【摘要】：旨在獲得牦牛IMPDH基因序列并進(jìn)行生物信息學(xué)分析,同時(shí)分析其在卵巢組織中的時(shí)序表達(dá)譜,為進(jìn)一步研究卵巢生長(zhǎng)發(fā)育及排卵機(jī)制奠定基礎(chǔ)。通過RT-PCR技術(shù)克隆牦牛的IMPDH基因,并運(yùn)用生物信息學(xué)方法分析不同物種序列進(jìn)化關(guān)系,利用熒光定量qRT-PCR技術(shù)檢測(cè)IMPDH基因在不同發(fā)育時(shí)期牦牛卵巢組織中的表達(dá)情況。結(jié)果顯示,克隆得到牦牛1 623bp的IMPDH基因cDNA序列,內(nèi)含1 545bp開放閱讀框序列,編碼514個(gè)氨基酸殘基。與野牦牛的相應(yīng)序列具有很高的同源性(99.4%),表明IMPDH基因在進(jìn)化過程中相對(duì)保守。實(shí)時(shí)定量RT-PCR檢測(cè)結(jié)果顯示IMPDH基因的表達(dá)隨年齡的增加而呈現(xiàn)上升趨勢(shì)。熒光定量qRT-PCR檢測(cè)結(jié)果顯示IMPDH基因在卵巢卵泡期表達(dá)最強(qiáng),顯著高于紅體形成期。結(jié)果表明IMPDH參與牦牛卵巢組織的生長(zhǎng)發(fā)育,并在卵巢活動(dòng)中有明顯的表達(dá)規(guī)律,表明IMPDH基因在牦牛繁殖周期具有重要作用,為進(jìn)一步研究牦牛IMPDH基因功能奠定基礎(chǔ)。
【圖文】：

１３２２０１．４９３．０貓ＦｅｌｉｓｃａｔｕｓＸＭ＿００３９８２２１０．３９３．１馬ＥｑｕｕｓｃａｂａｌｌｕｓＸＭ＿００１４９４５５０．４９２．９獼猴ＭａｃａｃａｍｕｌａｔｔａＸＭ＿０１５１３０９５３．１９０．５人ＨｏｍｏｓａｐｉｅｎｓＮＭ＿０００８８４．２９０．５小鼠ＭｕｓｍｕｓｃｕｌｕｓＮＭ＿０１１８３０．３８８．０原雞ＧａｌｌｕｓｇａｌｌｕｓＮＭ＿００１０３０６０１．１７９．６斑馬魚ＤａｎｉｏｒｅｒｉｏＮＭ＿２０１４６４．１７４．４圖２牦牛ＩＭＰＤＨ進(jìn)化樹分析Ｆｉｇ．２ＹａｋＩＭＰＤＨｅｖｏｌｕｔｉｏｎａｒｙｔｒｅｅａｎａｌｙｓｉｓ圖中藍(lán)色線代表α－螺旋Ｂｌｕｅｌｉｎｅｓｒｅｐｒｅｓｅｎｔα－ｈｅｌｉｘ，綠色線代表β－折疊Ｇｒｅｅｎｌｉｎｅｓｒｅｐｒｅｓｅｎｔβ－ｓｈｅｅｔ，紫色線代表無(wú)規(guī)則卷曲Ｐｕｒｐｌｅｌｉｎｅｓｒｅｐｒｅｓｅｎｔｒａｎｄｏｍｃｏｉｌ，紅色線代表延伸鏈Ｒｅｄｌｉｎｅｓｒｅｐｒｅｓｅｎｔｅｘｔｅｎｄｅｄｓｔｒａｎｄ圖３牦牛ＩＭＰＤＨ氨基酸序列二級(jí)結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)Ｆｉｇ．３ＰｒｅｄｉｃｔｅｄｓｅｃｏｎｄａｒｙｓｔｒｕｃｔｕｒｅｏｆａｍｉｎｏａｃｉｄｓｅｑｕｅｎｃｅｏｆｙａｋＩＭＰＤＨ·８１５６期熊顯榮等：·ＩＭＰＤＨ基因克壟生物信息學(xué)分析及在牦牛卵巢不同時(shí)期中的差異表達(dá)

圖４牦牛ＩＭＰＤＨ氨基酸序列三級(jí)結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)Ｆｉｇ．４ＰｒｅｄｉｃｔｅｄｔｅｒｔｉａｒｙｓｔｒｕｃｔｕｒｅｏｆａｍｉｎｏａｃｉｄｓｅｑｕｅｎｃｅｏｆｙａｋＩＭＰＤＨ２．３ＩＭＰＤＨ基因的時(shí)序表達(dá)譜實(shí)時(shí)定量ＲＴ－ＰＣＲ結(jié)果顯示，ＩＭＰＤＨ基因在牦牛卵巢組織的表達(dá)豐度隨牦牛胎齡和年齡的增長(zhǎng)呈上升趨勢(shì)，成年后空懷的牦牛表達(dá)顯著高于胎兒期（圖５），但是３歲和６歲牦牛間差異不顯著。２．４ＩＭＰＤＨ基因在牦牛卵巢活動(dòng)中的表達(dá)為進(jìn)一步研究ＩＭＰＤＨ基因在卵巢活動(dòng)中１～３泳道依次為３月齡、６月齡和９月齡胎牛，４～６泳道依次為２歲、３歲和６歲成年牛卵巢組織Ｌｉｎｅ１－３ｒｅｐｒｅｓｅｎｔｓｏｖａｒｉｅｓｏｆ３－ｍｏｎｔｈ，６－ｍｏｎｔｈａｎｄ９－ｍｏｎｔｈｙａｋｆｅｔａｌ，ｌｉｎｅ４－６ｒｅｐｒｅｓｅｎｔｓｔｈｅｏｖａｒｉｅｓｏｆ２－ｙｅａｒ，３－ｙｅａｒａｎｄ６－ｙｅａｒｏｆａｄｕｌｔｙａｋ，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ圖５ＲＴ－ＰＣＲ檢測(cè)不同發(fā)育階段牦牛卵巢ＩＭＰＤＨｍＲＮＡ表達(dá)量Ｆｉｇ．５ＲＴ－ＰＣＲａｎａｌｙｓｉｓｏｆｙａｋＩＭＰＤＨｍＲＮＡｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｉｎｙａｋｆｅｔａｌａｎｄａｄｕｌｔｓｏｖａｒｉｅｓｏｆｄｉｆｆｅｒｅｎｔｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｌｓｔａｇｅｓ的表達(dá)情況，以ＧＡＰＤＨ為參照進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量分析。熒光定量的擴(kuò)增曲線和熔解曲線見圖６。結(jié)果表明，ＩＭＰＤＨ在牦牛卵泡期卵巢中表達(dá)量顯著高于排卵后的紅體形成期及黃體形成期（Ｐ＜０．０５），其中在牦牛紅體形成期的卵巢組織中表達(dá)量最低，與卵泡期卵巢組織中Ｉ

歲牦牛間差異不顯著。２．４ＩＭＰＤＨ基因在牦牛卵巢活動(dòng)中的表達(dá)為進(jìn)一步研究ＩＭＰＤＨ基因在卵巢活動(dòng)中１～３泳道依次為３月齡、６月齡和９月齡胎牛，４～６泳道依次為２歲、３歲和６歲成年牛卵巢組織Ｌｉｎｅ１－３ｒｅｐｒｅｓｅｎｔｓｏｖａｒｉｅｓｏｆ３－ｍｏｎｔｈ，６－ｍｏｎｔｈａｎｄ９－ｍｏｎｔｈｙａｋｆｅｔａｌ，ｌｉｎｅ４－６ｒｅｐｒｅｓｅｎｔｓｔｈｅｏｖａｒｉｅｓｏｆ２－ｙｅａｒ，３－ｙｅａｒａｎｄ６－ｙｅａｒｏｆａｄｕｌｔｙａｋ，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ圖５ＲＴ－ＰＣＲ檢測(cè)不同發(fā)育階段牦牛卵巢ＩＭＰＤＨｍＲＮＡ表達(dá)量Ｆｉｇ．５ＲＴ－ＰＣＲａｎａｌｙｓｉｓｏｆｙａｋＩＭＰＤＨｍＲＮＡｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｉｎｙａｋｆｅｔａｌａｎｄａｄｕｌｔｓｏｖａｒｉｅｓｏｆｄｉｆｆｅｒｅｎｔｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｌｓｔａｇｅｓ的表達(dá)情況，以ＧＡＰＤＨ為參照進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量分析。熒光定量的擴(kuò)增曲線和熔解曲線見圖６。結(jié)果表明，ＩＭＰＤＨ在牦牛卵泡期卵巢中表達(dá)量顯著高于排卵后的紅體形成期及黃體形成期（Ｐ＜０．０５），其中在牦牛紅體形成期的卵巢組織中表達(dá)量最低，與卵泡期卵巢組織中ＩＭＰＤＨ的表達(dá)差異極顯著（Ｐ＜０．０１）。Ａ．?dāng)U增曲線，Ｂ．熔解曲線，Ｃ．表達(dá)水平柱狀圖，不同字母（ａ－ｃ）表示差異顯著（Ｐ＜０．０５）Ａ，ＢａｎｄＣｒｅｐｒｅｓｅｎｔａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎｃｕｒｖｅ，ｍｅｌｔｉｎｇｃｕｒｖｅａｎｄｈｉｓｔｏｇｒａｍｏｆｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ；ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｌｅｔｔｅｒｓｓｈｏｗｓ

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 劉亞彬;何孔旺;倪艷秀;周俊明;張雪寒;陸承平;;豬鏈球菌2型IMPDH基因功能結(jié)構(gòu)域的研究[J];揚(yáng)州大學(xué)學(xué)報(bào)(農(nóng)業(yè)與生命科學(xué)版);2009年02期

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前2條

1 段志濤;豬鏈球菌2型IMPDH基因的克隆表達(dá)及相關(guān)生物學(xué)特性鑒定[D];南京農(nóng)業(yè)大學(xué);2006年

2 劉亞彬;豬鏈球菌2型IMPDH基因功能結(jié)構(gòu)域的確定[D];南京農(nóng)業(yè)大學(xué);2007年

本文編號(hào)：2805704