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SOX5影響小鼠皮膚黑色素細胞MITF-M表達和黑色素生成

發(fā)布時間:2020-08-26 05:04
【摘要】:旨在探討SOX5在小鼠皮膚毛色中的作用。本研究隨機選取出生后12d的C57BL/6品系黑色、棕色、灰色小鼠各3只,采用實時熒光定量PCR、Western blotting和免疫組織化學(xué)方法對SOX5在黑色、棕色和灰色小鼠皮膚中的表達差異進行分析;并構(gòu)建SOX5真核表達載體;運用體外轉(zhuǎn)染的方法,轉(zhuǎn)染小鼠黑色素細胞并檢測與色素形成相關(guān)基因的表達水平,同時測定黑色素含量。結(jié)果表明:1)SOX5在不同毛色小鼠皮膚中均有表達,SOX5在黑色和灰色小鼠皮膚中mRNA和蛋白相對表達量高于棕色小鼠皮膚,均差異極顯著(P0.01);且其主要表達部位為毛囊外根鞘。2)轉(zhuǎn)染組與空載組相比,MITF-M、TYR、TYRP1、TYRP2、PMEL、OA1表達量均顯著(P0.05)或極顯著(P0.01)升高,黑色素含量也極顯著增加(P0.01)。3)過表達MITF-M對SOX5存在負反饋作用。綜上表明,SOX5通過調(diào)控MITF-M影響色素的生成進而參與毛色的形成。
【圖文】:

黑色素細胞,轉(zhuǎn)染,過表達


膚黑色素細胞MITF-M表達和黑色素生成Control.正常黑色素細胞;Vector-GFP.轉(zhuǎn)染空載體的黑色素細胞;Vector-GFP-SOX5.轉(zhuǎn)染SOX5的黑色素細胞。下同Control.Normalmelanocytes;Vector-GFP.Themelanocytestransfectedwithemptyvector;Vector-GFP-SOX5.Themelano-cytestransfectedwithSOX5.Thesameasbelow圖3SOX5轉(zhuǎn)染后黑色素細胞的形態(tài)Fig.3MorphologyofmelanocytestransfectedbytheSOX52.5黑色素細胞中SOX5的轉(zhuǎn)染效率過表達SOX5后經(jīng)檢測空載組(Vector-GFP)與正常組(Control)中SOX5表達量無顯著差異,試驗組(Vector-GFP-SOX5)中SOX5mRNA升高18.80倍(P<0.01)(圖4A);蛋白升高1.69倍(P<0.05)(圖4B,C)。2.6SOX5與MITF-M表達的相互影響過表達SOX5后結(jié)果顯示:與空載組(Vector-GFP)對比,試驗組(Vector-GFP-SOX5)的MITF-MmRNA升高1.50倍(P<0.05)(圖5A);蛋白升高1.95倍(P<0.01)(圖5B,C)。為了進一步說明SOX5與MITF-M的關(guān)系,過表達MITF-M后使SOX5的mRNA降低1.34倍(P<0.05)(圖5D);蛋白降低

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本文編號:2804735

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