發(fā)布時間：2020-08-21 11:55

【摘要】：口蹄疫(foot-and-mouth disease,FMD)由口蹄疫病毒(foot-and-mouth disease virus,FMDV)引起的一種烈性、急性和高度傳染性疾病,主要感染羊、牛、豬等偶蹄動物。FMDV感染宿主細(xì)胞拮抗宿主免疫應(yīng)答,進(jìn)而得以在宿主細(xì)胞內(nèi)進(jìn)行大量復(fù)制。在抵抗病毒早期感染過程當(dāng)中,天然免疫處于非常關(guān)鍵的位置,是宿主抵御病毒入侵的第一道防線。TPL2(tumor progression locus 2)是一種絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶,屬于MAP3K蛋白激酶家族,又稱大阪甲狀腺癌激酶(Cancer Osaka thyroid,Cot)或絲裂原活化蛋白激酶激酶激酶8(MAPK kinase kinase 8,MAP3K8),可以在調(diào)控宿主干擾素和細(xì)胞因子的產(chǎn)生,在天然免疫和適應(yīng)性免疫過程中扮演重要角色。TPL2在病毒、細(xì)菌和寄生蟲等病原感染中發(fā)揮重要作用。為探索TPL2與FMDV是否具有相互作用,通過免疫共沉淀和間接熒光免疫實驗發(fā)現(xiàn),FMDV的結(jié)構(gòu)蛋白VP1和VP2以及非結(jié)構(gòu)蛋白L和宿主蛋白TPL2互作。熒光素酶實驗證實,過表達(dá)TPL2可促進(jìn)IRF3介導(dǎo)的IFN-β信號通路活化并且呈現(xiàn)劑量依賴性;通過瞬時轉(zhuǎn)染過表達(dá)TPL2,發(fā)現(xiàn)TPL2能夠促進(jìn)IRF3的磷酸化。構(gòu)建TPL2一系列的關(guān)鍵性功能位點突變的突變體,隨后通過轉(zhuǎn)染驗證其表達(dá);將TPL2(T290A)突變體轉(zhuǎn)染到HEK293T細(xì)胞時發(fā)現(xiàn),其對IRF3介導(dǎo)的IFN-β信號通路無活化作用。同時將FMDV的VP1質(zhì)粒和TPL2質(zhì)粒共同轉(zhuǎn)染,熒光素酶實驗表明VP1對TPL2介導(dǎo)的IRF3激活I(lǐng)FN-β信號通路有明顯抑制作用;隨后將VP1和TPL2共轉(zhuǎn),之后轉(zhuǎn)染Poly(I:C),通過qRCR檢測分析,發(fā)現(xiàn)VP1和TPL2共轉(zhuǎn)能夠抑制TPL2介導(dǎo)的下游多個干擾素刺激基因的mRNA水平。轉(zhuǎn)染不同劑量的VP1,發(fā)現(xiàn)VP1僅僅抑制TPL2的Thr~(290)蛋白的表達(dá)。本研究表明TPL2能夠通過增強磷酸化IRF3進(jìn)而上調(diào)IRF3激活的IFN-β信號通路,同時TPL2的磷酸化位點Thr~(290)是TPL2介導(dǎo)IRF3激活I(lǐng)FN-β信號通路的關(guān)鍵性位點。FMDV VP1可以通過抑制TPL2在Thr~(290)位點發(fā)生磷酸化進(jìn)而抑制TPL2的這一生物學(xué)功能。此外,TPL2與FMDV結(jié)構(gòu)蛋白VP2和非結(jié)構(gòu)蛋白L相互作用背后潛在的分子機制尚不清楚,將是我們?nèi)蘸笱芯康姆较蚝椭攸c。本研究為從病毒蛋白和宿主蛋白兩個層面揭示FMDV致病機制積累了資料,為進(jìn)一步了解FMDV蛋白和宿主互作的分子機制奠定了理論基礎(chǔ)。
【學(xué)位授予單位】：中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：S852.65
【圖文】：

圖 1.1 FMDV 的基因組的示意圖和多聚蛋白切割成熟的過程(Mason, et al.,2003)gure 1.1 Schematic diagram of the FMDV genome and the process of cleaving polyprotein into maturaDV 5’-UTR 的堿基數(shù)量約為 1300 個，有 5 個功能元件在病毒繁殖中發(fā)揮作用，3合到其末端。5’-UTR 中占比例最大的是 S 片段，包含約 360 個堿基，并折疊成

4A．TPL2 蛋白全長；B．TPL2 激酶結(jié)構(gòu)域圖 1.2 TPL2 蛋白結(jié)構(gòu)示意圖(Xu, et al.,2018)A.Schematic of the full-length TPL2 protein; B. Kinase domain of TPLFigure 1.2 Schematic diagram of TPL-2 protein structure

圖 1.3 TPL2 激活和信號通路圖(Xu,2018)Figure 1.3 TPL2 activation and signaling pathway疫中起著關(guān)鍵的作用，在調(diào)節(jié) TNF-α，Toll 樣受體和 Gugioukalaki,2011)。TPL2 通過促進(jìn) ERK 依賴性誘導(dǎo) c-f

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1 陳博;;羊口蹄疫的發(fā)生、鑒別診斷及防治[J];農(nóng)民致富之友;2019年08期

2 ;二○○○年口蹄疫情[J];科技檔案;2001年01期

3 任陽陽;;口蹄疫的診斷和防治措施[J];甘肅畜牧獸醫(yī);2017年12期

4 陳偉;;�？谔阋叩脑\斷方法和防治措施分析[J];農(nóng)技服務(wù);2017年22期

5 王子健;;牛羊口蹄疫的診斷和防控措施[J];當(dāng)代畜禽養(yǎng)殖業(yè);2018年02期

6 林夕香;劉平平;;羊口蹄疫綜合防治[J];中國畜禽種業(yè);2018年03期

7 郭永能;;淺析黃山羊口蹄疫的診斷與防治[J];畜禽業(yè);2018年04期

8 關(guān)東萍;;關(guān)于牛口蹄疫防治措施的思考[J];農(nóng)民致富之友;2018年05期

9 吳芳;;羊口蹄疫病預(yù)防研究[J];飼料博覽;2018年05期

10 王樂;;口蹄疫病毒感染后宿主的反應(yīng)[J];今日畜牧獸醫(yī);2017年01期

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2 劉文銘;楊寶琳;王明霞;周國輝;于力;;A型口蹄疫病毒保守的構(gòu)象型中和表位的鑒定[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會生物技術(shù)學(xué)分會暨中國免疫學(xué)會獸醫(yī)免疫分會第十二次學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2016年

3 祁光宇;智曉瑩;任維維;黃銀軍;牟克斌;劉學(xué)榮;王宇;蔣韜;;檢測O型口蹄疫病毒的膠體金免疫層析法的建立[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會生物制品學(xué)分會中國微生物學(xué)會獸醫(yī)微生物學(xué)專業(yè)委員會2010年學(xué)術(shù)年會（第三屆中國獸藥大會學(xué)術(shù)論壇）論文集[C];2010年

4 楊彬;蘭喜;殷相平;李學(xué)瑞;李寶玉;方玉萍;柳紀(jì)省;;口蹄疫病毒雙效疫苗載體的構(gòu)建及其體外表達(dá)研究[A];2008年中國微生物學(xué)會學(xué)術(shù)年會論文摘要集[C];2008年

5 張虎;鄭從義;;宿主細(xì)胞轉(zhuǎn)錄調(diào)控在口蹄疫病毒持續(xù)感染中的關(guān)鍵作用[A];2012年湖北生物產(chǎn)業(yè)發(fā)展高端論壇暨湖北省生物工程學(xué)會2012年度學(xué)術(shù)交流會論文匯編[C];2012年

6 魯會軍;金寧一;鄭敏;韓松;張洪勇;李昌;金擴世;;A型口蹄疫病毒多表位基因的表達(dá)[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會家畜傳染病學(xué)分會第六屆理事會第二次會議暨教學(xué)專業(yè)委員會第六屆代表大會論文集[C];2006年

7 呂平;陳會敏;趙京楊;曾翠平;徐在言;吳健;伍曉雄;戴漢川;;豬α、β、γ干擾素抗口蹄疫病毒的初步研究[A];全國動物生理生化第十次學(xué)術(shù)交流會論文摘要匯編[C];2008年

8 丁壯;趙鳳琴;楊霞;謝靜;曹雪峰;曹政;;O型口蹄疫病毒VP1基因的克隆及其原核表達(dá)[A];第五屆全國人畜共患病學(xué)術(shù)研討會論文摘要集[C];2017年

9 趙付榮;�；菔|;解銀麗;劉澤眾;邵軍軍;李揚帆;張永光;;口蹄疫病毒感染宿主外周血單個核細(xì)胞的轉(zhuǎn)錄組學(xué)研究[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會生物技術(shù)學(xué)分會暨中國免疫學(xué)會獸醫(yī)免疫分會第十二次學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2016年

10 黃紅亮;陳煥春;金梅林;覃雅麗;;用抗O型口蹄疫病毒的單克隆抗體建立雙抗夾心ELISA方法[A];豬的重要傳染病防治研究新成果——中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會家畜傳染病學(xué)分會第五屆理事會第二次全體會議暨防檢疫專業(yè)委員會第7次學(xué)術(shù)交流會論文集[C];2002年

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3 本報記者 劉垠;狙擊動物疫病災(zāi)害 三十年拼搏不辱使命[N];科技日報;2017年

4 江南雪舞;談?wù)効谔阋卟《綶N];大眾衛(wèi)生報;2005年

5 劉曄;“山羊絨洗凈因素對口蹄疫病毒影響”通過鑒定[N];中國國門時報;2008年

6 記者 胡積康;口蹄疫嚇壞南共市[N];新華每日電訊;2000年

7 記者 黃興偉;口蹄疫肆虐英國 生豬業(yè)前景黯淡[N];新華每日電訊;2001年

8 記者 鄭u&春;歐盟預(yù)防口蹄疫最嚴(yán)厲措施出臺[N];新華每日電訊;2001年

9 趙世隆;威脅人類健康的口蹄疫[N];中國醫(yī)藥報;2000年

10 蒲昭和;從口蹄疫流行談“生物入侵”[N];中國醫(yī)藥報;2001年

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1 方卉;基于單細(xì)胞技術(shù)研究口蹄疫病毒感染和宿主細(xì)胞EBP基因的關(guān)系[D];武漢大學(xué);2015年

2 白萬富;基于牛和馬鼻咽部的RNA-seq揭示其感染口蹄疫病毒的機制[D];內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué);2018年

3 郭慧琛;O型口蹄疫病毒多基因DNA疫苗的研制[D];中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2004年

4 易建中;抗A型口蹄疫病毒和O型口蹄疫病毒重組雙價多肽疫苗研究[D];復(fù)旦大學(xué);2005年

5 赫冬梅;豬瘟和口蹄疫病毒抗原基因在植物內(nèi)的重組與表達(dá)[D];浙江大學(xué);2005年

6 洪琦;口蹄疫—偽狂犬病二價與口蹄疫—豬細(xì)小—偽狂犬病三價基因工程疫苗的研究[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2005年

7 冉波;O型口蹄疫病毒VP1表位重組蛋白疫苗的功能研究[D];吉林大學(xué);2006年

8 陳維灶;RNAi抑制口蹄疫病毒復(fù)制與感染的相關(guān)研究[D];復(fù)旦大學(xué);2006年

9 任林柱;口蹄疫病毒反向遺傳技術(shù)體系及分子標(biāo)記疫苗株的構(gòu)建[D];吉林大學(xué);2007年

10 王冬梅;口蹄疫病毒VP1及多抗原表位基因在植物表達(dá)的研究[D];華南熱帶農(nóng)業(yè)大學(xué);2007年

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1 魏彪;豬瘟和口蹄疫病毒結(jié)構(gòu)蛋白轉(zhuǎn)基因奶山羊的制備[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2018年

2 侯立婷;豬O型口蹄疫病毒細(xì)菌樣顆粒載體疫苗的初步研究[D];安徽農(nóng)業(yè)大學(xué);2017年

3 崔穎磊;A型口蹄疫結(jié)構(gòu)蛋白VP1可溶性表達(dá)及O型口蹄疫結(jié)構(gòu)蛋白的融合表達(dá)[D];河南農(nóng)業(yè)大學(xué);2018年

4 陳飛;口蹄疫病毒3C蛋白多克隆抗體的制備與鑒定[D];山東農(nóng)業(yè)大學(xué);2018年

5 王凱玲;豬源microRNA-1307抑制口蹄疫病毒復(fù)制的分子機理研究[D];中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2018年

6 魏南南;口蹄疫病毒VP1抑制TPL2介導(dǎo)的IRF3磷酸化功能研究[D];中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2018年

7 陳冬冬;口蹄疫病毒VP3定點突變體的構(gòu)建及其生物學(xué)特性和免疫血清學(xué)研究[D];中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2018年

8 高雅;熱穩(wěn)定性O(shè)型口蹄疫基因工程病毒的構(gòu)建及其特性分析[D];中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2018年

9 張淑敏;口蹄疫病毒VP2蛋白誘導(dǎo)細(xì)胞自噬的分子機制研究[D];中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2018年

10 王世杰;O型口蹄疫病毒抗體高通量液相阻斷CLIA方法的建立[D];江南大學(xué);2018年

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