【摘要】：雞毒支原體(Mycoplasma gallisepticum,MG)是一種在全球范圍內(nèi)廣泛存在的,可引起禽類慢性呼吸道病的一種病原微生物,屬于支原體屬。該病感染陽性率極高,在不繼發(fā)感染的情況下死亡率較低,MG感染后,一般會(huì)引起飼料利用率降低,肉雞的體重下降,以及造成雛雞淘汰率上升,成年母雞產(chǎn)蛋率下降等問題,給養(yǎng)禽業(yè)帶來巨大的經(jīng)濟(jì)損失。臨床上常見與其他疾病混合感染或由飼養(yǎng)管理不善、環(huán)境突變等因素引起的應(yīng)激而導(dǎo)致MG的爆發(fā),對禽類養(yǎng)殖業(yè)危害極大。由于支原體沒有細(xì)胞壁結(jié)構(gòu),所以作用于細(xì)胞壁的抗生素對治療本病無效,導(dǎo)致可選擇的抗生素種類受限,加之抗生素的不合理使用,使得該病的藥物研發(fā)尤為重要。中藥組方治療是根據(jù)MG的主要發(fā)病機(jī)制,以扶正祛邪為根本,達(dá)到標(biāo)本兼治的目的,在臨床實(shí)踐中有很好的療效,成為目前MG防治藥物研發(fā)的熱點(diǎn)方向。其中,黃芩苷是提取自中藥黃芩根部的活性成分,國內(nèi)外對該藥物的研究十分重視�，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)的大量研究表明黃芩苷具有明顯的抗炎作用,能夠有效抑制炎癥反應(yīng)的發(fā)生。對于黃芩苷作用機(jī)制的研究可以促進(jìn)該藥物的進(jìn)一步發(fā)展及其在MG感染治療方面的應(yīng)用。本研究首先根據(jù)已有的MG感染模型的建立方法,利用被廣泛認(rèn)可的四種評價(jià)手段(SPA評分、格羅斯氣囊病變評分、氣管病變評分、氣管黏膜厚度),對四種不同的感染方式(滴鼻點(diǎn)眼感染、氣囊接種感染、混合感染、氫化可的松誘導(dǎo)感染)進(jìn)行平行比較。結(jié)果顯示以5×10~9CCU/mL的MG R株菌液用氣囊接種的方法感染7日齡雛雞,能夠在感染后5 d觀察到MG感染的典型臨床癥狀,病程發(fā)展速度適中,適合用于本研究的后續(xù)治療試驗(yàn)。在黃芩苷治療試驗(yàn)中,用確立好的MG感染模型構(gòu)建方法,根據(jù)其病程發(fā)展特點(diǎn),于感染后第三天開始將黃芩苷混于水中飼喂治療,劑量為1.5 g/只·d,持續(xù)7 d。分別于飲水飼喂治療后1、4、7 d剖檢采樣,采用ELISA、透射電鏡和Western Blot、Real Time-PCR等分子生物學(xué)技術(shù),探討黃芩苷對MG感染造成的炎癥相關(guān)基因表達(dá)的影響以及在TLR2/NF-κB通路中p65蛋白扮演的角色。病理學(xué)和超微結(jié)構(gòu)觀察結(jié)果:通過病理學(xué)臨床表現(xiàn)的格羅斯氣囊病變評分、氣管病變評分和SPA評分可見在經(jīng)過黃芩苷混水飼喂治療7 d后能夠降低靶器官受到的組織損傷,病變程度明顯減輕,且有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。利用透射電鏡觀察肺和氣管細(xì)胞的超微結(jié)構(gòu)時(shí)可以看到,MG感染組氣管部位纖毛細(xì)胞固縮退化,脫落壞死。肺部組織中,肺泡Ⅰ型上皮細(xì)胞損傷嚴(yán)重,胞質(zhì)破碎。黃芩苷治療組主要表現(xiàn)為纖毛腫脹,頂端形成蘑菇狀水腫泡,有纖毛相互融合的現(xiàn)象,肺泡Ⅰ型上皮細(xì)胞損傷明顯減輕。由此可見黃芩苷治療試驗(yàn)可以有效改善MG感染所帶來的組織和細(xì)胞炎癥損傷。炎癥相關(guān)因子和p65蛋白的表達(dá)結(jié)果:感染后4 d,MG感染組與空白對照組相比經(jīng)ELISA試劑盒檢測炎性因子IL-1β、TNF-α表達(dá)量明顯升高;Western Blot檢測TLR2和P-p65蛋白含量同樣顯著升高(P0.05)并于感染后7 d達(dá)到峰值,此時(shí)IL-1β、TNF-αmRNA的表達(dá)量也呈現(xiàn)出爆發(fā)性增長(P0.01);感染后10 d,炎性因子和相關(guān)蛋白表達(dá)量有所下降。相比較于MG感染組,黃芩苷治療組在給藥1、4、7 d后,炎性因子IL-1β、TNF-α表達(dá)量顯著下降(P0.01)且相應(yīng)蛋白TLR2和P-p65的表達(dá)量也明顯低于MG感染組。綜上,本試驗(yàn)在評價(jià)四種雞毒支原體感染方式的基礎(chǔ)上,用濃度為5×10~9 CCU/mL的MG R株菌液0.2 mL以氣囊接種的方式感染7日齡雛雞的模型進(jìn)行黃芩苷抗MG感染作用及機(jī)理的研究。結(jié)果表明,黃芩苷能夠通過抑制MG感染時(shí)炎性因子IL-1β、TNF-α的釋放,干預(yù)MG感染造成的炎癥損傷。同時(shí),黃芩苷也能夠通過抑制p65蛋白的磷酸化,干預(yù)TLR2-NFκB信號(hào)通路的活化,進(jìn)而影響炎性因子的表達(dá)。
【學(xué)位授予單位】：東北農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：S853.7
【圖文】：

.1.3 四種感染方法中雛雞組織病理學(xué)的差異.1.3.1 格羅斯氣囊病變評分如圖 3-2，從格羅斯氣囊病變的結(jié)果可以看到，感染后 3、5、7 d，E 組相對于對照組極顯著（P＜0.01），D 組在感染 5、7 d 時(shí)表現(xiàn)出極顯著的差異（P＜0.01）并且 C 組隨著的增加也表現(xiàn)出顯著的差異（P＜0.05）。B 組滴鼻點(diǎn)眼的方式并沒有與對照組有很大不P＞0.05）。組間進(jìn)行比較時(shí)我們發(fā)現(xiàn)對于格羅斯氣囊病變評分這項(xiàng)，D、E 兩組在同一天果沒有明顯差異，而 C 組氣囊評分接種隨著天數(shù)的增加，與 D、E 的差異性在逐漸縮小

圖 3-3 模型試驗(yàn)中氣管病變評分Fig. 3-3 Mean tracheal lesion score in different models .如圖 3-4，氣管黏膜厚度的測定方法是取中段氣管，切片讀數(shù)選擇視野下，上、下、左、右四個(gè)區(qū)域計(jì)算黏膜厚度，后計(jì)算氣管黏膜平均厚度。我們可以看到感染后 3、5 d，D 和 兩組相比較于其它組別表現(xiàn)出明顯差異性（P＜0.05）。感染后七天組間差異不顯著（P＞0.05）

圖 3-3 模型試驗(yàn)中氣管病變評分Fig. 3-3 Mean tracheal lesion score in different models .如圖 3-4，氣管黏膜厚度的測定方法是取中段氣管，切片讀數(shù)選擇視野下，上、下、左右四個(gè)區(qū)域計(jì)算黏膜厚度，后計(jì)算氣管黏膜平均厚度。我們可以看到感染后 3、5 d，D 和兩組相比較于其它組別表現(xiàn)出明顯差異性（P＜0.05）。感染后七天組間差異不顯著（P＞0.05

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本文編號(hào)：2801575