發(fā)布時(shí)間：2020-09-02 17:41

　　 水牛奶被譽(yù)為“奶中之王、乳中珍品”,具有較高的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值和經(jīng)濟(jì)價(jià)值,但其泌乳的分子機(jī)制尚不清楚。為此,本實(shí)驗(yàn)利用iTRAQ定量蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)對(duì)亞熱帶地區(qū)河流型水牛與荷斯坦奶牛的乳清蛋白、脂肪球膜蛋白進(jìn)行差異蛋白質(zhì)組學(xué)分析,為了解水牛奶與奶牛奶蛋白質(zhì)層面的差異以及相關(guān)分子機(jī)理研究奠定了基礎(chǔ)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下:(1)對(duì)泌乳中期的河流型水牛與荷斯坦奶牛的乳清蛋白和脂肪球膜蛋白進(jìn)行了 iTRAQ質(zhì)譜檢測(cè),獲得了乳清蛋白與脂肪球膜蛋白的蛋白質(zhì)差異表達(dá)譜。共鑒定到346個(gè)乳清蛋白,篩選得到42個(gè)顯著差異表達(dá)蛋白;共鑒定到370個(gè)脂肪球膜蛋白,篩選得到36個(gè)顯著差異表達(dá)蛋白。(2)對(duì)顯著差異表達(dá)蛋白進(jìn)行了生物信息學(xué)分析,發(fā)現(xiàn)乳清顯著差異表達(dá)蛋白主要富集的GO條目是防御反應(yīng),細(xì)胞溶解,細(xì)胞外區(qū)域,補(bǔ)體激活,抵抗細(xì)菌,對(duì)有機(jī)物的應(yīng)激反應(yīng),維生素結(jié)合和轉(zhuǎn)運(yùn),酶調(diào)控活性和受體代謝過(guò)程;主要富集的KEGG代謝通路是溶酶體和補(bǔ)體和凝血級(jí)聯(lián)。脂肪球膜顯著差異表達(dá)蛋白主要富集的GO條目是細(xì)胞外區(qū)域,硫化合物結(jié)合,對(duì)細(xì)菌的防御反應(yīng),蛋白質(zhì)-脂質(zhì)復(fù)合物,脂蛋白顆粒,脂質(zhì)生物合成過(guò)程和乙醇生物合成過(guò)程;沒有顯著富集的KEGG代謝通路。(3)對(duì)乳清與脂肪球膜顯著差異表達(dá)蛋白進(jìn)行STRING蛋白質(zhì)相互作用網(wǎng)絡(luò)分析,發(fā)現(xiàn)血清白蛋白(ALB)在網(wǎng)絡(luò)中形成明顯的節(jié)點(diǎn),其與多種乳清蛋白和脂肪球膜蛋白都有相互作用,預(yù)示它可能對(duì)泌乳生理有著重要的作用。(4)對(duì)篩選的顯著差異表達(dá)蛋白進(jìn)行層次聚類分析,從熱圖中可以看出三次生物學(xué)重復(fù)性較好,差異蛋白的表達(dá)量與質(zhì)譜結(jié)果一致;對(duì)乳鐵蛋白(Lactoferrin,LTF)和黃嘌呤氧化酶(Xanthine dehydrogenase,XDH)進(jìn)行western blot檢測(cè),其在水牛與奶牛蛋白樣品中的表達(dá)量與質(zhì)譜結(jié)果相一致。通過(guò)生物信息學(xué)分析,預(yù)測(cè)水牛奶與奶牛奶的乳清差異蛋白與抗病力(KNG2,C3和C7)和乳品存儲(chǔ)時(shí)間(LGMN,NAGA,PSAP,NPC2)相關(guān)。脂肪球膜差異蛋白與乳脂生物合成(CYB5R3,APOA1,APOE)相關(guān)。
【學(xué)位單位】：廣西大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：S823
【部分圖文】：

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？然后將不同標(biāo)記細(xì)胞的裂解蛋白等比例混合，經(jīng)分離、純化后進(jìn)行質(zhì)譜鑒定，根據(jù)逡逑一級(jí)質(zhì)譜圖中兩個(gè)同位素型肽段的面積比較進(jìn)行相對(duì)定量，屬于體內(nèi)代謝標(biāo)記法［６５］。實(shí)逡逑驗(yàn)操作流程見圖１－３。？逡逑ＳＩＬＡＣ屬于體內(nèi)標(biāo)記技術(shù)，更接近樣品真實(shí)狀態(tài)，在分離或純化之前蛋白質(zhì)已經(jīng)被逡逑標(biāo)記上，這極大地減少了樣品前處理引起的誤差。標(biāo)記效率高達(dá)１００％，且標(biāo)記效果穩(wěn)逡逑定，不僅適合于進(jìn)行全細(xì)胞蛋白分析，還適合于膜蛋白的鑒定和定量，每個(gè)樣本只需要逡逑幾十微克的蛋白量\�。辶x希保板義

本文編號(hào)：2810907