【摘要】：旨在預測并驗證調(diào)節(jié)FoxO1基因表達的關(guān)鍵miRNAs及其調(diào)節(jié)脂肪分化的機制。本研究利用4個在線軟件預測與FoxO1基因具有潛在靶標關(guān)系的miRNAs。用雙熒光素酶報告系統(tǒng)檢測熒光活性。用熒光定量PCR、Western blotting和油紅O染色,分別在mRNA和蛋白水平上檢測miRNA對FoxO1表達的影響以及對綿羊前體脂肪細胞分化的調(diào)節(jié)作用。結(jié)果表明,miR-142和miR-144與FoxO1具有靶標關(guān)系。過表達miR-142和miR-144顯著抑制了雙熒光素酶報告載體的熒光活性,下調(diào)了FoxO1mRNA(P0.01)及其編碼蛋白的表達(P0.05)。miR-142和miR-144均可促進綿羊前體脂肪細胞分化,加快脂滴形成。由此證明,miR-142和miR-144靶向負調(diào)節(jié)FoxO1的表達,進而通過FoxO1對PPARγ的負調(diào)節(jié)促進綿羊前體脂肪細胞的分化。
【圖文】：

Ⅲ，ＵＳＡ）進行方差分析。各表達量的柱形圖用Ｇｒａｐｈ－ＰａｄＰｒｉｓｍ５．０（ＧｒａｐｈＰａｄＳｏｆｔｗａｒｅＩｎｃ，ＳａｎＤｉｅ－ｇｏ，ＣＡ，ＵＳＡ）繪制。２結(jié)果２．１預測的與ＦｏｘＯ１具有靶標關(guān)系的ｍｉＲＮＡｓ用ＴａｒｇｅｔＳｃａｎ、ＰＩＴＡ、ＳｔａｒＢａｓｅ和ｍｉＲａｎｄａ在線軟件，預測出與ＦｏｘＯ１具有靶標關(guān)系的ｍｉＲＮＡｓ分別有１５、７０、４８和４２個。用Ｖｅｎｎｙ２．１．０取交集，結(jié)果如圖１所示�？梢�，４個軟件共同預測出６個ｍｉＲＮＡｓ，分別為ｍｉＲ－１８３、ｍｉＲ－９６、ｍｉＲ－１４４、ｍｉＲ－１５３、ｍｉＲ－３７４、ｍｉＲ－１４２。經(jīng)ＰｕｂＭｅｄ數(shù)據(jù)庫檢索，發(fā)現(xiàn)ｍｉＲ－９６、ｍｉＲ－１８３、ｍｉＲ－１５３和ｍｉＲ－３７４這４個ｍｉＲＮＡｓ與ＦｏｘＯ１的靶標關(guān)系已得到驗證。于是，本研究以ｍｉＲ－１４２和ｍｉＲ－１４４為研究對象。ｍｉＲ－１４２種子區(qū)序列（２～７）堿基與ＦｏｘＯ１－３′ＵＴＲ第２５２４～２５２９個堿基完全互補。ｍｉＲ－１４４種子區(qū)序列（２～８）堿基與ＦｏｘＯ１－３′ＵＴＲ第２６７９～２６８５個堿基完全互補。在ＴａｒｇｅｔＳｃａｎ中，ｍｉＲ－１４２的綜合排序高于ｍｉＲ－１４４。這些結(jié)果一方面在理論上說明ｍｉＲ－１４２和ｍｉＲ－１４４與ＦｏｘＯ１具有靶標關(guān)系，另一方面也說明，二者在ＦｏｘＯ１－３′ＵＴＲ上的結(jié)合位點很近。２．２驗證的與ＦｏｘＯ１具有靶標關(guān)系的

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本文編號：2791375