豬流行性腹瀉(porcine epidemic diarrhea,PED)是由豬流行性腹瀉病毒(PE DV)引起的一種急性、高度接觸性腸道傳染病。該病毒是導(dǎo)致初生仔豬腹瀉和死亡的主要致病原之一。成熟的初始B細(xì)胞能識(shí)別抗原,活化、增殖并分化成漿細(xì)胞,合成和分泌抗體而發(fā)揮清除病原體的作用。目前對(duì)于PEDV誘導(dǎo)B細(xì)胞免疫應(yīng)答的機(jī)制尚不清楚,本研究通過(guò)體外實(shí)驗(yàn),探究了來(lái)自不同年齡豬的B細(xì)胞分別對(duì)PEDV強(qiáng)毒株和弱毒株刺激后的免疫應(yīng)答效應(yīng),旨在為深入闡明PEDV的感染免疫機(jī)制奠定基礎(chǔ)。為了明確PEDV對(duì)B細(xì)胞的激活作用。分別采集初生仔豬、保育豬、成年母豬的前腔靜脈血,采用密度梯度離心技術(shù)結(jié)合免疫磁珠分選細(xì)胞法,從外周血中分選CD21~+B細(xì)胞。用PEDV強(qiáng)毒株QY2016和弱毒株CV777分別感染不同年齡豬的B細(xì)胞,感染后24 h應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)分析B細(xì)胞表面分子MHC II、CD80、CD54、CD27及mIgM的表達(dá)水平。強(qiáng)毒株QY2016和CV777株均不能刺激各年齡豬B細(xì)胞中表達(dá)表面分子MHC II、CD80和mIgM的細(xì)胞增加,但能引起初生仔豬B細(xì)胞表達(dá)協(xié)同刺激分子CD54與CD27的含量顯著上升。野毒株QY2016感染組中M HC II~+、CD80~+、mIgM~+及mIgM~+CD27~+B細(xì)胞含量低于弱毒株CV777感染組。感染后0 h、24 h和48 h,應(yīng)用ELISA檢測(cè)細(xì)胞上清中IL-1、IL-22、IL-4、I L-6、IL-10、IFN-α、GM-CSF、M-CSF、IFN-α和TGF-β的表達(dá)水平。QY2016株和CV777引起均能引起初生仔豬B細(xì)胞分泌IFN-α和GM-CSF,保育豬B細(xì)胞分泌IL-1、IFN-α、IL-4,成年母豬分泌TGF-β,均不能引起各年齡豬的B細(xì)胞分泌I L-6和IL-10。其他細(xì)胞因子的分泌在不同毒株和不同年齡之間不同,但相對(duì)于仔豬和母豬,保育豬的B細(xì)胞分泌細(xì)胞因子的種類(lèi)較多。感染后0 d、4 d和7 d,通過(guò)ELISA測(cè)定細(xì)胞上清中的IgM、IgA和IgG的含量,強(qiáng)毒株QY2016僅能夠誘導(dǎo)保育豬B細(xì)胞分泌IgM和IgG。弱毒株CV777能誘導(dǎo)保育豬的B細(xì)胞可分泌IgM、IgA,母豬B細(xì)胞分泌IgA和IgG。強(qiáng)毒株和弱毒株均不能誘導(dǎo)初生仔豬B細(xì)胞分泌IgM、IgA和IgG。上述結(jié)果表明,PEDV誘導(dǎo)的B細(xì)胞表面分子表達(dá)、細(xì)胞因子與抗體應(yīng)答與豬的年齡和毒株毒力的強(qiáng)弱密切相關(guān)。與弱毒株相比,強(qiáng)毒株刺激B細(xì)胞后的應(yīng)答效應(yīng)較弱,初生仔豬和母豬B細(xì)胞對(duì)PEDV的應(yīng)答反應(yīng)較保育豬低。
【學(xué)位單位】：河北農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類(lèi)】：S852.4
【部分圖文】：

河北農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位（畢業(yè)）論文3 結(jié)果3.1 病毒蝕斑及 TCID50PEDV 感染 Vero-81 細(xì)胞后約 96 h 出現(xiàn)蝕斑。如圖 1 所示，病毒蝕斑在顯微鏡下觀察，細(xì)胞培養(yǎng)液本身含有酚紅呈現(xiàn)顏色，而病毒蝕斑形成的局限性病變細(xì)胞區(qū)邊緣呈現(xiàn)細(xì)胞核聚集現(xiàn)象、中央細(xì)胞大部分脫落。挑取蝕斑，將其接種 Vero-81 細(xì)胞，并進(jìn)行傳代，取 PEDV QY Clone F6 代細(xì)胞毒做 10-1~10-7稀釋接種到 Vero-81 細(xì)胞，同時(shí)設(shè)置不接毒的陰性對(duì)照。感染后 120 h，按照 Reed-Muench 法計(jì)算該病毒液的 TCID50，TCID50=104.65/0.1 mL=105.65/mL。

豬流行性腹瀉病毒誘導(dǎo)的 B 細(xì)胞免疫應(yīng)答研究表 1 初生仔豬 B 細(xì)胞感染 PEDV 后 CD54+、CD80+、MHC-Ⅱ+細(xì)胞的百分1 The percentage of CD54+, CD80+and MHC-Ⅱ+cells in neonatal pigs B cells infectelesQY 2016 感染組QY 2016 groupCV777 感染組CV777 groupN3.966±0.757a2.833±1.193ab13.650±2.050 22.500±2.121B225.850±7.566 41.050±5.161C4小寫(xiě)字母分別表示差異極顯著和差異顯著（P<0.01 或<0.001 和差異顯著 P<0.05）.ts (majuscule and minuscule) indicates significant differences (P<0.01or 0.001 and P<0.05) between gr

河北農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位（畢業(yè)）論文表 2 初生仔豬感染 PEDV 后 IgM+、CD27+、IgM+CD27+細(xì)胞Table 2 IgM+, IgM+CD27+cells in neonnate pig infected with PEDV組別GroupsQY 2016 感染組QY 2016 groupCV777 感染組CV777 group陰性對(duì)照Negative controlIgM+16.600±0.141 32.500±1.555A30.000±0.870aCD27+66.300±12.020 52.000±2.121 47.000±3.959IgM+CD27+3.750±0.919 8.750±0.070B2.900±0.282注：與 QY 2016 感染組相比，上標(biāo)大寫(xiě)、小寫(xiě)字母分別表示差異極顯著（P<0.05 和差異顯著 P<0.01）Note: Compared with the PEDV QY infection group, Superccripts(majuscule or minuscule) indicates significates differences(P<0.01or P<0.05)between gruopsQY 2016CV777

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本文編號(hào)：2807544