發(fā)布時(shí)間：2020-08-13 02:21

【摘要】：旨在預(yù)測并驗(yàn)證調(diào)節(jié)FoxO1基因表達(dá)的關(guān)鍵miRNAs及其調(diào)節(jié)脂肪分化的機(jī)制。本研究利用4個(gè)在線軟件預(yù)測與FoxO1基因具有潛在靶標(biāo)關(guān)系的miRNAs。用雙熒光素酶報(bào)告系統(tǒng)檢測熒光活性。用熒光定量PCR、Western blotting和油紅O染色,分別在mRNA和蛋白水平上檢測miRNA對FoxO1表達(dá)的影響以及對綿羊前體脂肪細(xì)胞分化的調(diào)節(jié)作用。結(jié)果表明,miR-142和miR-144與FoxO1具有靶標(biāo)關(guān)系。過表達(dá)miR-142和miR-144顯著抑制了雙熒光素酶報(bào)告載體的熒光活性,下調(diào)了FoxO1mRNA(P0.01)及其編碼蛋白的表達(dá)(P0.05)。miR-142和miR-144均可促進(jìn)綿羊前體脂肪細(xì)胞分化,加快脂滴形成。由此證明,miR-142和miR-144靶向負(fù)調(diào)節(jié)FoxO1的表達(dá),進(jìn)而通過FoxO1對PPARγ的負(fù)調(diào)節(jié)促進(jìn)綿羊前體脂肪細(xì)胞的分化。
【圖文】：

Ⅲ，ＵＳＡ）進(jìn)行方差分析。各表達(dá)量的柱形圖用Ｇｒａｐｈ－ＰａｄＰｒｉｓｍ５．０（ＧｒａｐｈＰａｄＳｏｆｔｗａｒｅＩｎｃ，ＳａｎＤｉｅ－ｇｏ，ＣＡ，ＵＳＡ）繪制。２結(jié)果２．１預(yù)測的與ＦｏｘＯ１具有靶標(biāo)關(guān)系的ｍｉＲＮＡｓ用ＴａｒｇｅｔＳｃａｎ、ＰＩＴＡ、ＳｔａｒＢａｓｅ和ｍｉＲａｎｄａ在線軟件，預(yù)測出與ＦｏｘＯ１具有靶標(biāo)關(guān)系的ｍｉＲＮＡｓ分別有１５、７０、４８和４２個(gè)。用Ｖｅｎｎｙ２．１．０取交集，結(jié)果如圖１所示�？梢�，４個(gè)軟件共同預(yù)測出６個(gè)ｍｉＲＮＡｓ，分別為ｍｉＲ－１８３、ｍｉＲ－９６、ｍｉＲ－１４４、ｍｉＲ－１５３、ｍｉＲ－３７４、ｍｉＲ－１４２。經(jīng)ＰｕｂＭｅｄ數(shù)據(jù)庫檢索，發(fā)現(xiàn)ｍｉＲ－９６、ｍｉＲ－１８３、ｍｉＲ－１５３和ｍｉＲ－３７４這４個(gè)ｍｉＲＮＡｓ與ＦｏｘＯ１的靶標(biāo)關(guān)系已得到驗(yàn)證。于是，本研究以ｍｉＲ－１４２和ｍｉＲ－１４４為研究對象。ｍｉＲ－１４２種子區(qū)序列（２～７）堿基與ＦｏｘＯ１－３′ＵＴＲ第２５２４～２５２９個(gè)堿基完全互補(bǔ)。ｍｉＲ－１４４種子區(qū)序列（２～８）堿基與ＦｏｘＯ１－３′ＵＴＲ第２６７９～２６８５個(gè)堿基完全互補(bǔ)。在ＴａｒｇｅｔＳｃａｎ中，ｍｉＲ－１４２的綜合排序高于ｍｉＲ－１４４。這些結(jié)果一方面在理論上說明ｍｉＲ－１４２和ｍｉＲ－１４４與ＦｏｘＯ１具有靶標(biāo)關(guān)系，另一方面也說明，二者在ＦｏｘＯ１－３′ＵＴＲ上的結(jié)合位點(diǎn)很近。２．２驗(yàn)證的與ＦｏｘＯ１具有靶標(biāo)關(guān)系的

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2 曾芳;丘德峰;童雄;徐建;王

本文編號：2791375