【摘要】：塞尼卡谷病毒(SVV)作為一種無(wú)囊膜的單股正鏈RNA病毒,屬小RNA病毒科(Picornaviridae)塞尼卡病毒屬(Senecavirus),目前所知其為唯一成員。主要引起豬鼻吻、冠狀帶、蹄部水皰樣病變和新生仔豬死亡,偶見(jiàn)腹瀉癥狀。SVV全基因組約7.2 kb,主要編碼4個(gè)結(jié)構(gòu)蛋白(VP1、VP2、VP3、VP4)和7個(gè)非結(jié)構(gòu)蛋白(2A、2B、2C、3A、3B、3C、3D),其中VP1作為小RNA病毒科免疫原性最強(qiáng)的蛋白,發(fā)揮著重要的作用。2015年,我國(guó)廣東省某豬場(chǎng)突然暴發(fā)了豬水皰性疾病,臨床表現(xiàn)為感染豬只鼻部和口腔形成潰瘍、厭食、跛行,新生仔豬急性死亡,經(jīng)證實(shí)是感染SVV所致。2017年,在甘肅蘭州某豬場(chǎng)相繼發(fā)生水皰性疾病。本研究從該豬場(chǎng)采集相關(guān)病料樣品,采用PCR方法擴(kuò)增SVV的VP1基因,表明該該病料為SVV陽(yáng)性。將病料接種PK-15細(xì)胞后分離到1株SVV,命名為CH-LZ-2017。此外基于VP1基因構(gòu)建SVV種系發(fā)育樹(shù),表明CH-LZ-2017與CH-HN-2017親緣關(guān)系最近,但與部分美國(guó)分離的毒株在VP1基因上存在明顯差異。SVV感染豬后與口蹄疫、豬水泡病、水泡性口炎、豬水皰疹等疾病一樣能使豬發(fā)生水皰性病變,如果不能及時(shí)作出準(zhǔn)確的鑒別診斷,將無(wú)法對(duì)豬群采取正確的防控措施,將導(dǎo)致豬群生產(chǎn)性能下降、增加養(yǎng)殖成本。為建立一種靈敏、特異的SVV檢測(cè)方法,本研究針對(duì)SVV高度保守的3D區(qū)域設(shè)計(jì)了一對(duì)引物和探針,建立了SVV的qRT-PCR檢測(cè)方法。研究結(jié)果表明經(jīng)傳統(tǒng)RT-PCR和qRT-PCR鑒定均為陽(yáng)性的組織樣品,qRT-PCR鑒定時(shí)Cq值12~32.3個(gè)循環(huán)。組織樣品只能通過(guò)qRT-PCR鑒定出陽(yáng)性結(jié)果的Cq值范圍27.6~36.8循環(huán)。本研究建立qRT-PCR提高了檢測(cè)SVV的靈敏性和特異性,為今后我國(guó)對(duì)SVV的快速鑒別診斷提供技術(shù)支持。
【學(xué)位授予單位】：甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：S852.65
【圖文】：

（1）將鑒定為陽(yáng)性的重組質(zhì)粒送到上海生工進(jìn)行測(cè)序。將測(cè)序結(jié)LAST 檢索。（2）應(yīng)用 MEGA5.0 軟件分別進(jìn)行全基因組的系統(tǒng)發(fā)育分析，采用法（Neighbor-Joining）構(gòu)建進(jìn)化樹(shù)，并用 Bootstrap 值來(lái)評(píng)估進(jìn)化樹(shù)的可3 結(jié)果與分析3.1 SVV 的分離與鑒定.1.1 SVV 的分離當(dāng) SVV 在 PK-15 細(xì)胞盲傳至 8 代時(shí)，接毒 1d 后，部分細(xì)胞脫面；在接毒 2d 后，細(xì)胞病變達(dá) 80%以上，呈現(xiàn)規(guī)律性的細(xì)胞病變（見(jiàn)

Fig.1.2 PPK -15 cells were inoculated with suspected samplesV 的鑒定K-15 細(xì)胞連續(xù)盲傳 6 代疑似塞內(nèi)卡谷病毒病料的病毒液（標(biāo)F4，F(xiàn)5 和 F6）提取 mRNA，采用 RT-RCR 方法，擴(kuò)增塞內(nèi)，結(jié)果表明擴(kuò)增片段大小約為 1000bp，與預(yù)期相符，而陰性帶（見(jiàn)圖 2）。1，F(xiàn)2，F(xiàn)3，F(xiàn)4，F(xiàn)5 和 F6 測(cè)序結(jié)果在 NCBI 中進(jìn)行 BLAS疑似病料為塞內(nèi)卡谷病毒，且其與 Senecavirus A isolate CH最近（見(jiàn)圖 3）

Fig.1.2 PPK -15 cells were inoculated with suspected samples3.1.2 SVV 的鑒定將 PK-15 細(xì)胞連續(xù)盲傳 6 代疑似塞內(nèi)卡谷病毒病料的病毒液（標(biāo)記為 F1，F(xiàn)2，F(xiàn)3，F(xiàn)4，F(xiàn)5 和 F6）提取 mRNA，采用 RT-RCR 方法，擴(kuò)增塞內(nèi)卡谷病毒VP1 基因，結(jié)果表明擴(kuò)增片段大小約為 1000bp，與預(yù)期相符，而陰性對(duì)照未見(jiàn)到擴(kuò)增條帶（見(jiàn)圖 2）。將 F1，F(xiàn)2，F(xiàn)3，F(xiàn)4，F(xiàn)5 和 F6 測(cè)序結(jié)果在 NCBI 中進(jìn)行 BLAST 檢索，結(jié)果表明疑似病料為塞內(nèi)卡谷病毒，且其與 Senecavirus A isolate CH-HN-2017親緣關(guān)系最近（見(jiàn)圖 3）

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前3條

1 Muhammad Abubakar;Muhammad Javed Arshed;Qurban Ali;Manzoor Hussain;;Spatial Trend of Foot and Mouth Disease Virus (FMDV) Serotypes in Cattle and Buffaloes, Pakistan[J];Virologica Sinica;2012年05期

2 ;Immune Potential of a Novel Multiple-epitope Vaccine to FMDV Type Asia 1 in Guinea Pigs and Sheep[J];Virologica Sinica;2011年03期

3 覃倚瑩;吳暉;肖性龍;余以剛;劉冬梅;李曉鳳;唐語(yǔ)謙;;選擇性富集沙門(mén)氏菌、副溶血弧菌和霍亂弧菌的共增菌培養(yǎng)基SVV[J];生物工程學(xué)報(bào);2009年10期

本文編號(hào)：2791380