【摘要】：哺乳動(dòng)物卵母細(xì)胞的成熟包含染色質(zhì)凝聚和分離等一系列復(fù)雜的生理事件,這些生理事件可能與組蛋白的甲基化修飾密切相關(guān)。組蛋白H3第4位賴氨酸三甲基化(Histone H3K4 trimethylation,H3K4me3)與轉(zhuǎn)錄激活相關(guān),組蛋白 H3第9位賴氨酸三甲基化(Histone H3K9 trimethylation,H3K9me3)抑制基因表達(dá),兩種甲基化修飾的表達(dá)均受組蛋白甲基轉(zhuǎn)移酶和去甲基轉(zhuǎn)移酶的調(diào)控。毛殼素可特異性抑制組蛋白甲基轉(zhuǎn)移酶SUV39H1/2和G9A基因的表達(dá),降低H3K9me3水平。CPI-455是組蛋白去甲基轉(zhuǎn)移酶KDM5A和KDM5B的特異性抑制劑,可提高細(xì)胞中H3K4me3的表達(dá)。本研究采用毛殼素和CPI-455處理豬卵母細(xì)胞,分析相關(guān)基因表達(dá)的變化,了解組蛋白三甲基化修飾的改變對(duì)豬卵母細(xì)胞體外成熟和早期胚胎發(fā)育的影響,研究結(jié)果為深入了解組蛋白甲基化修飾在豬卵母細(xì)胞體外成熟的作用奠定基礎(chǔ)。1、調(diào)控H3K9me3表達(dá)對(duì)豬卵母細(xì)胞體外成熟和早期胚胎發(fā)育的影響。豬卵母細(xì)胞體外成熟0-22 h添加不同濃度毛殼素處理,結(jié)果顯示,與未處理組相比,2 nM毛殼素處理顯著提高了豬卵母細(xì)胞體外成熟率、4-細(xì)胞率和囊胚率(81.5%VS 72.62%,74.43%VS 68.69%,40.43%VS 27.48%,P0.05)。在不同時(shí)間段采用毛殼素處理時(shí)發(fā)現(xiàn),22-44 h和0-44 h分別添加毛殼素時(shí),各組之間卵裂率、4-細(xì)胞率、囊胚率及囊胚細(xì)胞總數(shù)均無(wú)顯著差異(P0.05)。與未處理組相比,0-44h添加5nM毛殼素處理的成熟率顯著提高(87.39%VS 71.95%,P0.05)。免疫熒光結(jié)果表明,H3K9me3在GV期卵母細(xì)胞中有表達(dá),在培養(yǎng)22 h以后的卵母細(xì)胞中無(wú)表達(dá)。與未處理組相比,0-22 h添加2 nM毛殼素處理可顯著降低囊胚中H3K9me3的表達(dá)(P0.5)。qRT-PCR結(jié)果表明,與未處理組相比,0-22h添加2nM毛殼素處理的卵母細(xì)胞中SUV39H1/2和G9A表達(dá)整體降低,囊胚中Nanog、Oct4、CDX2表達(dá)顯著提高(P0.05),囊胚細(xì)胞總數(shù)無(wú)差異(P0.05)。2、調(diào)控H3K4me3表達(dá)對(duì)豬卵母細(xì)胞體外成熟和早期胚胎發(fā)育的影響。豬卵母細(xì)胞體外成熟0-22 h添加不同濃度CPI-455處理,結(jié)果表明,與未處理組相比,5 μM處理顯著提高了豬卵母細(xì)胞體外成熟率和囊胚率(88.82%VS 78.20%,41.84%VS 28.4%,P0.05)。豬卵母細(xì)胞體外成熟不同時(shí)間段添加CPI-455處理時(shí)發(fā)現(xiàn),與未處理組和1 μM處理組相比,在體外成熟22-44 h添加5μM 處理的2-細(xì)胞率顯著降低(84.94%,86.34%VS 74.15%,P0.05);體外成熟0-44h添加CPI-455時(shí)發(fā)現(xiàn),各組之間的第一極體排出率、2-細(xì)胞率、4-細(xì)胞率、囊胚率和囊胚細(xì)胞總數(shù)均無(wú)顯著差異(P0.05)。免疫熒光結(jié)果顯示,與未處理組相比,0-22 h添加5 μM處理顯著了提高囊胚中H3K4me3的表達(dá)(P0.05)。qRT-PCR結(jié)果發(fā)現(xiàn),與未處理組相比,0-22 h添加5 μM處理降低了卵母細(xì)胞中KDM5A和KDM5B的表達(dá)(P0.05),顯著提高了囊胚中Nanog、Oct4、CDX2等多能性基因的表達(dá)(P0.05),囊胚細(xì)胞總數(shù)無(wú)差異(P0.05)。體外成熟0-22h同時(shí)添加毛殼素和CPI-455處理對(duì)卵母細(xì)胞體外成熟率和早期胚胎發(fā)育率無(wú)顯著影響(P0.05)。以上結(jié)果表明,適宜濃度的毛殼素、CPI-455處理可通過(guò)降低豬卵母細(xì)胞中SUV39H1/2和G9A、KDM5A和KDM5B基因的表達(dá),上調(diào)囊胚中多能性基因的表達(dá),進(jìn)而提高豬卵母細(xì)胞體外成熟率和早期胚胎發(fā)育率。
【學(xué)位授予單位】：廣西大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：S828
【圖文】：

卵母細(xì)胞成熟的影響逡逑，組蛋白甲基化對(duì)早期胚胎發(fā)育和胚胎千細(xì)胞多能性的干細(xì)胞早期分化階段，Ｈ３Ｋ４ｍｅ３和Ｈ３Ｋ２７ｍｅ３對(duì)多能性表達(dá)具有重要的調(diào)控作用［４７］。在哺乳動(dòng)物卵母細(xì)胞減數(shù)要作用。組蛋白修飾的中斷會(huì)導(dǎo)致有缺陷的染色體凝聚卵母細(xì)胞老化［４８］。豬卵母細(xì)胞生長(zhǎng)階段，組蛋白Ｈ３在卵泡發(fā)育至竇腔期在Ｋ９位點(diǎn)發(fā)生甲基化。卵母細(xì)胞開(kāi)Ｓ１０位點(diǎn)發(fā)生磷酸化，隨著染色體濃縮，在Ｋ９、Ｋ１４、Ｋ母細(xì)胞活化之后，隨著染色體的去凝集，組蛋白Ｈ３再上研究表明組蛋白尾修飾的調(diào)節(jié)可以控制多種細(xì)胞功能，腫瘤形成以及對(duì)ＤＮＡ損傷的反應(yīng)和修復(fù)所必需的基因Ｈ３Ｋ９ｍｅ３以及相關(guān)甲基化和去甲基化酶在卵母細(xì)胞成重要的調(diào)控作用。逡逑ＮＨ，邋Ｎｌｌ，＠邋ＮＨ）後！＞？Ｈ＇邐ＫＨ，邐ＮＨ，邐ＮＨ．＾邐叫瘦邋ＮＨ，珍逡逑今通今．．x�？丨丨偪？今巧？丨？＋ＧG＂幔鄭擼у�、‘荽辶x

本文編號(hào)：2795835