【摘要】：豬細(xì)小病毒(porcine parvovirus,PPV)被認(rèn)為是導(dǎo)致豬繁殖障礙的主要病原之一,其感染的臨床癥狀表現(xiàn)為SMEDI(stillbirth,mummification,embryonic death and infertility,SMEDI),即死胎,木乃伊,胚胎死亡和不育,為全球養(yǎng)豬業(yè)帶來(lái)了較為嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。近年來(lái),陸續(xù)在豬身上鑒定了幾種新型細(xì)小病毒,即PPV2至PPV7。到目前為止,所有的豬細(xì)小病毒,除PPV外,均無(wú)其他豬細(xì)小病毒成功分離的報(bào)道。國(guó)內(nèi)外對(duì)新型PPV主要是對(duì)其分子流行病學(xué)、基因序列等方面進(jìn)行研究,對(duì)于新型PPV的致病性等方面的研究知之甚少。本研究對(duì)上述七種豬細(xì)小病毒在我省的流行情況進(jìn)行了調(diào)研,并對(duì)豬細(xì)小病毒陽(yáng)性樣品進(jìn)行病毒分離,以便進(jìn)一步了解PPV在我省的流行情況及致病性。具體研究?jī)?nèi)容如下:1.PPV病原流行病學(xué)調(diào)查及病毒分離本研究運(yùn)用PCR方法對(duì)來(lái)自五個(gè)豬場(chǎng)的197份肛門(mén)拭子、五個(gè)豬場(chǎng)的197份鼻腔拭子、九個(gè)豬場(chǎng)的389份血清以及2014年-2017年采集的屠宰場(chǎng)育肥豬310份肺臟進(jìn)行PPV的病原流行病學(xué)調(diào)查。結(jié)果發(fā)現(xiàn),肛門(mén)拭子中PPV檢出率為2.5%(5/197),鼻腔拭子中PPV檢出率為2.0%(4/197),血清中PPV檢出率為1.0%(4/389),屠宰場(chǎng)育肥豬肺臟中PPV檢出率為22.9%(71/310),說(shuō)明PPV在糞便、鼻腔分泌物、血清及肺臟組織中均能檢測(cè)到,且肺臟中的檢出率極高。對(duì)PPV陽(yáng)性樣品進(jìn)行病毒分離,僅在肺臟中分離到5株P(guān)PV。2.PPV分離株NS1、VP2序列分析從肺臟中分離到的5株P(guān)PV分離株序列大小均為4435bp,分離株之間的核苷酸同源性為99.8%~100%,氨基酸核苷酸同源性在99.8%~100%。PPV NS1基因全長(zhǎng)為1989bp,編碼662個(gè)氨基酸,PPV VP2基因全長(zhǎng)為1740bp,編碼579個(gè)氨基酸。5株分離株NS1、VP2之間的核苷酸同源性、氨基酸同源性均在為97%以上,證明肺臟中分離得到的分離株非常保守。對(duì)比NS1、VP2基因進(jìn)化樹(shù)發(fā)現(xiàn),5株分離株與德國(guó)分離株親緣性最近。3.新型PPV病原流行病學(xué)調(diào)查及病毒分離本研究運(yùn)用PCR方法對(duì)兩個(gè)豬場(chǎng)共154份血清進(jìn)行新型PPV的病原流行病學(xué)調(diào)查。結(jié)果發(fā)現(xiàn),PPV2的檢出率為29.9%(46/154),PPV3的檢出率為14.3%(22/154),PPV4的檢出率為1.9%(3/154),PPV5的檢出率為8.4%(13/154),PPV6的檢出率為44.2%(68/154),PPV7的檢出率為9.1%(14/154)。在血清樣品中,PPV6的檢出率最高,其次為PPV2。大部分新型PPV最早可以在4周齡中檢測(cè)到,且新型PPV在育肥豬階段檢出率最高。對(duì)新型PPV陽(yáng)性樣品進(jìn)行病毒分離,未分離到新型PPV。
【學(xué)位授予單位】：湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：S858.28
【圖文】：

PPV的PCR擴(kuò)增結(jié)果

00；1：HuN1；2：HuN2；3：HuN3；4：HuN4；5：HuN細(xì)胞陰性對(duì)照組；7：陰性對(duì)照?qǐng)D 2-3 PPV 分離株特異性檢測(cè)結(jié)果Fig.2-3 The specificity test result of PPV isolation

A：出現(xiàn)病變 ST 細(xì)胞；B：正常 ST 細(xì)胞圖 2-2 細(xì)小病毒病毒液接種 ST 細(xì)胞產(chǎn)生的細(xì)胞病變-2 Cytopathic effect of ST cell infected with supernatant of a suspected porcine parvovstrain.2 PPV 培養(yǎng)產(chǎn)物的 PCR 檢測(cè)

【參考文獻(xiàn)】

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