人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞[J];西南國防醫(yī)藥;2015年08期

4 尹雅姝;谷業(yè)新;黃金鳳;;猴體神經(jīng)毒力試驗(yàn)在減毒活疫苗安全性評(píng)價(jià)中的應(yīng)用[J];中國生物制品學(xué)雜志;2015年07期

5 叢秋實(shí);胡瑞鴻;李叔偉;;鴨病毒性肝炎活疫苗(CH60株)的田間免疫效果評(píng)價(jià)[J];廣東畜牧獸醫(yī)科技;2015年03期

6 咼霞;游秋云;王平;;3種不同睡眠剝奪小鼠模型的建立及其在中醫(yī)藥研究中的應(yīng)用[J];湖北中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào);2014年06期

7 孟超;李寶臣;葉曼曼;周飛;李肖梁;方維煥;;鴨傳染性漿膜炎二價(jià)滅活疫苗的效果評(píng)價(jià)研究[J];浙江畜牧獸醫(yī);2014年06期

8 唐婉琴;;雛鴨副傷寒病的病因、診斷與治療[J];養(yǎng)殖技術(shù)顧問;2014年05期

9 劉鈞;翟新驗(yàn);;SPF級(jí)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物在獸用疫苗檢定中的應(yīng)用[J];實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科學(xué);2014年02期

10 張艷芳;謝芝勛;謝麗基;劉加波;龐耀珊;鄧顯文;謝志勤;范晴;羅思思;;鴨坦布蘇病毒與鴨瘟病毒二重RT-PCR檢測(cè)方法的建立[J];南方農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào);2014年02期

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1 張曉娜;武永淑;吳少蓮;廉傳江;文輝強(qiáng);陳洪巖;韓凌霞;;MHC單倍型SPF鴨的培育及其TAP基因組序列分析[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)2014年學(xué)術(shù)年會(huì)論文集[C];2014年

2 付玉志;張洪輝;李傳峰;陳宗艷;王超;陳鐵橋;劉光清;;1型鴨肝炎病毒在鴨胚成纖維細(xì)胞中的增殖特性研究[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)獸醫(yī)公共衛(wèi)生學(xué)分會(huì)第三次學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2012年

3 王笑言;張大丙;;鴨星狀病毒RT-PCR方法的建立與應(yīng)用[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)禽病學(xué)分會(huì)第十五次學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2010年

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1 帕提古麗·吾馬爾;鴨疫里氏桿菌分離株抗原性分析及乳膠凝集試驗(yàn)的建立[D];中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2013年

2 張文韜;基于量子點(diǎn)的禽流感病毒檢測(cè)新方法探索[D];武漢大學(xué);2010年

3 吳信生;利用微衛(wèi)星技術(shù)分析中國部分地方雞品種遺傳多樣性及其與生產(chǎn)性能的關(guān)系[D];揚(yáng)州大學(xué);2004年

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1 崔嘉琦;DHAV-1和DHAV-3感染SPF紹鴨胚M(jìn)x基因表達(dá)差異的研究[D];東北農(nóng)業(yè)大學(xué);2017年

2 劉樂;人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞的分離培養(yǎng)及其多向分化潛能的研究[D];內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué);2017年

3 欒璐;一步反轉(zhuǎn)錄FRET-qPCR檢測(cè)甲型流感病毒方法的建立及應(yīng)用[D];揚(yáng)州大學(xué);2016年

4 李奇;H5N1亞型禽流感病毒感染鴨胚成纖維細(xì)胞miRNA表達(dá)譜的研究[D];華南農(nóng)業(yè)大學(xué);2016年

5 余華瓊;永生化人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞對(duì)常見病毒的易感性研究[D];北京工業(yè)大學(xué);2016年

6 趙丹丹;鴨瘟病毒gB蛋白單克隆抗體的制備及膠體金試紙條檢測(cè)方法的建立和應(yīng)用[D];山東農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

7 崔京騰;鴨源新城疫病毒的分離鑒定及其對(duì)SPF鴨免疫機(jī)能的影響[D];山東農(nóng)業(yè)大學(xué);2013年

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本文編號(hào)：2812088