【摘要】：Ⅰ亞群禽腺病毒(FAVI)主要引起的病癥是雞類的包涵體肝炎(IBH),是一種急性傳染病[1]。最近在我國(guó)部分地區(qū)出現(xiàn)大批量死亡病例,剖檢以心包積液、肝炎為特征性病變,稱為雞心包積液-肝炎綜合征(雞安卡拉病)。安卡拉病的病毒與I亞群禽腺病毒4型具有相近的遺傳進(jìn)化關(guān)系[2]。近年來(lái),包涵體肝炎和安卡拉病在我國(guó)發(fā)病一直呈上升趨勢(shì),給我國(guó)雞類養(yǎng)殖業(yè)造成了嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。因此,本研究根據(jù)我國(guó)現(xiàn)包涵體肝炎和安卡拉病的流行現(xiàn)狀,篩選了三株Ⅰ亞群禽腺病毒的流行血清型標(biāo)準(zhǔn)毒株和一株安卡拉病病毒制備四價(jià)油乳劑滅活苗,其對(duì)以上兩種疾病的防治和禽類養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展有著重要的應(yīng)用價(jià)值。本研究從雞場(chǎng)采集疑似感染了安卡拉病的病雞心臟和肝臟,將樣品處理后經(jīng)卵黃囊途徑接種7日齡的雞胚,收獲雞胚尿囊液傳代培養(yǎng)。通過(guò)PCR技術(shù)鑒定,共分離得到4株病毒,針對(duì)其Hexon基因序列進(jìn)行擴(kuò)增,與Genbank中已發(fā)布的Ⅰ亞群禽腺病毒各血清型Hexon基因序列進(jìn)行比對(duì)。結(jié)果表明,4株病毒均與Ⅰ亞群禽腺病毒4型屬于同一分支,有非常高的同源性。將4株病毒接種SPF肉雞,攻毒雞群的發(fā)病情況和解剖情況與自然感染安卡拉病的發(fā)病雞一致。選取本實(shí)驗(yàn)室保存的3株Ⅰ亞群禽腺病毒標(biāo)準(zhǔn)毒株,與安卡拉病毒按1:1:1:2比例制成四價(jià)油乳劑滅活苗,并檢測(cè)疫苗注射后機(jī)體抗體水平的變化情況,為預(yù)防該兩種疾病的發(fā)生和流行提供科學(xué)依據(jù)。選�、駚喨呵菹俨《�(FAV-2,FAV-5,FAV-8)和安卡拉病毒,經(jīng)SPF雞胚卵黃囊途徑和雞胚原代肝細(xì)胞接種病毒,擴(kuò)增得到種毒,測(cè)試各株種毒的雞胚半數(shù)感染量,組織半數(shù)感染量,病毒粒子濃度,最佳滅活濃度和最佳滅活時(shí)間。經(jīng)甲醛完全滅活后,制備四價(jià)油乳劑滅活苗。對(duì)疫苗的物理性狀,無(wú)菌檢驗(yàn),免疫安全性,最小免疫劑量,免疫效果及抗體水平的變化進(jìn)行檢驗(yàn)。結(jié)果顯示,FAV-2、FAV-5、FAV-8、JS201501 雞胚半數(shù)感染量分別10-5.25/0.2 mL、10-667/0.2mL、10-6.48/0.2mL、10-5.67/0.2mL,組織半數(shù)感染量分別為 10-5 75/0.1 mL、10-767/0.1 mL、10-7.25/0.1 mL、10-6.37/0.1 mL,實(shí)時(shí)熒光定量PCR測(cè)得病毒粒子濃度分別為105.086 copies/μL,106.304copies/μL,105.371 copies/μL,104.560copies/μL。建議甲醛滅活終濃度為 0.15%,滅活時(shí)間為24小時(shí),經(jīng)試驗(yàn)確定疫苗為油包水劑型,粘度和穩(wěn)定性等性狀均符合要求,無(wú)菌檢驗(yàn)合格。接種7日齡的自孵化SPF雞,注射疫苗后均無(wú)不良反應(yīng),安全性良好,最小接種劑量為0.4mL/只。接種疫苗兩周后開(kāi)始檢測(cè)其抗體水平,結(jié)果顯示疫苗接種后第4周抗體水平達(dá)到峰值,隨后抗體水平開(kāi)始迅速下降。免疫攻毒保護(hù)性試驗(yàn)結(jié)果顯示,本疫苗對(duì)各病毒的臨床保護(hù)率為100%,能夠預(yù)防相應(yīng)病毒的感染。
【學(xué)位授予單位】：揚(yáng)州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：S858.31
【圖文】：

接科

２．１．４電鏡觀察結(jié)果逡逑將純化后的病毒液吸取一滴吸附于銅網(wǎng)上靜置１０邋ｍｉｎ，用吸水紙吸干殘液，２邋％的磷逡逑鶴酸常規(guī)染色ｌＯｍｉｎ，在Ｔｅｃｎａｉｌ２透射電鏡下觀察，并記錄拍照（圖２－３）。逡逑＿逡逑圖２－３透射電鏡觀察結(jié)果逡逑Ｆｉｇ．２－３邋ＴＥＭ邋ｏｂｓｅｒｖａｔｉｏｎ邋ｒｅｓｕｌｔ逡逑２．１．５邋Ｈｅｘｏｎ基因擴(kuò)X椊峁義暇校茫依┰觶裳僑呵菹儼《荊齲澹錚罨潁碇悄旱纈競(jìng)蠓直鸕玫教醮笮≡嘉義希保玻保梗猓鷙停保常擔(dān)埃猓鸕哪康奶醮ㄍ跡玻常�，与预普V峁嗤�。使用胶回蕩ぜs梁謝厥漳康奶蹂義洗炕蟮模模危斂鎪捅ι錒こ蹋ù罅┯邢薰靜廡頡ｅ義

本文編號(hào)：2800807