【摘要】：口蹄疫(foot-and-mouth disease,FMD)由口蹄疫病毒(foot-and-mouth disease virus,FMDV)引起的一種烈性、急性和高度傳染性疾病,主要感染羊、牛、豬等偶蹄動物。FMDV感染宿主細胞拮抗宿主免疫應答,進而得以在宿主細胞內進行大量復制。在抵抗病毒早期感染過程當中,天然免疫處于非常關鍵的位置,是宿主抵御病毒入侵的第一道防線。TPL2(tumor progression locus 2)是一種絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶,屬于MAP3K蛋白激酶家族,又稱大阪甲狀腺癌激酶(Cancer Osaka thyroid,Cot)或絲裂原活化蛋白激酶激酶激酶8(MAPK kinase kinase 8,MAP3K8),可以在調控宿主干擾素和細胞因子的產生,在天然免疫和適應性免疫過程中扮演重要角色。TPL2在病毒、細菌和寄生蟲等病原感染中發(fā)揮重要作用。為探索TPL2與FMDV是否具有相互作用,通過免疫共沉淀和間接熒光免疫實驗發(fā)現,FMDV的結構蛋白VP1和VP2以及非結構蛋白L和宿主蛋白TPL2互作。熒光素酶實驗證實,過表達TPL2可促進IRF3介導的IFN-β信號通路活化并且呈現劑量依賴性;通過瞬時轉染過表達TPL2,發(fā)現TPL2能夠促進IRF3的磷酸化。構建TPL2一系列的關鍵性功能位點突變的突變體,隨后通過轉染驗證其表達;將TPL2(T290A)突變體轉染到HEK293T細胞時發(fā)現,其對IRF3介導的IFN-β信號通路無活化作用。同時將FMDV的VP1質粒和TPL2質粒共同轉染,熒光素酶實驗表明VP1對TPL2介導的IRF3激活IFN-β信號通路有明顯抑制作用;隨后將VP1和TPL2共轉,之后轉染Poly(I:C),通過qRCR檢測分析,發(fā)現VP1和TPL2共轉能夠抑制TPL2介導的下游多個干擾素刺激基因的mRNA水平。轉染不同劑量的VP1,發(fā)現VP1僅僅抑制TPL2的Thr~(290)蛋白的表達。本研究表明TPL2能夠通過增強磷酸化IRF3進而上調IRF3激活的IFN-β信號通路,同時TPL2的磷酸化位點Thr~(290)是TPL2介導IRF3激活IFN-β信號通路的關鍵性位點。FMDV VP1可以通過抑制TPL2在Thr~(290)位點發(fā)生磷酸化進而抑制TPL2的這一生物學功能。此外,TPL2與FMDV結構蛋白VP2和非結構蛋白L相互作用背后潛在的分子機制尚不清楚,將是我們日后研究的方向和重點。本研究為從病毒蛋白和宿主蛋白兩個層面揭示FMDV致病機制積累了資料,為進一步了解FMDV蛋白和宿主互作的分子機制奠定了理論基礎。
【學位授予單位】：中國農業(yè)科學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：S852.65
【圖文】：

圖 1.1 FMDV 的基因組的示意圖和多聚蛋白切割成熟的過程(Mason, et al.,2003)gure 1.1 Schematic diagram of the FMDV genome and the process of cleaving polyprotein into maturaDV 5’-UTR 的堿基數量約為 1300 個，有 5 個功能元件在病毒繁殖中發(fā)揮作用，3合到其末端。5’-UTR 中占比例最大的是 S 片段，包含約 360 個堿基，并折疊成

4A．TPL2 蛋白全長；B．TPL2 激酶結構域圖 1.2 TPL2 蛋白結構示意圖(Xu, et al.,2018)A.Schematic of the full-length TPL2 protein; B. Kinase domain of TPLFigure 1.2 Schematic diagram of TPL-2 protein structure

圖 1.3 TPL2 激活和信號通路圖(Xu,2018)Figure 1.3 TPL2 activation and signaling pathway疫中起著關鍵的作用，在調節(jié) TNF-α，Toll 樣受體和 Gugioukalaki,2011)。TPL2 通過促進 ERK 依賴性誘導 c-f

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本文編號：2799345