【摘要】：精液保存是人工授精技術(shù)的關(guān)鍵步驟之一。精液保存技術(shù)可使精液實現(xiàn)跨區(qū)域、跨時間的運輸和使用,在很大程度上提高了良種公畜的利用率,也對家畜品種的繁育與改良具有重要意義。目前山羊精液保存最常見的是低溫保存,但這項技術(shù)仍存在低溫保存效果差和時間短的問題。因此,提高山羊精液低溫保存效果和延長保存時間,對于推動山羊的良種繁育、增加后代數(shù)量意義重大。在精液的低溫保存過程中,稀釋液配方的不同以及精子發(fā)生脂質(zhì)過氧化反應(yīng)均會在很大程度上影響精液保存效果。為提高山羊精液低溫保存效果,篩選安全穩(wěn)定的稀釋液配方,并尋找對山羊精液低溫保存有積極作用的抗氧化劑,本試驗首先選取了5種不同的山羊低溫保存.稀釋液配方,通過對山羊精液稀釋并進(jìn)行低溫保存后精液質(zhì)量的對比,篩選出最優(yōu)配方;然后以最優(yōu)配方作為基礎(chǔ)稀釋液,在其中分別添加10、20、40、60、80 mg/L的蘋果多酚以及濃度為10、30、50、70mg/L的葡萄籽原花青素,檢測精子活率.、頂體完整率、質(zhì)膜.完整率、線粒體活性以及總抗氧化能力(T-AOC)、丙二醛(.MDA)含量,探討兩種抗氧化劑對山羊精液低溫保存的效果;最后聯(lián)合添加蘋果多酚+葡萄籽原花青素不同濃度組合40+0 mg/L、0+30 mg/L、20+10 mg/L、20+30 mg/L、40+10 mg/L、40+30 mg/L,探討兩種抗氧化劑的配伍效應(yīng)。本研究獲得的主要結(jié)果如下:1.五種不同配方山羊精液低溫保存稀釋液經(jīng)過篩選,“配方2”的保存效果最好。低溫保存5 d時,精子活率仍為45.42%,頂體完整率為61.26%,質(zhì)膜完整率為47.24%,線粒體活性為43.3%,均顯著高于其他試驗組(P0.05)。五個配方中精液保存各項指標(biāo)最低的為“配方1”,其各項指標(biāo)均顯著低于其他試驗組(P0.05)。另外,精子活率與頂體完整率相關(guān)性最高,為極顯著正相關(guān)(r=0.932,P0.01);精子活率與質(zhì)膜完整率為極顯著正相關(guān)(r=0.876,P0.01)。經(jīng)對比選擇,“配方2”效果最好,可作基礎(chǔ)液以供后續(xù)試驗使用。2.在“配方2”中加入一定濃度的蘋果多酚可提高精液保存質(zhì)量。蘋果多酚的最適添加濃度為40 mg/L,保存5 d時精子各項指標(biāo)均顯著大于其余各組(P0.05),其精子活率可達(dá)49.31%,頂體完整率達(dá)到66.23%,質(zhì)膜完整率為49.91%,線粒體活性為49.56%。而80 mg/L試驗組保存效果最差,不僅各項指標(biāo)均低于其余各組,而且保存5 d時精子頂體完整性、線粒體活性、T-AOC三個指標(biāo)中顯著低于對照組(P0.05)。3.在“配方2”中加入一定濃度葡萄籽原花青素可提高精液保存質(zhì)量。葡萄籽原花青素的最適添加濃度為30 mg/L,其各項指標(biāo)(MDA除外)在保存期間均最高,且5 d時精子活率、頂體完整率.、線粒體.活性、T-AOC顯著高于其他組(P0.05),其精子活率為51.46%,頂體完整率為67.55%,質(zhì)膜完整率為50.97%,線粒體活性為50.78%。而70 mg/L處理組較其他處理組保存質(zhì)量顯著降低(P0.05)。4.在“配方2”中聯(lián)合添加不同的濃度蘋果多酚+葡萄籽原花青素,結(jié)果表明20+10mg/L、20+30 mg/L、40+10 mg/L組均比單一添加組對精液保存質(zhì)量有不同程度提高。保存效果最好的為20+30 mg/L試驗組,保存5 d時精子活率、質(zhì)膜完整率、頂體完整率、T-AOC均比其他試驗組顯著提高(P0.05),且MDA顯著下降(P0.05),精子活率可達(dá)56.29%,頂體完整率高達(dá)70.03%,質(zhì)膜完整率為55.20%,線粒體活性為53.53%。在五種稀釋液配方中,“配方2”保存效果最佳,5 d時精子活率可達(dá)到45.42%,頂體完整率可達(dá)61.26%,質(zhì)膜完整率為47.24%,線粒體活性為43.3%;精子質(zhì)量檢測指標(biāo)中,精子活率與頂體完整率極顯著正相關(guān),精子活率與質(zhì)膜完整率極顯著正相關(guān);蘋果多酚與葡萄籽原花青素均能有效提高山羊精子低溫保存品質(zhì),其中蘋果多酚最適濃度為40 mg/L,5 d時精子活率可達(dá)49.31%,頂體完整率達(dá)到66.23%,質(zhì)膜完整率為49.91%,線粒體活性為49.56%;葡萄籽原花青素最適濃度為30 mg/L,5 d時精子活率為51.46%,頂體完整率為67.55%,質(zhì)膜完整率為50.97%,線粒體活性為50.78%;兩種抗氧化劑具有協(xié)同作用,其中蘋果多酚+葡萄籽原花青素最適組合濃度為20+30 mg/L,5 d時精子活率可達(dá)56.29%,頂體完整率高達(dá)70.03%,質(zhì)膜完整率為55.20%,線粒體活性為53.53%。
【學(xué)位授予單位】：西北農(nóng)林科技大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：S827
【圖文】：

Time0 10 30 50 700 87.60±1.23a87.27±1.14a87.24±1.51a87.34±1.23a87.53±1.86a1 77.11±1.31a78.80±1.13ab81.12±1.23b80.12±1.21ab78.34±1.64ab3 62.79±1.45a64.99±1.01b70.36±1.02c65.20±1.32b63.79±1.11ab5 43.19±1.44a47.37±1.04bc50.78±1.13d48.03±0.62c46.72±1.20b3.2.5 蘋果多酚與葡萄籽原花青素對低溫保存的山羊精子 T-AOC 的影響根據(jù)圖 3-1 可知，蘋果多酚濃度 40 mg/L 處理組的精子 T-AOC 最高，在保存期間均顯著高于其余各組（P<0.05），20 mg/L 處理組次之，T-AOC 在保存期間顯著高于除 40mg/L 外的其余四組（P<0.05），而 80 mg/L 處理組的精子 T-AOC 最低，在 3 d，5 d 時顯著低于其余各組（P<0.05）。葡萄籽原花青素濃度 30 mg/L 處理組的精子 T-AOC 最高，在保存期間均顯著高于其余各組（P<0.05），50 mg/L 處理組次之，T-AOC 在保存期間顯著高于除 30 mg/L 之外各試驗組（P<0.05）。其他各組之間在保存 3 d、5 d 時均有顯著差異，精子 T-AOC 含量由高到低為 50 mg/L>10 mg/L>70 mg/L>0 mg/L。

圖 3-2 不同濃度的兩種抗氧化劑對低溫保存的山羊精液 MDA 含量的影響Picture 3-2 Effects oftwo antioxidants on the concentration of MDA in goat semen3.3 討論在低溫保存過程中，精子會隨著保存時間的逐漸變長而產(chǎn)生大量的自由基。自由基是一種能獨立存在的活潑的化學(xué)實體，常見的有超氧陰離子自由基、羥自由基、一氧化氮自由基等（鄭麗芳 2007）。在機(jī)體內(nèi)，自由基對生物的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)、細(xì)胞程序性死亡、細(xì)胞分化分裂等具有重要作用。但活性氧自由基一旦過量時，則會發(fā)生氧化應(yīng)激，損傷細(xì)胞蛋白與細(xì)胞膜脂質(zhì)結(jié)構(gòu)，還會導(dǎo)致基因突變，加速細(xì)胞死亡（胡文琴等 2004）。生物膜中脂質(zhì)部分包含有大量不飽和脂肪酸，自由基對不飽和脂肪酸上的氫有很強(qiáng)的攻擊性；另外，一些金屬離子如 Fe2+等會促進(jìn)氧化作用，這些因素使得細(xì)胞膜很容易發(fā)生脂質(zhì)過氧化反應(yīng)（陳偉等 2012）。因此，精液保存過程中，當(dāng) ROS 大量積累超過一定濃度后，會攻擊含有大量不飽和脂肪酸的精子膜，使精子發(fā)生脂質(zhì)過氧化反應(yīng)。同時，ROS也會攻擊頂體膜，使頂體酶提前釋放而不能進(jìn)行頂體反應(yīng)，降低受精率，嚴(yán)重影響精子保存質(zhì)量（ Gomez et al. 1996; Agarwal et al. 2003; Gharagozloo and Aitken. 2011）。本研

果多酚與葡萄籽原花青素組合對山羊精液低溫保存 T-A1 Effects of different concentrations of apple polyphenols anocyanidinscombination on the concentration of T-AOC in go果多酚與葡萄籽原花青素組合對山羊精液低溫保存 MD2 Effects of different concentrations of apple polyphenols anocyanidinscombination on the concentration of T-AOC in go

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 鄒文輝;;冷凍精液解凍后精子質(zhì)量評估研究進(jìn)展[J];黑龍江動物繁殖;2009年05期

2 孫蕓;徐寶才;谷文英;熊曉輝;;葡萄籽原花青素聚合度與自由基清除能力關(guān)系的研究[J];食品科學(xué);2007年12期

3 孫蕓;徐寶才;谷文英;;葡萄籽原花青素抗氧化作用的研究[J];中國糧油學(xué)報;2007年06期

4 豐佃娟;徐貴發(fā);;葡萄籽提取物對人體抗氧化能力的影響[J];山東大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版);2007年10期

5 劇紅梅;曲梓怡;王召令;蘇利強(qiáng);徐明;;原花青素的抗氧化作用[J];中國組織工程研究與臨床康復(fù);2007年16期

6 潘紅梅;蔡元;王濤;張鳳鳴;陳四清;楊杰;伍林;;兩種抗菌藥對豬精液常溫保存效果的影響[J];甘肅畜牧獸醫(yī);2007年02期

7 金一;陳寵霞;王曉明;魏世寶;;含海藻糖稀釋劑增補(bǔ)EDTA對豬精子冷凍能力的影響[J];中國獸醫(yī)學(xué)報;2007年01期

8 徐振軍;任康;白桂芬;路永強(qiáng);朱士恩;;帶精漿直接稀釋法探討豬精液低溫(4°C)保存的可行性[J];廣西農(nóng)業(yè)生物科學(xué);2006年S1期

9 胡建宏;李青旺;江中良;卜書海;楊海;李剛;;海藻糖對豬精液冷凍保存效果的影響[J];畜牧獸醫(yī)學(xué)報;2006年12期

10 張樹山;李青旺;李剛;陳曉宇;胡建宏;韓增勝;王立強(qiáng);;海藻糖、蔗糖和乳糖對豬精液冷凍保護(hù)效果的影響[J];西北農(nóng)林科技大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版);2006年06期

相關(guān)博士學(xué)位論文 前2條

1 冉軍艦;蘋果多酚的組分鑒定及功能特性研究[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2013年

2 周佳勃;山羊體外受精和顯微受精及相關(guān)問題的研究[D];東北農(nóng)業(yè)大學(xué);2003年

本文編號：2802208