豬流行性腹瀉(Porcine epidemic diarrhea,PED)是由豬流行性腹瀉病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)引起豬的一種急性、接觸性腸道傳染病,以腹瀉、嘔吐、脫水、急性腸炎為特征。近年來PEDV導致大批仔豬死亡,給養(yǎng)豬業(yè)造成了巨大經濟損失,但目前對其感染免疫機制的了解尚不深入。趨化因子是募集白細胞至感染部位的一類低分子量蛋白質,其趨化作用是炎癥發(fā)生過程中重要的起始步驟,也是機體天然免疫功能的一個重要方面。本研究圍繞PEDV感染免疫選題,通過體內外試驗,探索趨化因子在PEDV感染中的作用,旨在為深入闡明PEDV的感染免疫機制提供科學依據。將6頭21日齡健康仔豬隨機分為PEDV強毒株感染組和陰性對照組。感染組每頭口服接種1.5×10~(6.6) TCID_(50)的PEDV;對照組接種等體積的細胞維持液。感染后3 d應用基因表達譜芯片技術和FQ-PCR檢測回腸組織中趨化因子mRNA的表達量。結果表明,感染豬回腸組織中趨化因子MCP-1、MIP-1β、IL-8、CXCL9、CXCL10、CXCL13的mRNA表達水平顯著上調(P0.05)。為了驗證PEDV強毒株感染宿主細胞后趨化因子表達水平的變化,將IPEC-J2細胞分為HBQY2016強毒株感染組、CV777弱毒株感染組、LPS陽性對照組和陰性對照組。兩個病毒感染組分別接種0.5 MOI的HBQY2016強毒株和CV777弱毒株,陽性對照組用10μg/mL的LPS刺激,陰性對照組加入等體積的維持液。感染后18~20 h收集細胞,兩個病毒感染組的MCP-1、MIP-1β、IL-8、CXCL9和CXCL13 mRNA的表達水平顯著上升(P0.05),細胞上清中MCP-1、MIP-1β、IL-8、CXCL9、CXCL10、CXCL13水平顯著升高(P0.05)。為了進一步闡明趨化因子在PEDV感染中的作用,設計合成并篩選了分別對MCP-1、CXCL9、CXCL13具有較高抑制活性的siRNA,并將IPEC-J2細胞分為PEDV感染組(強/弱毒株)、siRNA干擾-(強/弱毒株)感染組、siRNA陰性(NC)-PEDV(強/弱毒株)感染對照組和陰性對照組。通過Transwell趨化試驗和流式細胞術分析,與病毒感染組相比,MCP-1干擾-HBQY2016強毒株和CV777弱毒株感染組細胞下室內CD14~+單核細胞的個數分別下降400個細胞(P0.05)和1152個細胞(P0.05);CXCL9干擾-HBQY2016強毒株和CV777弱毒株感染組的CD3~+CD4~-CD8~-γδT、CD3~+CD4~-CD8~+Tc、CD3~+CD4~+CD8~-Th和CD3~+CD4~+CD8~+Tm細胞亞群分別平均下降677、258、718、207個細胞和2605、533、2729、949個細胞(P0.05);CXCL13干擾-HBQY2016強毒株和CV777弱毒株感染組的CD19~+B細胞亞群分別平均下降279個細胞和164個細胞(P0.05)。上述實驗證明,PEDV強毒株感染引起趨化因子(MCP-1、MIP-1β、IL-8、CXCL9、CXCL10、CXCL13)表達量顯著上調。強/弱毒株誘導產生的MCP-1對CD14~+單核細胞,CXCL9對CD3~+CD4~-CD8~-γδT、CD3~+CD4~-CD8~+Tc、CD3~+CD4~+CD8~-Th和CD3~+CD4~+CD8~+Tm細胞亞群,CXCL13對CD19~+B細胞具有趨化作用。
【學位單位】：河北農業(yè)大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2018
【中圖分類】：S858.28

【參考文獻】

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本文編號：2809479