【摘要】：線粒體靶向抗氧化劑Mitoquinone(MitoQ)是由三苯基磷酸正陽離子通過一條十碳脂肪鏈與呼吸鏈復(fù)合物中輔酶Q10的苯醌部分人工共價(jià)結(jié)合而成。MitoQ的三苯基磷酸陽離子使MitoQ能夠穿過線粒體膜,并在線粒體內(nèi)積聚。MitoQ還能不斷被呼吸鏈復(fù)合物II回收利用,轉(zhuǎn)變?yōu)榫哂锌寡趸钚缘妮o酶Q10。輔酶Q10在線粒體內(nèi)具有降低活性氧(ROS)水平,減少線粒體蛋白、脂質(zhì)和DNA氧化損傷等作用從而可以保護(hù)線粒體。線粒體靶向抗氧化劑MitoQ可以改變參與活性氧(ROS)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路,可用于防止線粒體氧化損傷。豬卵母細(xì)胞在玻璃化冷凍-解凍復(fù)蘇過程中發(fā)生細(xì)胞凋亡和氧化應(yīng)激損傷被認(rèn)為是影響豬卵母細(xì)胞冷凍后發(fā)育能力的主要因素,添加抗氧化劑在原理上可降低這種由冷凍-解凍造成的氧化應(yīng)激損傷。本研究通過在豬卵母細(xì)胞培養(yǎng)成熟全過程中添加MitoQ,研究其對(duì)豬卵母細(xì)胞體外發(fā)育的影響;用玻璃化冷凍技術(shù)冷凍豬卵母細(xì)胞和孤雌激活胚胎,在冷凍后復(fù)蘇孵育過程中添加線粒體靶向抗氧化劑MitoQ,研究MitoQ對(duì)豬卵母細(xì)胞體外成熟及玻璃化冷凍后抗氧化、凋亡及發(fā)育的影響。本文包括以下2部分:1、MitoQ對(duì)豬卵母細(xì)胞體外成熟和發(fā)育的影響在豬卵母細(xì)胞成熟培養(yǎng)液中添加MitoQ,通過檢測(cè)線粒體膜電位(JC-1),早期凋亡(Annexin V-FITC),脂質(zhì)氧化水平(MDA),活性氧水平(ROS),相關(guān)基因水平表達(dá)和胚胎發(fā)育,研究MitoQ對(duì)豬卵母細(xì)胞體外成熟和發(fā)育的影響。結(jié)果表明:MitoQ添加組卵母細(xì)胞的線粒體膜電位(1.66±0.06)和新鮮卵母細(xì)胞組(1.37±0.05)相比顯著提升(P0.05);MitoQ添加組卵母細(xì)胞早期凋亡率(2.72±0.62%)相比新鮮卵母細(xì)胞組(9.05±0.71%)顯著降低(P0.05);MitoQ添加組的活性氧水平(5.82±0.64)、丙二醛含量(6.07±1.17)與新鮮卵母細(xì)胞相比(13.06±0.72,10.64±0.82)顯著降低(P0.05);MitoQ添加組卵母細(xì)胞的孤雌激活卵裂率(71.99±1.15%)、囊胚率(17.70±0.80%)與新鮮卵母細(xì)胞(63.77±1.40%,囊胚率(11.25±0.67%)相比顯著提高(P0.05);在基因表達(dá)方面,與對(duì)照組相比,MitoQ添加組的Bcl-2、Cu Zn SOD、DNM1和Mfn2基因表達(dá)水平顯著提高(P0.05),Bax和TNF-α相對(duì)表達(dá)量則顯著下降(P0.05)。綜上表明,添加MitoQ培養(yǎng)豬卵母細(xì)胞能夠提高線粒體功能,降低細(xì)胞氧化應(yīng)激水平,抑制細(xì)胞凋亡和改善相關(guān)基因表達(dá)水平,從而提高冷凍后豬卵母細(xì)胞的體外發(fā)育能力。2、MitoQ對(duì)豬卵母細(xì)胞冷凍后氧化應(yīng)激損傷及凋亡的影響在卵母細(xì)胞成熟培養(yǎng)液中添加200 nmol/L MitoQ,培養(yǎng)成熟后玻璃化冷凍,解凍-復(fù)蘇和孵育液中繼續(xù)添加MitoQ,檢測(cè)孤雌激活卵裂率、囊胚率、Annexin V-FITC早期凋亡率、線粒體膜電位JC-1、丙二醛(MDA)含量、活性氧(ROS)水平和相關(guān)基因表達(dá)水平。結(jié)果顯示:卵母細(xì)胞冷凍后MitoQ處理,其線粒體膜電位(0.66±0.06)與對(duì)照組(0.47±0.05)相比顯著升高(P0.05),早期凋亡比率(43.00±3.51%)與對(duì)照組(55.33±1.45%)相比顯著下降(P0.05);冷凍后MitoQ處理卵母細(xì)胞,其活性氧水平(3.03±0.61)與脂質(zhì)氧化水平(20.54±0.91)與對(duì)照組(13.13±1.52與26.78±0.54)相比顯著下降(P0.05);冷凍后MitoQ處理卵母細(xì)胞的存活率(60.33±1.86%)、卵裂率(28.82±1.38%)和囊胚率(4.50±0.48%)與對(duì)照組組(47.67±1.67%,22.07±1.07%和2.20±0.51%)相比顯著升高(P0.05);在基因表達(dá)方面,與對(duì)照組相比,冷凍后MitoQ處理組其Bcl-2、CuZnSOD和Mfn2表達(dá)水平顯著提升(P0.05),DNM1、Bax和TNF-α相對(duì)表達(dá)量則顯著下降(P0.05)。表明:在凍后孵育液中添加MitoQ能夠提高線粒體功能,降低細(xì)胞氧化應(yīng)激水平,抑制細(xì)胞凋亡和改善相關(guān)基因表達(dá)水平,從而提高冷凍后豬卵母細(xì)胞的體外發(fā)育能力�？偨Y(jié):MitoQ能提高卵母細(xì)胞的線粒體功能,緩解細(xì)胞氧化損傷,降低細(xì)胞凋亡水平,從而起到促進(jìn)其冷凍前后體外發(fā)育能力的效果。
【學(xué)位授予單位】：上海海洋大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：S828
【圖文】：

上海海洋大學(xué)碩士學(xué)位論文圖 2-1 所示，紅色熒光與綠色熒光的比值為線粒體膜電位，復(fù)合通道下橙色亮則表明線粒體膜電位越高，MitoQ 組橙色熒光強(qiáng)度高于對(duì)照組。圖 2-2 中期凋亡的卵母細(xì)胞呈綠色熒光，MitoQ 組處理后的卵母細(xì)胞凋亡率低于對(duì)圖 2-3 中熒光強(qiáng)度越高表示 Pan-Caspase 活性越高，MitoQ 組卵母細(xì)胞熒光相比對(duì)照組顯著下降。FITC通道 RITC通道 復(fù)合通道

圖2-2 MitoQ對(duì)豬卵母細(xì)胞體外發(fā)育早期凋亡的影響ffect of MitoQ on early apoptosis of porcine oocytes in vitro developmentMitoQ組 對(duì)照組圖2-3 MitoQ對(duì)豬卵母細(xì)胞體外成熟發(fā)育總Caspase活性影響ffect of the Pan- Caspase activities in porcine oocytes after MitoQ treated

圖2-3 MitoQ對(duì)豬卵母細(xì)胞體外成熟發(fā)育總Caspase活性影響ffect of the Pan- Caspase activities in porcine oocytes after MitoQ treated豬卵母細(xì)胞體外成熟發(fā)育抗氧化能力的影響光強(qiáng)度）代表了卵母細(xì)胞內(nèi)活性氧水平。添加 MitoQ 培養(yǎng)的卵母細(xì)（ROS）5.82±0.64 顯著低于未添加 MitoQ 培養(yǎng)的卵母細(xì)胞活性氧水14

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本文編號(hào)：2802149