發(fā)布時(shí)間：2020-08-15 20:31

【摘要】：為了滿足人們對(duì)動(dòng)物性蛋白質(zhì)的高需求,提高豬的瘦肉率、降低皮下脂肪積累成為生產(chǎn)者的重要任務(wù);同時(shí),為了保證肉品質(zhì),又需要在肌肉中沉積適當(dāng)?shù)闹�。脂肪代謝在其中發(fā)揮了關(guān)鍵的作用。在分子水平上研究脂肪代謝的基因表達(dá)調(diào)控可以為解決以上問(wèn)題提供理論基礎(chǔ)。肝臟是脂肪代謝的重要場(chǎng)所,肝臟脂肪代謝相關(guān)基因表達(dá)調(diào)控的紊亂可導(dǎo)致諸如脂肪沉積、高血糖等病變,誘發(fā)非酒精性脂肪肝等嚴(yán)重疾病。m6A甲基化可對(duì)基因表達(dá)產(chǎn)生重要影響。研究表明m6A甲基化與脂肪代謝調(diào)控密切相關(guān),而小鼠高脂營(yíng)養(yǎng)誘導(dǎo)的脂肪肝的m6A甲基化修飾圖譜尚未有研究報(bào)道。另外,m6A甲基化可介導(dǎo)RNA的翻譯調(diào)控,有證據(jù)表明,翻譯調(diào)控占整個(gè)基因表達(dá)調(diào)控幅度的一半以上。故本研究使用小鼠肝臟作為模型,利用MeRIP-seq和RNC-seq,探究高脂營(yíng)養(yǎng)條件對(duì)小鼠肝臟的m6A甲基化模式和正在翻譯的mRNA的影響,試圖找出與肝臟脂肪代謝調(diào)控相關(guān)的重要靶點(diǎn)。結(jié)果顯示,相比于對(duì)照組,高脂組的小鼠肝臟顯示出了 m6A甲基化模式的改變,甲基化差異基因在脂質(zhì)代謝、翻譯等相關(guān)重要生物學(xué)過(guò)程中顯著富集。差異表達(dá)的RNC-mRNA在晝夜節(jié)律、脂質(zhì)代謝等重要生物學(xué)過(guò)程中顯著富集。這些甲基化差異基因和差異表達(dá)的RNC-mRNA編碼基因可作為候選基因,為下一步的研究奠定基礎(chǔ)。
【學(xué)位授予單位】：廣西大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：S816;Q75
【圖文】：

接著與ｍ６Ａ抗體進(jìn)行解育，ｍ６Ａ抗體便在ｍＲＮＡ上的ｍ６Ａ位點(diǎn)與ｍＲＮＡ結(jié)合逡逑在了一起，然后將含有ｍ６Ａ位點(diǎn)的ｍＲＮＡ富集出來(lái)，構(gòu)建ｃＤＮＡ文庫(kù)，最后進(jìn)行高通逡逑量測(cè)序。其原理簡(jiǎn)圖如圖１－１［３１】所示。經(jīng)過(guò)與參考基因組比對(duì)等相關(guān)生物信息學(xué)分析，逡逑最后可以得到全轉(zhuǎn)錄組水平的ｍ６Ａ修飾圖譜。不過(guò)這種方法只能達(dá)到１００邋ｍ左右的分逡逑辨率，無(wú)法達(dá)到單堿基分辨率的要求，即無(wú)法檢測(cè)出單個(gè)堿基上的ｍ６Ａ的具體位置。逡逑３逡逑

序稱為ＲＮＣ－ｓｅｑ，由于與核糖體足跡測(cè)序（ｒｉｂｏｓｏｍｅ邋ｐｒｏｆｉｌｉｎｇ，Ｒｉｂｏ－ｓｅｑ）相比，可以測(cè)逡逑到全長(zhǎng)的正在翻譯的ｍＲＮＡ，所以又叫全長(zhǎng)翻譯組測(cè)序。ＲＮＣ－ｓｅｑ與ＲＮＡ－ｓｅｑ相比，逡逑操作步驟只是多了一步提�。遥危茫恚遥危恋倪^(guò)程，如圖１－２［９９］所示。逡逑８逡逑

３．邋１高脂飼養(yǎng)對(duì)小鼠血糖濃度和肝臟甘油三酯水平的影響逡逑經(jīng)過(guò)８周的飼養(yǎng)，對(duì)照組和高脂組小鼠的血糖濃度呈現(xiàn)出顯著的差異（ｐ＜邋０．０５），逡逑高脂組相比對(duì)照組血糖濃度上升約１．５倍（見(jiàn)圖３－１），表明高脂飼喂對(duì)小鼠血糖代謝逡逑具有顯著的影響。對(duì)小鼠肝臟冰凍切片的油紅０染色結(jié)果顯示，高脂組小鼠肝臟細(xì)胞積逡逑累了大量脂肪（見(jiàn)圖３－２邋Ａ）。對(duì)肝臟甘油三酯含量的測(cè)定顯示，高脂組小鼠肝臟甘油三酯逡逑水平相比對(duì)照組提升約４倍（見(jiàn)圖３－２邋Ｂ），說(shuō)明肝臟脂肪大量沉積。逡逑２．0ｉ逡逑Ｓ邐＊逡逑ｉｉｌｉｌ逡逑ＣＫ邐ＨＦＤ逡逑圖３－１喂養(yǎng)８周后對(duì)照組和高脂組小鼠的相對(duì)血糖濃度逡逑注：ＣＫ，對(duì)照組；ＨＦＤ，高脂組。＊表示ｐ＜０．０５。逡逑Ｆｉｇｕｒｅ邋３－１邋Ｒｅｌａｔｉｖｅ邋ｂｌｏｏｄ邋ｇｌｕｃｏｓｅ邋ｌｅｖｅｌｓ邋ｉｎ邋ｍｉｃｅ邋ａｆｔｅｒ邋８邋ｗｅｅｋｓ邋ｏｆ邋ｆｅｅｄｉｎｇ邋ｏｆ邋ｎｏｒｍａｌ邋ｃｈｏｗ邋ｏｒ邋ａｎ邋ＨＦＤ逡逑Ｎｏｔｅ：邋ＣＫ，邋ｃｏｎｔｒｏｌ邋ｇｒｏｕｐ；邋ＨＦＤ，邋ｈｉｇｈ－ｆａｔ邋ｄｉｅｔ邋ｇｒｏｕｐ．邋＊ｐ邋＜邋０．０５．逡逑１９逡逑

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前7條

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本文編號(hào)：2794607